明的无定型灯盏乙素乙酯可以用作制备治疗缺 血性脑血管病或病毒性疾病的口服药物的应用。
[0082] 所述口服药物包含活性成分和辅料，所述活性成分包含本发明的无定型灯盏乙素 乙酯。所述辅料的选择依据剂型的需要进行常规选择即可。
[0083] 所述活性成分中，优选为仅采用无定型灯盏乙素乙酯一种活性成分。当然，也可以 与其它同类活性成分配合共同作为活性成分。例如，可以采用与灯盏乙素乙酯晶体配合共 同作为活性成分。
[0084] 依据实际情况，所述活性成分可以采用包含质量分数至少为10%的无定型灯盏乙 素乙酯和余量的灯盏乙素乙酯晶体。优选地，所述活性成分中包含质量分数至少为50%的 无定型灯盏乙素乙酯和余量的灯盏乙素乙酯晶体。更佳地，所述活性成分中包含质量分数 至少为95%的无定型灯盏乙素乙酯和余量的灯盏乙素乙酯晶体。
[0085] 本发明实施例3中，所述口服药物的剂型可以为片剂、胶囊剂、滴丸剂、丸剂、缓控 释制剂或者口服液制剂。所述辅料的选择依据剂型的需要进行常规选择即可。具体地，例 如，在制备口服液体制剂（液体药物组合物）时，可以将活性成分溶解或悬浮于适当的液体 (例如水）中。在制备口服固体制剂（固体药物组合物）时，可以在向活性成分中加入赋形 剂以及视需要的粘合剂、崩解剂、滑润剂、着色剂、矫味剂等后，按照常规方法制成片剂、包 衣片剂、颗粒剂、细粒剂、散剂、胶囊剂或丸剂等。作为赋形剂，可使用例如乳糖、玉米淀粉、 白糖、葡萄糖、山梨糖醇、结晶纤维素、二氧化硅等；作为粘合剂，可使用例如聚乙烯醇、乙基 纤维素、甲基纤维素、阿拉伯胶、羟基丙基纤维素、羟基丙基甲基纤维素等；作为滑润剂，可 使用例如硬脂酸镁、滑石、二氧化硅等；作为着色剂，可使用允许在医药品中添加的着色剂； 作为矫味剂，可使用可可末、薄荷脑、芳香酸、薄荷油、龙脑、桂皮粉等。当然，也可以在上述 片剂、颗粒剂上包覆糖衣、明胶衣、以及其它的必要外衣。
[0086] 实施例4无定型灯盏乙素乙酯普通片剂的制备
[0087] 取本发明实施例1的无定形灯盘乙素乙醋20g，乳糖60g，淀粉60g，糊精60g，微粉 硅胶2g，硬脂酸镁2g，混合均匀，压片，得无定型灯盏乙素乙酯普通片1000片。
[0088] 实施例5无定形灯盏乙素乙酯缓释微球的制备
[0089] 首先配制含1. 5 %的海藻酸钠（W/V)、1. 5 %的淀粉（W/V)、实施例1的无定形灯 盏乙素乙酯l〇g，混合水溶液200mL，加入500mL液体石蜡作为油相，30mL的司盘-80和吐 温-80的混合液（5 :1)作为乳化剂，搅拌，形成乳液A。
[0090] 同样，配制IOOmL 8%的0&012溶液，加入200mL液体石赌，IOmL乳化剂（司盘-80 : 吐温-80 = 5 :1)及适量乙醇，搅拌，形成乳液B。
[0091] 待二者均形成稳定的乳液后，将乳液B加入乳液A进行交联反应15min，离心得灯 盏乙素乙酯微球，依次用乙酸乙酯、无水乙醇、去离子水洗涤，室温放置干燥。得灯盏乙素乙 酯缓释微球，可用于制备片剂或胶囊等药剂学可接受的其他制剂形式。
[0092] 实施例6不同晶型灯盏乙素乙酯预防给药对大鼠局灶性脑缺血的影响
[0093] 目的：采用大鼠局灶性脑缺血模型（线栓法脑梗塞动物模型：MCAO法），观察不同 晶型灯盏乙素乙酯预防给药对脑缺血的影响。
[0094] 实验动物：SD大鼠，雄性，250~270g。购自中国食品药品检定研宄院，许可证： SCXK (京）2009-0017 〇
[0095] 材料：
[0096] 受试药：实施例1的无定型灯盏乙素乙酯药液（以下简计为DZY-02)和实施例1 的步骤一中采用的灯盏乙素乙酯针晶晶体药液（以下简计为DZY-01)。药液配制方法：分 别称取等量的DZY-Ol及DZY-02,与MCT研磨均匀后，加入一定量阿拉伯胶，研磨均匀，再加 一定量水，研磨，乳化成初乳后加水稀释至所需药物浓度。
