Haynaldia vi llosa chromatinat the Pm21 locus for powdery mildew resistance in wheat.Molecular Breeding,2013，31:477-484)；
宁麦9号，中感白粉病(姚金保等，小麦优良亲本宁麦9号的研究与利用，核农学报，2012,26 (I):17-21)；
普通小麦-簇毛麦6VS/6AL易位系92R137，抗白粉病(齐莉莉等，小麦白粉病新抗源-基因作物学报，1995,21(3):257-262 ;Chen PD, Qi LL, Zhou B, Zhang SZ, LiuDJ.Development and molecular cytogenetic analysis of ^\\eat~Haynaldia villosa6VS/6AV translocat1n lines specifying resistance to powdery mildew.Theor.Appl.Genet., 1995，91: 1125-1128)；
普通小麦-簇毛麦6VS小片段易位系YC72-2，抗白粉病(Yang XM, Cao AZ, SunYL, Chen PD.Tracing the locat1n of powdery mildew resistance-related geneStpk-V by FISH with a TAC clone in Triticum aes ti vum -Haynaldia villosa alienchromosome lines.Chinese Science Bulletin, 2013, 58(33):4084-4091)；
南农9918 (陈佩度等，抗白粉病高产小麦新品种南农9918.南京农业大学学报，2002，25 (4):105-106)；
扬麦18 (张伯桥.应用滚动回交选育抗白粉病小麦新品种扬麦18.中国农学通报，2009,25 (13):74-77)；
郑麦883 (桑大军等，河南省小麦品种白粉病抗性基因的分子鉴定及分子标记辅助育种.华北农学报，2006，21 (I):86-91 ；)；
普通小麦-簇毛麦6V附加系06R33，6V代换系06R41，6V添加缺失系del6VS_l，6VS易位系 92R139、92R90，6VS 小片段易位系 YC138-4、NJ4、YC24、NJl-15、YC146_4(Yang XM, CaoAZ, Sun YL, Chen PD.Tracing the locat1n of powdery mildew resistance-relatedgene Stpk-V by FISH with a TAC clone in Triticum aes ti vum -Haynaldia villosaalien chromosome lines.Chinese Science Bulletin, 2013, 58 (33): 4084-4091 ;杨学明.与小麦抗白粉病相关的价-5/77况基因的物理定位及其转基因小麦植株的FISH鉴定.南京农业大学博士学位论文，2012)。
[0015]实施例1标记引物InDelwl9。与NAU/xibaol5 9。2在不同小麦遗传材料中的对比实验
分别以普通小麦中国春、宁麦9号、普通小麦-簇毛麦6VS/6AL易位系92R137、普通小麦-簇毛麦6VS小片段易位系YC72-2的DNA为模板，以InDelwl90为引物进行PCR扩增。
[0016]PCR 反应体系为 25μ?，包含 DNA 模板 40 ng, SEQ ID NO:1 与 SEQ ID NO: 2 引物各
5pmol, I XPCR buffer, 1.5 mM MgCl2,0.2 mmol dNTP, Taq DNA polymerase IU ；
PCR反应循环程序为:94°C预变性3min，94°C变性30s，58°C退火30s，72°C延伸30s，35个循环；72°C延伸1min ;4°C保存；
PCR产物用1% Metaphor agarose胶电泳，电泳电压100v,电泳时间2h,结果如图1所示，其中，泳道M为分子量标记，泳道I为普通小麦中国春，泳道2为宁麦9号，泳道3为普通小麦-簇毛麦6VS/6AL易位系92R137，泳道4为普通小麦-簇毛麦6VS小片段易位系YC72-2，普通小麦-簇毛麦6VS/6AL易位系92R137和普通小麦-簇毛麦6VS小片段易系YC72-2中均能扩增出大小为190bp的特异性条带和199bp条带，而普通小麦中国春和宁麦9号中仅扩增出199bp的条带。
