Ca6抗原特异性细胞毒性偶联物及其应用方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及鼠抗-CA6糖表位（glycotope)单克隆抗体及其人源化或表面重构形 式（humanized or resurfaced versions)。本发明也涉及抗-CA6糖表位单克隆抗体的表 位结合片段（epitope-binding fragments)，以及抗-CA6糖表位单克隆抗体的人源化或表 面重构形式的表位结合片段。
[0002] 本发明进一步涉及包含细胞结合剂和细胞毒性剂的细胞毒性偶联物，包含所述偶 联物的治疗组合物，应用所述偶联物来抑制细胞生长和治疗疾病的方法，及包含所述细胞 毒性偶联物的试剂盒。具体而言，细胞结合剂为识别并结合CA6糖表位的单克隆抗体或其 表位结合片段，或其人源化或表面重构形式。
【背景技术】
[0003] 对开发特异性地破坏目标癌细胞而不伤害周围的、非癌细胞和组织的抗癌治疗剂 已经有很多的尝试。这样的治疗剂有潜力极大改善人类患者中癌症的治疗。
[0004] -个有前景的方法是连接细胞结合剂例如单克隆抗体与细胞毒性药物（Sela等， 在 Immunoconjugates 189_216(C.Vogel，ed· 1987) ;Ghose 等，在 Targeted Drugs 1_22(Ε· Goldberg，ed. 1983) ;Diener 等，在 Antibody mediated delivery systems 1-23(J. RodwelI, ed. 1988) ;Pietersz 等，在 Antibody mediated delivery systems 25-53(J. Rodwell，ed. 1988) ;Bumol 等，在六111:;[130(17 1116(11&七6(1(161;[￥6^878七61118 55-79(]\ Rodwell，ed. 1988)。取决于对细胞结合剂的选择，基于在这样的细胞的表面上所表达的分 子的表达情况，这些细胞毒性偶联物可以被设计为仅仅识别和结合特定类型癌细胞。
[0005] 细胞毒性药物，例如甲氨蝶呤、柔红霉素、阿霉素、长春新碱、长春碱、美法仑、丝裂 霉素 C和苯丁酸氮芥已被用在这样的细胞毒性偶联物中，其被连接到各种鼠单克隆抗体 上。在一些情形中，药物分子通过中间载体分子被连接到抗体分子上，中间载体分子例如血 清白蛋白（Garnett 等，46Cancer Res. 2407-2412 (1986) ;0hkawa 等，23 Cancer Tmmunol. Immunother. 81-86 (1986) ;Endo 等，47Cancer Res. 1076-1080 (1980))、葡聚糖（Hurwitz 等，2 Appl.Biochem. 25-35 (1980) ;Manabi 等，34 Biochem. Pharmacol. 289-291 (1985); Dillman 等，46 Cancer Res. 4886-4891 (1986) ;Shoval 等，85?1'〇。.似1:1.八。已(1· Sci. 8276-8280 (1988))、或聚谷氨酸（Tsukada 等，73 J. Natl. Cane. Inst. 721-729 (1984); Kato 等，27 J.Med.Chem. 1602-1607(1984) Jsukada 等，52 fc.J. Cancer 111-116(1985))。
[0006] 已经显现出一些前景的特异性偶联物的例子为C242抗体和美登素衍生的DMl的 偶联物，C242抗体针对CanAg，CanAg为表达在结肠直肠和胰腺肿瘤上的抗原（Liu等，Proc Natl Acad Sci USA，93 :8618-8623 (1996))。对该偶联物的体外评价显示，它对表达在细胞 表面上的CanAg的结合亲和力很高，其表观Kd值为3X 10 _nM，而且它对CanAg阳性细胞的 细胞毒性效力高，IC5tl为6 X 10-ηΜ。此细胞毒性是抗原依赖性的，因为其被过量的非偶联抗 体阻断，而且因为抗原阴性细胞对该偶联物的敏感性要低大于100倍。对各自的靶细胞具 有高亲和力以及具有高抗原选择性细胞毒性的抗体-DMl偶联物的其它例子包括下列物质 的偶联物：huN901，其为抗人CD56抗体的人源化形式；huMy9-6,其为抗CD33抗体的人源化 形式；huC242,其为抗CanAg Mucl表位的抗体的人源化形式；huJ591，其为抗PSM的脱免疫 抗体（deimmunized antibody);曲妥珠单抗，其为抗Her2/neu的人源化抗体；和比伐珠单 抗（bivatuzumab)，其为抗Q)44v6的人源化抗体。
[0007] 在不断改进用于治疗癌症患者的方法中，开发特异性识别特定类型癌细胞的其它 的细胞毒性偶联物将是重要的。
[0008] 为了此目标，本发明涉及抗体的开发，所述抗体识别并结合表达在癌细胞表面上 的分子/受体，和涉及新型细胞毒性偶联物的开发，所述偶联物包含细胞结合剂例如抗体 和细胞毒性剂，所述细胞毒性剂特异靶向表达在癌细胞表面上的分子/受体。
[0009] 更具体而言，本发明涉及位于由癌细胞表达的Mucl粘蛋白受体上的新CA6唾液酸 糖表位（sialoglycotope)的表征，和涉及抗体的预备，优选人源化抗体，其识别Mucl粘蛋 白的新CA6唾液酸糖表位，而且在存在细胞毒性剂的情况下，可以被用来抑制表达CA6糖表 位的细胞的生长。 发明概述
[0010] 本发明包括抗体或其表位结合片段，所述抗体特异性识别并结合Mucl粘蛋白受 体的新型CA6唾液酸糖表位。在另一个实施方案中，本发明包括人源化抗体或其表位结合 片段，其识别Mucl粘蛋白受体的新型CA6唾液酸糖表位（"CA6糖表位"）。
[0011] 在优选的实施方案中，本发明包括鼠抗-CA6单克隆抗体DS6("DS6抗体"）和DS6 抗体的表面重构或人源化形式，其中，在轻链和重链两者中，抗体或其表位结合片段的暴露 于表面的残基被取代，以便更为接近地类似于已知的人抗体表面。本发明的人源化抗体及 其表位结合片段具有改进的性质，因为与完全的鼠形式相比，它们在其被给予的人对象中 具有更少的免疫原性（或完全是非免疫原性的）。因此，本发明的人源化DS6抗体及其表位 结合片段特异性识别Mucl粘蛋白受体上的新型唾液酸糖表位，即CA6糖表位，而对人是没 有免疫原性的。该人源化抗体及其表位结合片段可以与药物例如美登素类（maytansinoid) 偶联，通过将该药物定向于Mucl CA6唾液酸糖表位，形成对抗原表达细胞具有特异细胞毒 性的药物前体。因此可以使用包含这样的抗体和小的、高毒性药物（例如美登素类、紫杉烷 类（taxanes)及CC-1065类似物）的细胞毒性偶联物作为治疗剂，用于治疗肿瘤，例如乳腺 和卵巢肿瘤。
[0012] 本发明的DS6抗体的人源化形式在以下方面在本文中被完整表征：轻链和重链可 变区的各自氨基酸序列，轻链和重链可变区基因的DNA序列，互补决定区（CDRs)的鉴定，其 表面氨基酸的鉴定和其以重组形式表达的方法的公开。
[0013] 在一个实施方案中，提供人源化DS6抗体或其表位结合片段，其具有包含互补决 定区（⑶Rs)的重链，所述互补决定区（⑶Rs)具有SEQ ID NOS : 1-3所示的氨基酸序列。