一种高纯度水黄皮素的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及化合物制备领域，具体涉及一种高纯度水黄皮素的制备方法。
【背景技术】
[0002] 化学对照品又称标准品，是中药质量标准研宄、质量检测和质量控制的实物对照， 中药化学对照品的研宄，是中药标准化研宄的一个非常重要的部分，对产品的质量评价，特 别是在药品生产的质量控制中，中药化学对照品起着极其重大的作用，是中药质量控制的 基础与核心。
[0003] 水黄皮素是一种呋喃黄酮类化学成分，是植物活性成分之一，也是许多植物和药 品标准质量控制的指标性成分。目前尚未相应的国家药品标准物质，国内外对水黄皮素中 药化学对照品的系统研宄未见报道，参照中药化学对照品（供含量测定用）的技术要求，对 水黄皮素化学对照品进行研宄，建立水黄皮素化学对照品的批量提取工艺、纯度与含量以 及杂质检查的分析测定方法，从而建立水黄皮素化学对照品的技术标准，为其作为中药化 学对照品以及药材和制剂的质量标准研宄提供科学基础和保证。
[0004] 水黄皮素是从豆科植物干花豆/7OrtZia 干豆花叶植物分离得 到的活性物质，从公开文献所知，文献报道水黄皮素的提取分离过程和含量测定方法，如： 1.【题名】水黄皮化学成分的研宄：干燥的水黄皮叶粗粉8 kg，用10倍量的75乙醇提取3 次，提取液浓缩后得总浸膏2.1 kg。将浸膏混悬于水中，用石油醚萃取至萃取液基本无色， 合并及浓缩萃取液，得石油醚部分（124 g)。将石油醚萃取物75 g经反复硅胶柱色谱分离， 用石油醚、石油醚一醋酸乙酯梯度洗脱，得水黄皮素单体。2.【题名】玉郎伞的化学成分分 析：取玉郎伞粗粉，用95%乙醇（相当药材10倍量）渗漉，收集渗漉液浓缩得黄色沉淀物 (收率0.27%)，经氯仿回流得氯仿溶出物（收率0.16%)。取上述氯仿溶出物，用100~ 200目硅胶拌和均匀后低温干燥，研细后上硅胶柱（湿法装柱），用氯仿、氯仿一甲醇梯度洗 脱，收集到73个组分，TLC检识，合并斑点相同组分，经反复柱层析和薄层分离制备，用丙酮 多次重结晶纯化，分离得到水黄皮素单体。3.【题名】壮药干花豆枝叶化学成分研宄：干花 豆枝叶15Kg，阴干，粉碎，用95%乙醇冷浸提取3次，合并提取液减压浓缩，得乙醇浸膏约 500 g。所得浸膏加水混悬后依次用石油醚2 L萃取后处理得石油醚浸膏30 g，醋酸乙酯2 L萃取后处理得醋酸乙酯浸膏50 g，正丁醇2 L萃取后处理得正丁醇浸膏45 g，萃取后水 溶液浓缩得水部分200g。取醋酸乙酯浸膏45 g经硅胶柱色谱，以氯仿一甲醇（100:0 - 0: 100)梯度洗脱，每份200 mL，经TLC薄层检测合并成分相近部位，Fr. III经硅胶柱色谱，石 油醚一醋酸乙酯（20 :1)洗脱，收集流分，通过C18、S印hadexLH-20等反复柱色谱分离得到 水黄皮素单体。4.【题名】水黄皮化学成分及抗氧化活性研宄：对水黄皮叶粗粉采用75%乙 醇提取，再经过石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇等不同极性溶剂萃取，共分成四个不同极 性部位。然后用硅胶柱层析、聚酰胺柱层析、大孔吸附树脂和葡聚糖凝胶（Sephadex LH-20) 等多种层析分离手段得到水黄皮素。5.【题名】RP-HPLC法测定水黄皮药材中水黄皮素的 含量：建立RP-HPLC测定水黄皮药材中水黄皮素含量的方法。6.【题名】HPLC法测定玉郎 伞中水黄皮素的含量：建立高效液相色谱法测定玉郎伞中水黄皮素含量的方法。7.【题名】 HPLC法测定肿痛宁酊中水黄皮素的含量：建立HPLC法测定肿痛宁酊中水黄皮素的含量。 8.【题名】薄层色谱一荧光分析法测定水罗伞药材中水黄皮素含量的研宄：建立薄层色谱一 荧光分光光度法测定水罗伞中水黄皮素含量的方法。9.【题名】水罗伞药材的鉴别及水黄 皮素的含量测定：采用性状、显微、TLC等法鉴别水罗伞药材真伪；采用HPLC法测定水罗伞 药材中水黄皮素的含量，药材检查等项参照中国药典方法测定，制订壮药材水罗伞的质量 标准。10.【名称】一种高含量水黄皮素的提纯方法，申请号201010263044. 5的发明专利申 请公开了一种高含量水黄皮素的提纯方法，具体方法包括：将干花豆茎枝粉碎，用一定浓 度乙醇提取、浓缩，石油醚萃取两次，萃余液上大孔树脂，洗脱液浓缩再上聚酰胺柱分离 纯化，95%乙醇重结晶即得。
[0005] 上述方法从不同角度论述了水黄皮素的提取分离，分离纯度较高，但纯度大多数 未达到中药化学对照品的要求，即纯度大于98%，无法满足高纯度水黄皮素化学对照品的需 要。
