一种提高地衣芽胞杆菌外源蛋白分泌水平的方法与流程

文档序号:12712603阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种提高地衣芽胞杆菌外源蛋白分泌水平的方法,其特征在于,具体包括以下步骤:

S1,构建信号肽肽酶SppA整合载体,导入地衣芽胞杆菌中,通过同源单双交换,过表达信号肽肽酶SppA,从而得到地衣芽胞杆菌整合菌株;

S2,将外源蛋白的表达质粒电转入S1所述地衣芽胞杆菌整合菌株中,从而得到地衣芽胞杆菌外源蛋白表达菌株;

S3,将S2所述地衣芽胞杆菌外源蛋白表达菌株于种子培养基中进行活化,得到活化的种子液;

S4,将S3中所述种子液于相应外源蛋白液体发酵培养基中进行发酵,即可提高所述外源蛋白分泌水平。

2.根据权利要求2所述的一种提高地衣芽胞杆菌外源蛋白分泌水平的方法,其特征在于,过表达地衣芽胞杆菌中信号肽肽酶SppA的具体步骤为:

1)采用PCR的方法扩增出信号肽肽酶sppA基因所需的上下游同源臂;

2)所述上下游同源臂片段回收纯化后,进行SOE-PCR并回收纯化,酶切,并与相同酶酶切的整合表达质粒T2(2)-Ori连接,并进行PCR验证,得到信号肽肽酶SppA整合载体;

3)将所述信号肽肽酶SppA整合载体转入地衣芽胞杆菌中。

3.根据权利要求2中所述提高地衣芽胞杆菌外源蛋白分泌水平的方法,其特征在于,所述地衣芽胞杆菌为地衣芽胞杆菌BL10,所述地衣芽胞杆菌BL10保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC),保藏编号为CCTCC NO:M2013400。

4.根据权利要求3所述的一种提高地衣芽胞杆菌外源蛋白分泌水平的方法,其特征在于,所述信号肽肽酶sppA基因的DNA序列表为序列表中的SEQ ID NO:1。

5.根据根据权利要求1所述的一种提高地衣芽胞杆菌外源蛋白分泌水平的方法,其特征在于,所述外源蛋白包括淀粉酶、纳豆激酶、甘露聚糖酶中的一种。

6.根据权利要求5所述的一种提高地衣芽胞杆菌外源蛋白分泌水平的方法,其特征在于,所述淀粉酶、纳豆激酶、甘露聚糖酶的液体发酵培养基分别对应为淀粉酶液体发酵培养基、纳豆激酶液体发酵培养基和甘露聚糖酶液体发酵培养基。

7.一种根据权利要求6所述方法中的淀粉酶液体发酵培养基,其特征在于,所述淀粉酶液体发酵培养基的成分为:5~8g/L玉米浆;5~8g/L酵母粉;6~12g/L蛋白胨;8~14g/L柠檬酸钠;2~3g/L一水合磷酸氢二钾;0.5~2g/L七水合硫酸镁及余量的水;所述淀粉酶液体发酵培养基pH 7.0~7.2。

8.一种根据权利要求6所述方法中的纳豆激酶液体发酵培养基,其特征在于,所述纳豆激酶液体发酵培养基的成分为:10~30g/L葡萄糖;5~20g/L蛋白胨;10~25g/L酵母粉;5~15g/L大豆蛋白胨;5~12g/L氯化钠;3~12g/L硫酸铵及余量的水;所述纳豆激酶液体发酵培养基pH 7.0~7.2。

9.一种根据权利要求6所述方法中的甘露聚糖酶液体发酵培养基,其特征在于,所述甘露聚糖酶液体发酵培养基的成分为:15~30g/L魔芋粉;15~35g/L豆粕;3~8g/L玉米浆;3~8g/L硫酸铵;1~3g/L一水合磷酸二氢钾及余量的水;所述甘露聚糖酶液体发酵培养基pH 7.0~7.4。

10.根据权利要求5所述的一种提高地衣芽胞杆菌外源蛋白分泌水平的方法,其特征在于,所述淀粉酶的表达质粒为pHY-amyL;所述纳豆激酶的表达质粒为pP3SacCNK;所述甘露聚糖酶的表达质粒为pHY-manA。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1