C3,c6,c17-三取代达玛烷型三萜皂苷衍生物及其药物组合物和其在制药中的应用_2

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0, 24, 25-五羟基达玛-22-烯-3-0-β -D-吡喃葡萄糖 基-(1 - 2)-β -D-吡喃葡萄糖苷,为一新化合物。
[0039] 新化合物(3 β,12 β,20S,22Ε,24S) -3, 12, 20, 24, 25-五羟基达 玛-22-烯-3-0-β-D-吡喃葡萄糖基-(1 - 2)-β-D-吡喃葡萄糖苷的理化数据如下: 白色无定型粉末;[ft]V -6.6 (t' 0.86, MeOH): IR(KBr) V nax3423, 2964, 2935, 2876,1633, 1463,1368,1154,1076,1043,659,571^111; 1!! and 13C 匪R data,see Tables land 7 ;ESI-MS(positive ion mode)m/z 839[M+Na] +;HRESIMS(positive ion mode)m/z 839. 4766 [M+Na] + (calcd for C42H72O15Na, 839. 4763)。1H-NMR 和 13C-NMR 数据:见表1 和 3。
[0040] 促进PC12细胞分化活性评价:PC12细胞采用Ham's F12K+12. 5 % HS+2. 5 % FBS+100U/mL双抗的培养基进行培养,培养箱温度37°C,5 % CO2。当PC12细胞长至合适数量 时,取PC12细胞,胰酶消化,制成细胞悬浮液。将细胞悬浮液吸至15mL离心管中,1500rpm, 3min。离心结束后,离心管用酒精消毒后拿进超净台,加入新的完全培养基5mL,用移液器 吹打十次,尽量吹散细胞。取〇. 2mL细胞悬液,加入到细胞计数管中,再加0. 8mL PBS混匀, 计数。将细胞浓度调整至5X 104cells/mL,加入预先用PLL包好的48孔板,每孔0. 2mL,放 入培养箱培养。第二天,将原培养基吸出,然后加入Ham's F12K+2. 5% FBS的培养基(48 孔,0· 24mL孔),加入5ng/mL的nerve growth factor (NGF)及待测物(化合物终浓度为 10 μ M),重复三次。其中设有空白对照(不加 NGF,只有细胞和终浓度为0. 01 %的DMSO), 阴性对照组(含NGF终浓度为5ng/mL和终浓度为0. 01 %的DMS0),阳性对照组(含NGF终 浓度为50ng/mL和终浓度为0. 01 %的DMS0)。然后将细胞放入细胞培养箱中继续培养,72h 后统计细胞分化比例。PC12细胞购自中国科学院昆明动物研究所细胞库。
[0041] 化合物1在10 μ g/mL时可以促进PC12细胞分化,分化率为8. 15 %。
[0042] 实施例2 :
[0043] (3 β,12 β,20S, 22E, 24R) -3, 12, 20, 24, 25-五羟基达玛-22-烯-3-0- β -D-吡喃 葡萄糖基-(1 - 2) - β -D-吡喃葡萄糖苷促进PC12细胞分化活性评价
[0044]
[0045] (3 β,12 β,20S, 22Ε, 24R) -3, 12, 20, 24, 25-五羟基达玛-22-烯-3-0- β -D-吡喃 葡萄糖基-(1 - 2) - β -D-吡喃葡萄糖苷
[0046] [ (3 β , 12 β , 20S, 22Ε, 24R) -3, 12, 20, 24, 25-pentahydroxydammar-22-ene-3-0-β -D-glucopy ranosyl-(l 2)-β -D-glucopyranoside]
[0047] 新化合物(3 β,12 β,20S, 22E, 24R) -3, 12, 20, 24, 25-五羟基达 玛-22-烯-3-0- β -D-吡喃葡萄糖基-(I - 2) - β -D-吡喃葡萄糖苷的制备:蒸煮后的三七 (15Kg)粉碎后,用80%甲醇水回流提取三次、每次3h。蒸去有机溶剂得浸膏约3kg,浸膏用 水溶解后经Diaion 101柱(250X30cm)进行柱层析,先用水冲洗除去多糖,然后用甲醇冲 洗得到熟三七总皂苷部分(1.68kg)。熟三七总皂苷部分经硅胶柱(250 X 30cm)柱层析,用 氯仿:甲醇:水(85:15:1 - 75:25:2)洗脱,得到 8 个部分(Fractions A-H)。Fr. E(50g)经 RP-18柱层析,用甲醇水洗脱(40:60to 90:10)得到Fr(El-E5)。Fr.El(173mg)经半制备 (CH3CN-H2O, 23:77to 30:70)得到化合物 2 (12mg)。经鉴定为(3 β,12 β,20S, 22E, 24R) -3, 12, 20, 24, 25-五羟基达玛-22-稀m 吡喃匍甸糖基 -(I - 2)- β 吡喃匍甸糖 苷,为一新化合物。
[0048] 新化合物(3 β,12 β,20S,22E,24R) -3, 12, 20, 24, 25-五羟基达 玛-22-烯-3-0-β -D-吡喃葡萄糖基-(1 - 2)-β -D-吡喃葡萄糖苷的理化数据如 下:白色无定型粉末;+5.6 (>.' 丨.35, McOH): IR(KBr) V nax3418, 2965, 2944, 2877, 1632,1452,1371,1165,1077,1028,625,576^111; 1!! and 13C 匪R data,see Tables land 7 ;ESI-MS(positive ion mode)m/z 839[M+Na] +;HRESIMS(positive ion mode)m/ ζ839· 4763[M+Na] + (calcd for C42H72O15Na,839. 4763)。1H-NMR和 13C-NMR数据:见表 1 和 3。
