所述试剂盒还可以包括缓冲液。
[0036] 其中，所述缓冲液至少包括PBS缓冲液、FACS缓冲液中的任意一种或几种。
[0037] 在本发明第三个方面的一种优选实施例中，所述试剂盒还包括anti-⑶8抗体、和 /或突光标记的anti-⑶8抗体。
[0038] 本发明提供了一种能够识别CMVTCR的MHCclassI分子/CMV特异多肽的氨基 酸及其多聚体，用以检测病人外周血中CMV特异CD8+T细胞的数量，从而用以测定中国病人 外周血中具有保护性CMV特异CD8+T细胞数量的临床界限，监测评估机体内感染的CMV再 激活及致病的可能。
【附图说明】
[0039] 图1为本发明SEQIDNo.1序列多聚体与外周血单个核细胞共培养48小时后，反 应阳性的细胞增殖增加。
[0040] 图2为本发明SEQIDNo. 1序列多聚体检测外周血中CMV特异⑶8+T细胞的结果。
【具体实施方式】
[0041] 研究发现，CMV特异性CD8+T细胞在抑制CMV再激活中起着非常关键的作用，在健 康成人体内，病毒再激活和CMV特异CD8+T细胞的抗病毒免疫控制处于一种平衡状态，当此 特异性T细胞数量减少或功能降低时，此平衡被打破，病毒就重新再激活，人体就可能会发 病出现临床症状。在CMV感染人群中，潜伏的CMV重新再激活是最主要的一种感染方式，所 以机体抗CMV的细胞免疫状况是监控CMV是否会致病的一项重要指标。
[0042] 基于此，本发明设计合成了一种氨基酸序列，可用于测定病人外周血中具有保护 性CMV特异CD8+T细胞数量的临床界限，监测评估机体内感染的CMV再激活及致病的可能。
[0043] 实施例1，在细胞水平上验证T细胞对SEQIDNo.1序列的反应性
[0044] 采集CMV感染者外周静脉血，分离外周血单个核细胞。
[0045] 给予多肽刺激，SEQIDNo. 1多肽序列与细胞共培养48h后，检测细胞增殖改变情 况。同时，以TK-10、YK-10、NA-10、SK-10-1、YV-10、KV-10、AR-10、CK-10、MF-10、QF-10、 LL-10作为对照。结果见图1。
[0046] 从图1可以看出，本发明SEQIDNo. 1序列（KI-10序列）与细胞共培养48小时 后，反应阳性细胞增殖明显。
[0047] 实施例2,检测外周血中CMV特异⑶8+T细胞的数量
[0048] 将SEQIDNo. 1序列（KI-10)和HLA基因型合成荧光标记的多聚体，用流式细胞 分析仪来测定CMV特异CD8+T细胞的数量。步骤如下：
[0049] 1)加入100UL全血在12x75mm试管中。
[0050] 2)加10iiL多聚体后混匀，避光室温孵育IOmin。
[0051] 3)加入适量的荧光标记的anti-⑶8抗体（如DakocloneDK25)后混匀。避光 2-8°C，孵育IOmin。
[0052]4)加入 2mLEasyLyse?workingsolution(DakocodeS2364)，孵育IOmin0
[0053] 5)加入 2mL0.Olmol/LPBS，并离心 5 分钟（300xg)，弃去上清。
[0054] 6)重细胞悬于FACS缓冲液，如0. 4mLPBS，上机分析。结果见图2。
[0055] 从图2中可以看出，对本发明反应阳性的外周血单个核细胞中CMV特异CD8+T细 胞比例增加。
[0056] 可以看出，本发明所述的SEQIDNo.1序列及其多聚体能够有效的检测外周血单 个核细胞中CMV特异CD8+T细胞，从而为测定中国病人外周血中具有保护性CMV特异CD8+T 细胞数量的临床界限、监测评估机体内感染的CMV再激活及致病可能性提供了一种高敏感 度、高效率的试剂和方法。
[0057] 以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限 制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和 替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和 修改，都应涵盖在本发明的范围内。
【主权项】
1. 一种氨基酸序列，其特征在于，所述氨基酸序列包括SEQ ID No. 1所示序列：SEQ ID No. I ：Lys Met Met Tyr Met Cys Tyr Arg Asn lie。2. 根据权利要求1所述的氨基酸序列，其特征在于，所述氨基酸序列为SEQ ID No. I所 示序列、及其多聚体中的任意一种或几种。3. -种氨基酸序列在制备检测巨细胞病毒试剂中的应用，其特征在于，所述氨基酸序 列包括SEQ ID No. 1所示序列。4. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述氨基酸序列为SEQ ID No. 1所示序 列、及其多聚体中的任意一种或几种。5. -种检测巨细胞病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括一种氨基酸序列，所述 氨基酸序列包括SEQ ID No. 1所示序列。6. 根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括荧光标记。7. 根据权利要求5或6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括HLA基因表位多 肽、及其多聚体中的任意一种或几种。8. 根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述氨基酸序列为SEQ ID No. 1所示序 列、及其多聚体中的任意一种或几种。9. 根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括缓冲液，所述缓冲液 至少包括PBS缓冲液、FACS缓冲液中的任意一种或几种。10. 根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括anti-CD8抗体、和 /或突光标记的anti-⑶8抗体。
【专利摘要】本发明设计合成了一种氨基酸序列，所述氨基酸序列包括SEQ？ID？No.1所示序列。本发明所提供的氨基酸专利可用于测定病人外周血中具有保护性CMV特异CD8+T细胞数量的临床界限，监测评估机体内感染的CMV再激活及致病的可能。
【IPC分类】C07K7/06, G01N15/14
【公开号】CN105085616
【申请号】CN201410222933
【发明人】康向东, 相芬芬, 洪建 , 许健, 吴蓉
【申请人】上海市普陀区中心医院, 上海中医药大学附属普陀医院
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2014年5月23日