一种用橄榄苦甙制备羟基酪醇的方法
【专利摘要】本发明公开一种用橄榄苦甙制备羟基酪醇的方法。该方法是将橄榄苦甙用水溶解后，加入脂肪分解酶酶解，酶解液离心或过滤除杂后过大孔树脂柱，先用10～25℃水洗柱，再用50～60℃水洗脱，洗脱液浓缩后干燥，制得羟基酪醇。本发明水解时采用脂肪分解酶，避免了使用酸或碱时，容易对产品引入污染和产生的废液污染环境的问题；而且酶解过程耗时短，效率更高，更适合工业生产；洗柱和洗脱时用水进行，比采用有机溶剂更节约成本，更环保，产品的收率和含量更高。
【专利说明】一种用橄榄苦甙制备羟基酪醇的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种用橄榄苦甙制备羟基酪醇的方法。
【背景技术】
[0002]羟基酪醇(Hydroxytyrosol),又名3，4_ 二羟基苯乙醇,是一种天然小分子酹类化合物。羟基酪醇在油橄榄叶中的含量甚微，约为0.2%~0.7%。但由于其表现出诸多的生物活性，如抗氧化、抗炎、抗菌、抗癌、保护心血管系统和降血糖等，尤其是抗氧化活性，使其被认为是最具清除自由基的天然抗氧化剂之一，其对自由基清除率是槲皮素的2倍，表儿茶酸的3倍之多。因此羟基酪醇可广泛应用于美容、保健品、医药和农业等诸多领域。
[0003]目前羟基酪醇的生产方法主要是从洗涤橄榄果的废水中或橄榄果榨油后的残渣中提取。然而，天然存在的羟基酪醇的量普遍较低，大多数文献报道羟基酪醇主要是通过水解橄榄苦苷来制备。例如党建章、侯金星、黄志斌等发表于2011年6月第34卷第6期的《中药材》中的文章《盐酸水解橄榄苦苷粗提物制备羟基酪醇》指出，用盐酸水解橄榄苦苷制备羟基酪醇的方法工艺简单，转化率高，经济实用。又如谢普军、黄立新、张彩虹等发表于2013年8月第44卷第15期的《中药材》中的文章《碱水解橄榄苦苷制备羟基酪醇及其抗氧化活性研究》指出，羟基酪醇的制备在碱性条件下产率较高，且具有较好的抗氧化活性。但这些利用酸或碱水解来制备羟基酪醇的方法，会很容易将污染引入产品中，产生的废液还会对环境造成污染；如果用萃取的方法提取或提纯，不仅会消耗大量的有机溶剂，也会对产品引入污染。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是提供一种用橄榄苦甙制备羟基酪醇的方法，该方法耗时短，效率闻，经济环保，可获得闻收率和闻品质的羟基酿醇。
`[0005]为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案:
[0006]一种用橄榄苦甙制备羟基酪醇的方法，是将橄榄苦甙用水溶解后，加入脂肪分解酶酶解，酶解液离心或过滤除杂后过大孔树脂柱，先用10~25°c水洗柱，再用50~60°C水洗脱，洗脱液浓缩后干燥，制得羟基酪醇。
[0007]酶解时，脂肪分解酶加入量和酶解时间，会因酶活性、橄榄苦甙的纯度和水加入量的不同而有一定的差异。以市场上常规活性的脂肪分解酶和常见的高纯度橄榄苦甙为酶解反应的基础，更为优选的用橄榄苦甙制备羟基酪醇的方法，包括以下步骤:
[0008]I)将橄榄苦甙用4~5倍重量的水溶解后，加入橄榄苦甙重量1%。~3%。的脂肪分解酶，酶解30~40分钟；
[0009]2)将酶解液离心或过滤除杂，然后过大孔树脂柱，先用10~25°C水洗柱，再用50~60°C水洗脱，洗脱液浓缩后干燥，制得羟基酪醇。
[0010]上述方法中:
[0011]步骤I)中，所述橄榄苦甙是由橄榄叶提取制得的提取物；由橄榄叶提取橄榄苦甙的方法，可参考本 申请人:在先申请的申请号为201310312833.7的中国专利申请，该申请公开的方法制得的橄榄苦甙纯度可达95%以上，用于进一步制备羟基酪醇的效果更好。
[0012]步骤I)中，所述脂肪分解酶的最佳加入量为橄榄苦甙重量的2%0。
[0013]步骤I)中，所述酶解是在室温条件下进行，加入脂肪分解酶后搅拌均匀即可进行。
[0014]步骤2)中，所述大孔树脂柱可选用市场上常见大孔树脂柱，例如型号为D-101或D-102的大孔树脂柱。[0015]步骤2)中，除杂后的酶解液的上柱流速为0.5~1.0BV/h。
[0016]步骤2)中，所述10~25°C水的水洗量为0.8~1.2BV，优选为1BV，水洗流速则为
0.5 ~1.0BV/ho
[0017]步骤2)中，所述50~60°C水洗脱时的流速为0.5~1.0BV/h。
[0018]步骤2)中，所述浓缩的过程为:于55~65°C的条件下将洗脱液浓缩至12~15波美。
[0019]步骤2)中，所述干燥的方式优选为冷冻干燥。
[0020]和现有技术相比，本发明具有以下优点:
[0021]1、本发明水解时采用脂肪分解酶，避免了使用酸或碱时，容易对产品引入污染和产生的废液污染环境的问题；而且酶解过程仅为30~40分钟，时间大大缩短，效率更高，更适合工业生产；
[0022]2、洗柱和洗脱时用水进行，比采用有机溶剂更节约成本，更环保，产品收率可达到23%~25%和含量可达到95%~99%，产品的收率和含量高。
【具体实施方式】