[0017]以普通小麦中国春、宁麦9号、普通小麦-簇毛麦6VS/6AL易位系92R137、普通小麦-簇毛麦6VS小片段易位系YC72-2的DNA为模板，NAU/xibaol5 9。2为引物，进行PCR扩增，引物序列及扩增方法如《A sequene-specif ic PCR marker linked withPm21 distinguishes chromosomes 6AS, 6BS, 6DS of Triticum aesti vum and 6VS ofHaynaldia villosa.》(Cao AZ, Wang XE, Chen YP, Zou Xff, Chen PD.Plant Breeding,2006，125: 201-205)所述，其扩增结果如图2所示，其中，泳道M为分子量标记，泳道5为普通小麦中国春，泳道6为宁麦9号，泳道7为普通小麦-簇毛麦6VS/6AL易位系92R137，泳道8为普通小麦-簇毛麦6VS小片段易位系YC72-2，抗白粉病植株普通小麦-簇毛麦6VS/6AL易位系92R137与普通小麦-簇毛麦6VS小片段易位系YC72-2均扩增出5个条带，而易感白粉病植株普通小麦中国春和宁麦9号扩增出4个条带。
[0018]实施例2标记引物InDelwl90在普通小麦-簇毛麦6V异染色体系中的分析
以不同小麦材料的DNA为模板，InDelwl90为引物，对普通小麦-簇毛麦6V异染色体系小麦进行PCR扩增及电泳，PCR反应体系和电泳与实施例1相同，电泳结果如图3所示，其中泳道M为分子量标记，泳道I为普通小麦-簇毛麦6VS/6AL易位系92R137，泳道2为普通小麦中国春，泳道3为南农9918，泳道4为扬麦18，泳道5为郑麦883，泳道，6为06R33，泳道 7 为 06R41，泳道 8 为 del6VS-l，泳道 9 为 92R139,泳道 10 为 92R90,泳道 11 为 YC138-4，泳道12为NJ4，泳道13为YC24，泳道14为NJ1-15，泳道15为YC146-4 ;结果表明在抗白粉病植株普通小麦-簇毛麦6V异染色体系中均能稳定的扩增出大小为190bp的特异性条带以及199bp条带,而在易感白粉病品种普通小麦中国春只能扩增出199bp条带。
[0019]实施例3
标记引物InDelwl9。在宁麦9号与小麦-簇毛麦6VS小片段易位系YC72-2杂交F2代植株中验证
以宁麦9号XYC72-2的F2代群体中的18个植株以及2个亲本的DNA为模板进行PCR扩增，PCR反应体系和电泳与实施例1相同，电泳结果如图4所示，其中M为分子量标记，泳道I为亲本YC72-2，泳道2为亲本宁麦9号，泳道3-20 SF2代植株，泳道5、6、10、11、13、14、15、16、17、18、20的F2R植株以及泳道I的亲本YC72-2中扩增出大小为190bp的特异性条带以及199bp条带，为抗白粉病植株，泳道3、4、7、8、9、12、19的F2代单株以及泳道2的亲本宁麦9号只扩增出199bp条带，为感白粉病植株。
【主权项】
1.一种小麦抗白粉病基因Stpk-V的标记引物,其特征在于，小麦抗白粉病基因Stpk-V的标记引物InDelwl90,由核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的上游引物和如SEQ ID NO:2所示的下游引物组成。2.如权利要求1所述小麦抗白粉病基因K的标记引物在抗小麦白粉病K基因检测中的应用。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，以被检测小麦植株的DNA为模板，以SEQIDNO:1和SEQ ID NO:2为引物进行PCR扩增，扩增产物进行电泳检测是否含有大小为190bp的特异性条带，若存在，则具有小麦抗白粉病基因Stpk-F，为抗白小麦粉病植株。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增为: PCR 反应体系为 25μ?:DNA 模板 40 ng，引物 SEQ ID NO:1 和 SEQ ID NO:2 各 5 pmol,I XPCR buffer，1.5 mM MgCl2,0.2 mM dNTP，Taq DNA polymerase IU ； PCR反应循环程序为:94Γ预变性3min，94Γ变性30s，58Γ退火30s，72Γ延伸30s，35个循环；72°C延伸1min ； 所述电泳检测检测是指:1% Metaphor agarose胶电泳后检测，电泳电压10v,电泳时间2ho
【专利摘要】本发明提供一种小麦抗白粉病基因<i>Stpk-V</i>的标记引物以及其在抗小麦白粉病<i>Stpk-V</i>基因检测中的应用，该标记引物InDelw190由核苷酸序列如SEQ？ID？NO:1所示的上游引物和如SEQ？ID？NO：2所示的下游引物组成；本发明是通过InDel位点发展的分子标记引物，具有稳定性好，共显性和容易被检测的优点，可被用于大规模的分子标记辅助选择育种中。
【IPC分类】C12N15/11, C12Q1/68
【公开号】CN105087760
【申请号】CN201410189567
【发明人】杨学明, 吕远大, 周淼平, 姚金保, 杨丹, 马鸿翔
【申请人】江苏省农业科学院
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2014年5月7日