[0006] 通过对水黄皮素化学对照品进行研宄，建立水黄皮素化学对照品的批量提取工 艺、纯度与含量以及杂质检查的分析测定方法，从而建立水黄皮素化学对照品的技术标准， 为其作为中药化学对照品以及药材和制剂的质量标准研宄提供科学基础和保证。研宄结果 可为水黄皮素化学对照品提供更完整的基础化学依据，掌握其化学信息和分析测试技术， 有利于相关产品的进一步开发利用，而且对于开发我国特有产物，开发具有高技术、高附加 值的产品，提高市场竞争能力，将会产生潜在而不可估量的社会效益与经济效益。今后生产 的各种产品，无论是在国内或是进入国际市场，都需要靠高水平的质量标准和高水平的分 析测试技术来获得发展和提高，否则将失去市场，产品的质量标准和检测方法变得愈来愈 重要，"安全、有效和质量可控"的用药标准已成为国际共识，药品生产应围绕着这一中心展 开，其核心为质量标准控制水平，而化学对照品则起关键的作用。但目前大部分中药药材及 其制剂，因化学成分不明或无化学对照品，无法阐明其作用的化学物质基础，也无法进行质 量控制，而不能被现代文明社会所接受，也成为中草药和天然药物难以进入国际药品市场 的制约关键，技术壁皇给发展中药产业带来了困难，因此，进行中草药化学成分的研宄及质 量标准规范化研宄是中药现代化发展的必经之路，对阐明中草药作用的物质基础以及中草 药制剂的生产加工工艺的制定、伪劣产品的鉴别等等具有重要的意义。毫无疑问，对水黄皮 素进行质量标准研宄，建立规范化的分析测试方法，制定高技术水平的控制水黄皮素质量 的检测指标和分析方法，使之科学化、规范化，增强国际竞争力，为中药进入国际市场创造 条件，具有重大的实际意义和学术价值。
[0007] 水黄皮素作为植物、药材及其产品的化学对照品，是质量控制的技术关键，众多企 业、科研和检验部门都需要高纯度的水黄皮素对照品，其市场需求很大，由于水黄皮素在药 材中的含量低，提取分离技术要求很高、难度很大。本发明进行水黄皮素中药化学标准品制 备及其质量控制技术研宄，解决高纯度水黄皮素化学对照品的问题，对中药现代化的作用 是显而易见的，具有重大的实际意义和学术价值。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的是提供一种高纯度水黄皮素的制备方法。
[0009] 本发明是从豆科植物干豆花/7OrtZia 的根中经提取、分离、精 制、纯化而制得的水黄皮素，其化学名、分子式、结构式如下： 中文名：水黄皮素 化学名：3-甲氧基-2-苯基-4H-呋喃[2, 3-Η]-1-苯并呋喃-4-酮（3-methoxy-2-phe nyl_4H-furo[2, 3-H]-1-benzopyran-4-one) 英文名：Karanjin 分子式：C18 H12 O4 结构式如下：
本发明的目的是通过下列的技术方案实现的： 本发明所述的高纯度水黄皮素的制备方法，具体包括如下步骤： 1) 干豆花的干燥根用乙醇回流提取，提取液滤过，合并滤液，回收乙醇，得浸膏； 2) 浸膏再经石油醚萃取，静置，合并石油醚层，浓缩得石油醚萃取物； 3) 石油醚萃取物经硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯-丙酮系统梯度洗脱，收集含水黄 皮素的流分，所述的石油醚-乙酸乙酯-丙酮系统梯度洗脱条件为：〇~A分钟，洗脱系统 为石油醚；B~C分钟，洗脱系统为石油醚-乙酸乙酯-丙酮，比例为10:1:2~6:4:1 ;所述 A为10~25,所述B为11~26,所述C为50~70 ; 4) 流分用TLC检测合并，浓缩，重结晶，即得纯度为重量含量80~90 %的水黄皮素粗 结晶； 5) 将水黄皮素粗结晶用制备高效液相色谱法分离纯化，收集水黄皮素组分； 6) 对所收集的每一份洗脱液利用HPLC检测，合并保留时间相同而且纯度在90%-98%之 间和纯度大于98%以上的水黄皮素，减压浓缩，得到纯度90%-98%之间以及大于98%以上的 水黄皮素。
[0010] 所述步骤1)中乙醇的加入量为药材重量的5-10倍，乙醇浓度为50-90%，回流提取 次数为2-8次。
[0011] 所述步骤5)制备高效液相色谱的色谱柱为C-18柱，甲醇-水为流动相洗脱，流速 为5~10 mL/min，检测波长为304nm，柱温为25-35°C。
[0012] 所述步骤4) TLC检测方法为：薄层板：硅胶G ;3种展开剂系统：系统（1)石油 酿-丙酮重量比例7:3,系统（2)二氯甲烧-丙酮重量比例9. 8:0. 2,系统（3)石油酿-乙 酸乙醋-丙酮重量比例8:1:1 ;点样：用甲醇制lmg/mL的溶液，在同一硅胶G板上，按不同 的点样量梯度点样，点样量分别为20 ug、40 ug、60 ug、