[0049] 促进PC12细胞分化活性评价:同实施例1。化合物2在10 μ g/mL时可以促进PC12 细胞分化,分化率为10. 79%。
[0050] 实施例3 :
[0051] [ (3 β,6 α,12 β,20E,23R,24S)-3, 6, 12, 23, 24, 25-六羟基达 玛-20 (22)-烯-6-0- β -D-吡喃葡萄糖苷促进PC12细胞分化活性评价:
[0052]
[0053] (3 β,6 α,12 β,20Ε,23R,24S) _3, 6, 12, 23, 24, 25-六羟基达 玛-20 (22)-烯-6-0- β -D-吡喃葡萄糖苷[(3 β,6 α,12 β,20Ε,23R,24S) -
[0054] 3, 6,12, 23, 24, 25-hexahydroxydammar-20 (22)-ene_6-〇-β -D-glucopyranosi de]
[0055] (3 β,6 a,12 β,20E,23R,24S)-3, 6, 12, 23, 24, 25-六羟基达 玛-20 (22)-烯-6-0-β-D-吡喃葡萄糖苷的制备:蒸煮后的三七(15Kg)粉碎后,用80%甲 醇水回流提取三次、每次3h。蒸去有机溶剂得浸膏约3kg,浸膏用水溶解后经Diaion 101柱 (250X30cm)进行柱层析,先用水冲洗除去多糖,然后用甲醇冲洗得到熟三七总皂苷部分 (I. 68kg)。熟三七总皂苷部分经硅胶柱(250X30cm)柱层析,用氯仿:甲醇:水(85:15:1-75:25:2)洗脱,得到 8 个部分(FractionsA-H)。
[0056] FnH(IOg)别经 RP-18 柱层析,用甲醇水洗脱(40:60to 90:10)得到Fr(Hl-H4)。 Fr.Hl(121mg)经半制备(CH3CN-H20,15:85to 18:82)得到化合物 3(21mg),为一新化合物。
[0057] 理化数据:白色无定型粉末;[a]Y+19.9(C L38,Me0H) ;IR(KBr) vnax3425, 2964,2934,2878, 1632,1464,1384,1154,1074,1027,928,580,530cm N 1H and 13C NMR data, see Tables 2and 8 ;ESI-MS(positive ion mode)m/z 693[M+Na]+; HRES頂S(positive ion mode)m/z 693. 4187[M+Na] + (calcd for C36H62O11 Na,693. 4184) 〇 1H-NMR和13C-NMR数据:见表2和3。
[0058] 促进PC12细胞分化活性评价:同实施例1。化合物3在10 μ g/mL时可以促进PC12 细胞分化,分化率为9. 87 %。
[0059] 实施例4 :
[0060] (3 β,6 α,12 β,20Z,23S,24R) _3, 6, 12, 23, 24, 25-六羟基达 玛-2〇(22)-烯-6-〇-0-〇-吡喃葡萄糖苷[(30,6€[,120,202,233,241?)-3,6,12,23,24,2 5-hexahydroxydammar-20 (22) -ene_6-0- β -D-glucopyranoside]促进 PC12 细胞分化活性 评价
[0061]
[0062] (3 β,6 α,12 β,20Z,23S,24R) _3, 6, 12, 23, 24, 25-六羟基达 玛-20 (22)-烯-6-0- β -D-吡喃葡萄糖苷
[0063] [ (3 β , 6 α , 12 β , 20Ζ, 23S, 24R) -3, 6, 12, 23, 24, 25-hexahydroxydammar-20 (22)-ene-6-Ο-β -D-glucopyranoside]
[0064] (3 β,6 a,12 β,20Z, 23S, 24R)-3, 6, 12, 23, 24, 25-六羟基达 玛-20 (22)-烯-6-0-β-D-吡喃葡萄糖苷的制备:蒸煮后的三七(15Kg)粉碎后,用80%甲 醇水回流提取三次、每次3h。蒸去有机溶剂得浸膏约3kg,浸膏用水溶解后经Diaion 101柱 (250X30cm)进行柱层析,先用水冲洗除去多糖,然后用甲醇冲洗得到熟三七总皂苷部分 (I. 68kg)。熟三七总皂苷部分经硅胶柱(250X30cm)柱层析,用氯仿:甲醇:水(85:15:1-75:25:2)洗脱,得到 8 个部分(FractionsA-H)。
[0065] Fr. H(IOg)经 RP-18 柱层析,用甲醇水洗脱(40:60to 90:10)得到 Fr (H1-H4)。 Fr.Hl(121mg)经半制备(CH3CN-H20,15:85to 18:82)得到新化合物 4(7mg)。
[0066] 理化数据:白色无定型粉末;[α ]Υ-5· 7 (c 0· 77, MeOH) ;IR(KBr) V nax3421, 2964,2935,2878,1629,1462,1384,1155,1074,1031,928,891
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