[0097] 染色剂：红四氮唑（TTC) !Amresco试剂公司（美国），PBS溶液新鲜配制。
[0098] MCAO栓线：北京沙东生物技术有限公司，编号2432-A3-100。
[0099] 试剂盒：总超氧化物歧化酶（SOD)测试盒，批号20131228 ;丙二醛（MDA)测试盒， 批号20131230 ;-氧化氮（NO)测试盒，批号20140318 ;均购自南京建成生物工程研宄所。
[0100] 实验方法：
[0101] 剂量设置：各受试药设置给药剂量为：l〇〇,50,25mg/kg。
[0102] 分组与给药：
[0103] 实验分为9组：（1)正常对照组；（2)假手术组；（3)模型组；(4)-(6)针晶大、中、 小剂量组，分别为l〇〇,50,25mg/kg ;(7)-(9)组为无定型大、中、小剂量组，分别为100,50， 25mg/kg。每组16只，每日给药1次，连续12天。
[0104] 给药途径：口服灌胃给药，lmL/100g。动物术后6h再给药1次。
[0105] 线栓法脑梗塞动物模型（MCAO法）：
[0106] 大鼠用350mg/kg的水合氯醛腹腔注射麻醉。在颈部正中切口约2cm，在一侧的肩 胛舌骨和胸锁乳突肌形成的三角处暴露颈总动脉（CCA)及其分支颈外动脉（ECA)、颈内动 脉（ICA)。结扎ECA及其分支枕动脉、甲状腺上动脉及ECA终末支，分离ICA的分支翼突腭 动脉。夹闭CCA、ICA及翼突腭动脉，将前端烧成0. 3mm小球的尼龙线自ECA切口插入，导 入至ICA，松开ICA，继续插入尼龙线至其颅内段，当感到有明显阻力时，此时插入尼龙线距 CCA分叉处约2cm，即可阻断大脑中动脉（MCA)。结扎ECA切口和尼龙线，松开夹闭血管的血 管夹。假手术动物插线入lcm，其余处理同模型。
[0107] 行为学评分：按Longa评分的5级4分法进行评分。
[0108] 0分：无明显神经功能缺损症状；1分：神经功能轻微缺损，不能完全伸展对侧前 爪；2分：局灶性神经功能中度缺损，向对侧旋转；3分：局灶性神经功能重度缺损，行走时 向对侧倾倒；4分：不能自行行走及昏迷。分别在缺血6h和24h进行行为学评分。
[0109] 脑组织染色：术后24h，处死动物取脑，将梗塞部位切2mm厚片，放入已配好的5ml 染液瓶中，立即放入37°C水浴，20-30min后取出染液瓶，弃染液，在原瓶内放入5ml的10% 甲醛，固定24h。
[0110] 观察指标：
[0111] 脑梗死体积：脑切片染色，照相或扫描，计算梗死体积和梗死率。
[0112] 梗死率％ =梗死体积/全脑体积X 100 %
[0113] 计算脑重指数：脑重指数=脑重/体重X 100%
[0114] 统计方法：应用SPSS19. 0统计软件，所有实验数据用x±s表示，组间比较采用单 因素方差分析。
[0115] 实验结果：
[0116] 1.对大鼠脑重指数的影响
[0117] 由表6-1可见，模型组脑重指数与假手术和对照组相比明显升高，统计学结果显 示有非常显著性差异（P < 〇. 05, P < 0. 001);各给药组与模型组比较，虽有不同程度降 低，但没有统计学意义。体重恢复方面，大剂量恢复较好，与模型组比较有显著性差异（P < 0· 05) 〇
[0118] 表6-1不同晶型灯盏乙素乙酯对脑梗大鼠体重及脑重指数的影响士s)
[0119]
[0120] 注：各组与模型组比较，*P < 0· 05, **P < (λ 01，< (λ 001，下表同。
[0121] 2.对大鼠行为学评分的影响
[0122] 由表6-2可见，在缺血后6小时和24小时，模型组大鼠行为学评分显著升高，与假 手术组及空白对照组具有显著性差异，表明本研宄所制备模型成功，可用于观察灯盏花素 抗脑缺血药效学研宄.缺血后