一种泥鳅分泌多糖的提取方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物技术领域，具体是一种泥鳅分泌多糖的提取方法。
【背景技术】
[0002]泥鳅具有很高的营养价值。泥鳅的可食部含水分83%，蛋白质9.6%，脂肪3.7%，碳水化合物2.5%，灰分1.2%;又含I丐280 mg/kg，磷720 mg/kg，铁9 mg/kg。肉的脂肪中，含不饱和的二十二碳六烯脂肪酸1.3 — 2.5%，显著量的十八碳三烯脂肪酸和二十二碳五烯脂肪酸等。全体100克中含维生素A70 IU，维生素A原90 IU，维生素B 30 ug，维生素Β2440μ8，尼克酸4.0 mg。
[0003]泥鳅的药用价值也很高。泥鳅全体或皮肤分泌的滑液入药，甘、平、无毒。其主要功效为补中益气、醒酒止渴、健脾和胃、清热解毒、祛湿邪，治消渴、水肿黄疽、痔疾、阳痰等症。民间常用其粘液治痈肿、中耳炎，用活泥鳅捣碎外敷治疗乳癌、骨髓炎等，疗效显著，近代用于治疗传染性肝炎和消渴病。泥鳅的营养价值很高，对许多疾病确有疗效，但目前关于泥鳅药用的有效成分(或部位)以及用现代方法对泥鳅进行炮制加工和药理观察的探讨较少。
[0004]泥鳅多糖具有很好的抗氧化、清除自由基、抗肿瘤、抗病毒，降血糖、降血脂等功效，其提取方法报道较少。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是，从传统中医药角度出发，采用现代提取工艺技术，提取泥鳅的分泌多糖。
[0006]本发明所采用的技术方案是:
本发明所提供的一种泥鳅分泌多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤:
(1)将鲜活泥鳅用蒸馏水浸养，每隔24h过滤一次，收集滤液，将滤液真空浓缩至原体积的1/4后，加入4倍无水乙醇，至终浓度为60%，静置过夜；
(2)将沉淀用用无水乙醇洗涤2-3次，用少量蒸馏水将沉淀溶解，至沉淀浓度为4%，加入6%复合酶水解蛋白等杂质成分，40°C温浴lh，在沸水浴中保温20min，进行酶灭活；
(3)加入savge溶液，在温度为5°C，转速为10000 r/min的条件下，离心5 min，去除沉淀，收集上清，加萃取剂萃取，去除游离蛋白质后，取水相；
(4)水相装入截留分子量为8000-10000的透析袋中，流水透析2~3天。将透析后透析袋内的溶液经冷冻干燥得白色絮状粉末，即为提取得到的泥鳅分泌多糖。
[0007]上述的一种泥鳅分泌多糖的提取方法步骤(2)中复合酶由木瓜蛋白酶:中性蛋白酶=1:1配制而成；步骤(3)中萃取剂由氯仿-正丁醇=1: 4配制而成。
[0008]本发明方法提取的泥鳅多糖，可广泛应用于食品、医药、保健品等领域。
[0009]【具体实施方式】:
实施例1: (1)称取新鲜活泥鳅500克，用蒸馏水浸养，每隔24h过滤一次，收集滤液，将滤液真空浓缩至原体积的1/4后，加入4倍无水乙醇，至终浓度为60%，静置过夜；
(2)将沉淀用用无水乙醇洗涤2-3次，用少量蒸馏水将沉淀溶解，至沉淀浓度为4%，加入6%复合酶(木瓜蛋白酶:中性蛋白酶=1:1)，40°C温浴lh，在沸水浴中保温20min，进行酶灭活；
(3)加入savge溶液，在温度为5°C，转速为10000 r/min的条件下，离心5 min，去除沉淀，收集上清，加萃取剂(氯仿-正丁醇=1: 4)萃取，去除游离蛋白质后，取水相；
(4)水相装入截留分子量为8000-10000的透析袋中，流水透析2~3天。将透析后透析袋内的溶液经冷冻干燥得白色絮状粉末464mg，即为提取得到的泥鳅分泌多糖。
[0010]样品均在199nm处出现多糖特征吸收峰，在260nm处无蛋白吸收峰。说明提取得到的泥鳅多糖中无蛋白质和核酸等杂质成分。
[0011]实施例2:
(1)称取新鲜活泥鳅1000克，用蒸馏水浸养，每隔24h过滤一次，收集滤液，将滤液真空浓缩至原体积的1/4后，加入4倍无水乙醇，至终浓度为60%，静置过夜；
(2)将沉淀用用无水乙醇洗涤2-3次，用少量蒸馏水将沉淀溶解，至沉淀浓度为4%，加入6%复合酶(木瓜蛋白酶:中性蛋白酶=1:1)，40°C温浴lh，在沸水浴中保温20min，进行酶灭活；
(3)加入savge溶液，在温度为5°C，转速为10000 r/min的条件下，离心5 min，去除沉淀，收集上清，加萃取剂(氯仿-正丁醇=1: 4)萃取，去除游离蛋白质后，取水相；
(4)水相装入截留分子量为8000-10000的透析袋中，流水透析2~3天。将透析后透析袋内的溶液经冷冻干燥得白色絮状粉末939mg，即为提取得到的泥鳅分泌多糖。
[0012]样品均在199nm处出现多糖特征吸收峰，在260nm处无蛋白吸收峰。说明提取得到的泥鳅多糖中无蛋白质和核酸等杂质成分。
【主权项】
1.一种泥鳅分泌多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)将鲜活泥鳅用蒸馏水浸养，每隔24h过滤一次，收集滤液，将滤液真空浓缩至原体积的1/4后，加入4倍无水乙醇，至终浓度为60%，静置过夜； (2)将沉淀用用无水乙醇洗涤2-3次，用少量蒸馏水将沉淀溶解，至沉淀浓度为4%，加入6%复合酶水解蛋白等杂质成分，40°C温浴lh，在沸水浴中保温20min，进行酶灭活； (3)加入savge溶液，在温度为5°C，转速为10000 r/min的条件下，离心5 min，去除沉淀，收集上清，加萃取剂萃取，去除游离蛋白质后，取水相； (4)水相装入截留分子量为8000-10000的透析袋中，流水透析2~3天。2.将透析后透析袋内的溶液经冷冻干燥得白色絮状粉末，即为提取得到的泥鳅分泌多糖。3.如权利要求1所述的一种泥鳅分泌多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤(4)中复合酶是:由木瓜蛋白酶:中性蛋白酶=1:1配制而成。4.如权利要求1所述的一种泥鳅分泌多糖的提取方法，其特征在于，所述步骤(5)中萃取剂是:由氯仿-正丁醇=1: 4配制而成。5.如权利要求1?3任一项所述的一种泥鳅分泌多糖的提取方法得到的泥鳅多糖。6.一种如权利要求4所述的泥鳅多糖的用途，其特征在于，可广泛应用于食品、医药、保健品等领域。
【专利摘要】一种泥鳅分泌多糖的提取方法，包括以下步骤：分泌液收集浓缩；醇沉；酶解；萃取；透析；冻干。本发明方法提取的泥鳅多糖，在抗肿瘤、防衰老、抗炎症、降血脂等方面发挥作用，可广泛应用于食品、医药、保健品等领域，应用前景广阔。
【IPC分类】C08B37/00
【公开号】CN105085699
【申请号】CN201510495212
【发明人】宁发子, 邓小玲, 宁成勇
【申请人】重庆都好生物科技有限公司
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2015年8月13日