一种利用微生物转化制备四氢药根碱的方法
【技术领域】：
[0001] 本发明属于生物技术领域。具体涉及一种利用微生物转化制备四氢药根碱的方 法。
【背景技术】：
[0002] 四氢药根喊（Tetrahydrojiatrorrhizine)是四氢巴马汀 (Tetrahydropalmatine，THP)3位甲氧基去甲基化产物。四氢药根碱是从小檗科十大功劳 属植物狭叶十大功劳Mahonia fortunei (Lindl. )Fedde的莖叶中提取分离的一种四氢异喹 啉生物碱类化合物，植物中的四氢药根碱含量甚微。
[0003] 山原条二在1976年的日本药理学杂质上发表的文章报道四氢药根碱具有抗脱氧 麻黄碱、阿朴吗啡所致呕吐的作用，张传义主编的《现代实用中药速查》中报道四氢药根碱 盐类在低浓度，能促进离体肠管的自发运动，高浓度时引起肌张力升高，运动受到抑制。
[0004] 微生物转化是一种利用微生物产生的酶对外源化合物进行结构修饰反应，具有高 度立体结构选择性、高效环保等优点，是天然活性化合物进行结构修饰的一种有效方法。以 微生物转化方法制备天然来源有限的活性化合物四氢药根碱，对拓展其来源及开发应用具 有重要的意义。
【发明内容】
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[0005] 本发明的目的是筛选出一种能够有效的微生物转化四氢巴马汀为四氢药根碱的 菌种，并提供一种微生物转化制备四氢药根碱的方法。
[0006] 本发明的技术方案：筛选出一株微生物转化四氢巴马汀为四氢药根碱的菌种，用 此菌株微生物转化制备四氢药根碱。
[0007] 菌种筛选：
[0008] 取多种保藏菌株，划线接种于PDA固体培养基上，在20-28°C的恒温培养箱中培养 3-7天，将活化后的菌种转接于25-50ml的PDA液体培养基中，置于20-28°C，180转每分钟 的水平摇床中培养24-48小时，加入适量底物，继续培养24-72小时，终止反应，有机试剂萃 取发酵液，薄层板鉴定转化结果。结果见表1:
[0009] 表1微生物转化四氢巴马汀筛选结果
[0010]
【主权项】
1. 一种利用微生物转化制备四氢药根碱的方法，其特征在于：用保藏号为ATCC 13273 的灰色链霉菌微生物转化左旋四氢巴马汀为四氢药根碱。
2. 根据权利要求1所述方法，其特征在于微生物转化制备四氢药根碱所用菌株为灰色 链霉菌 ATCC13273。
3. 采用权利要求1中所述的灰色链霉菌ATCC13273制备四氢药根碱的方法，其特征在 于包含以下步骤： 第一步：发酵菌种的制备，取保藏菌种，划线接种于PDA固体培养基上，在20-28°C的恒 温培养箱中培养3-7天，将活化后的菌种转接于PDA液体培养基中，置于20-28°C，180转每 分钟的水平摇床中培养24-48小时，得到种子液； 第二步：四氢药根碱的制备，将种子液转接转化培养基，培养10-24小时后加入转化底 物左旋四氢巴马汀，在20-28°C、50-180转每分钟的条件下转化培养24-72小时，有机溶剂 萃取发酵液，回收有机溶剂后硅胶柱层析法分离得到四氢药根碱纯品。
【专利摘要】本发明属于生物技术领域，具体涉及一种利用微生物转化制备四氢药根碱的方法，本发明采用保藏号为ATCC 13273的灰色链霉菌微生物转化四氢巴马汀产生四氢药根碱，经层析分离获得四氢药根碱纯品。本发明建立了高效获得四氢药根碱的新途径。
【IPC分类】C12R1-545, C12P17-18
【公开号】CN104805150
【申请号】CN201510245365
【发明人】刘吉华, 余伯阳, 汪成
【申请人】中国药科大学
【公开日】2015年7月29日
【申请日】2015年5月13日