[0023]下面以实施例作进一步描述，但本发明不局限于这些实施例。
[0024]实施例1
[0025]I)将橄榄苦甙(含量98%)用4.5倍重量的水溶解后，加入橄榄苦甙重量2%。的脂肪分解酶，搅拌均匀，室温下酶解35分钟；
[0026]2)将酶解液离心除杂，然后过D-101大孔树脂柱，先用20°C水洗柱，水洗量为1BV，流速为0.8BV/h,再用55°C水洗脱，流速为0.8BV/h,洗脱液于60°C的条件下浓缩至13波美后，冷冻干燥，制得羟基酪醇；经检测羟基酪醇含量为99%，收率为24.5%。
[0027]实施例2
[0028]I)将橄榄苦甙(含量95%)用4.5倍重量的水溶解后，加入橄榄苦甙重量3%。的脂肪分解酶，搅拌均匀，室温下酶解30分钟；
[0029]2)将酶解液离心除杂，然后过D-102大孔树脂柱，先用20°C水洗柱，水洗量为
1.2BV，流速为0.5BV/h，再用55°C水洗脱，流速为1.0BV/h，洗脱液于55°C的条件下浓缩至14波美后，冷冻干燥，制得羟基酪醇；经检测羟基酪醇含量为98.1%，收率为23.2%。
[0030]实施例3
[0031]I)将橄榄苦甙(含量96%)用5倍重量的水溶解后，加入橄榄苦甙重量I %。的脂肪分解酶，搅拌均匀，室温下酶解35分钟；
[0032]2)将酶解液过滤除杂，然后过D-101大孔树脂柱，先用25°C水洗柱，水洗量为
0.8BV，流速为0.7BV/h，再用60°C水洗脱，流速为0.5BV/h，洗脱液于60°C的条件下浓缩至15波美后，冷冻干燥，制得羟基酪醇；经检测羟基酪醇含量为95%，收率为24.2%。
[0033]实施例4
[0034]I)将橄榄苦甙(含量99%)用4倍重量的水溶解后，加入橄榄苦甙重量2%。的脂肪分解酶，搅拌均匀，室温下酶解40分钟；
[0035]2)将酶解液离心除杂，然后过D-101大孔树脂柱，先用10°C水洗柱，水洗量为1BV，流速为1.0BV/h,再用50°C水洗脱，流速为0.7BV/h,洗脱液于65°C的条件下浓缩至12波美后，冷冻干燥，制得羟基酪醇；经检测羟基酪醇含量为97.4%，收率为25%。
[0036]实施例5
[0037]I)将橄榄苦甙(含量95% )用4倍重量的水溶解后，加入橄榄苦甙重量I %。的脂肪分解酶，搅拌均匀，室温下酶解30分钟；
[0038]2)将酶解液过滤除杂，然后过D-102大孔树脂柱，先用25°C水洗柱，水洗量为
1.2BV，流速为1.0BV/h，再用60°C水洗脱，流速为0.5BV/h，洗脱液于55°C的条件下浓缩至12波美后，冷冻干燥，制得羟基酪醇；经检测羟基酪醇含量为98%，收率为25%。
【权利要求】
1.一种用橄榄苦甙制备羟基酪醇的方法，其特征在于:将橄榄苦甙用水溶解后，加入脂肪分解酶酶解，酶解液离心或过滤除杂后过大孔树脂柱，先用10~25°c水洗柱，再用50~60°C水洗脱，洗脱液浓缩后干燥，制得羟基酪醇。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤: 1)将橄榄苦甙用4~5倍重量的水溶解后，加入橄榄苦甙重量1%。~3%。的脂肪分解酶，酶解30~40分钟； 2)将酶解液离心或过滤除杂，然后过大孔树脂柱，先用10~25°C水洗柱，再用50~60°C水洗脱，洗脱液浓缩后干燥，制得羟基酪醇。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:除杂后的酶解液的上柱流速为0.5~1.0BV/ho
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:所述10~25°C水的水洗量为0.8~1.2BV，水洗流速为0.5~1.0BV/ho
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:所述50~60°C水洗脱时的流速为0.5~1.0BV/ho
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述浓缩的过程为:于55~65°C的条件下将洗脱液浓缩至12~15波美。
7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:所述酶解是在室温条件下进行。
8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:所述干燥的方式为冷冻干燥。
9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:所述橄榄苦甙是由橄榄叶提取制得的提取物。
10.根据权利要求2所述的方法，其特征在于:所述大孔树脂柱的型号为D-101或D-102。
【文档编号】C12P7/22GK103571890SQ201310518499
【公开日】2014年2月12日 申请日期:2013年10月28日 优先权日:2013年10月28日
【发明者】蒋元勇, 文继承, 朱昂辉, 易华, 李丽金, 雍小军 申请人:桂林茗兴生物科技有限公司