Lpniskp修饰的吲哚喹嗪，其制备，纳米结构，活性和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6, 7,12-四氨巧隙巧，3-a]哇嗦-6-甲 醜-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro。涉及它的制备方法，涉及它的纳米结构，涉及它的体内 外抗肿瘤作用，涉及它抗肿瘤细胞粘附侵袭和迁移的作用。因而本发明涉及它在制备抗肿 瘤药物，制备抗肿瘤细胞粘附侵袭和迁移药物中的应用。本发明属于生物医药领域。 技术背景
[0002] 恶性肿瘤严重威胁人类的健康。除了自身对肿瘤患者的预后恶劣之外，恶性肿瘤 并发的炎症、血栓和转移进一步恶化患者的预后。例如，超过90%W上的恶性肿瘤患者都是 死于肿瘤转移。肿瘤转移依赖于4个因素；1)肿瘤细胞表面形成微血栓，逃避巨瞻细胞吞 瞻，通过血液循环迁移到远端；2)迁移到远端的肿瘤细胞粘附到血管壁；3)细胞粘附到血 管壁的肿瘤细胞通过侵袭出血管而进入正常组织。
[0003] 由于现有抗肿瘤药物不具备抗转移作用，所W疗效不理想。发明同时具有抗肿瘤、 抗炎症、抗血栓和抗肿瘤转移作用的药物是临床的迫切需求。
[0004] RGD四肤，即RGDS，RGDF和RGDV是整合素aV目3的阻断剂，具有抗血栓和抗细胞 粘附活性。Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro则具备抗肿瘤细胞迁移作用。申请人曾经把 RGD四肤与雌激素偶联，制备没有凝血副作用的抗骨质疏松剂。申请人曾经把RGD四肤与四 氨-目-巧晰-3-駿酸偶联制备高效的抗血栓剂。申请人也曾经用氨基酸修饰四氨-目-巧 晰-3-駿酸、目-巧晰-3-駿酸及1-位取代的目-巧晰-3-駿酸，包括1-位取代的四 氨-目-巧晰-3-駿酸或1-位取代的目-巧晰-3-駿酸制备高效的抗血栓剂或抗肿瘤剂。 下面是发明人创造的结构类型的代表。尽管发明人付出了大量研究精力，筛选了数百种化 合物，一直没有得到同时具有抗肿瘤和抗肿瘤转移作用的化合物。
[0005] 发明人在分析数百种化合物的结构及活性变化的基础上，认识到将 Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro与化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6, 7,12-四氨日引巧巧，3-a] 哇嗦-6-駿酸偶联，形成的化合物会同时具有抗肿瘤和抗肿瘤转移作用。基于送个认识，发 明人提出了本发明。
【发明内容】
[0006] 本发明的第一个内容是提供下面结构的化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6,7，12-四 氨口引巧巧，3-日]哇嗦-6-甲醜-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro。
[0007]
[0008] 本发明的第二个内容是提供化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6,7，12-四氨巧隙巧， 3-a]哇嗦-6-甲醜-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro的制备方法，该方法包括：
[0009](1)在多聚磯酸的存在下，k色氨酸和苯甲醇反应，生成k色氨酸予醋；
[0010] (2)在H氣己酸的存在下，在二氯甲焼中1，1，3,3-四甲氧基丙焼和心色氨酸予醋 缩合为（3巧-1-(2,2-二甲氧己基）-2,3,4,9-四氨-目-巧晰-3-駿酸予醋；
[0011] 做在H己胺的存在下，在丙丽中双己帰丽和（3巧-1-(2,2-二甲氧己基）-2,3,4, 9-四氨-目-巧晰-3-駿酸予醋缩合为（3巧-1-(2,2-二甲氧己基）-2-己醜己醜基-2, 3， 4,9-四氨-目-[]卡晰-3-駿酸予醋；
[001引 （4)在盐酸水溶液（2M)的存在下，在丙丽中（3巧-1-(2,2-二甲氧己基）-2-己醜 己醜基-2, 3,4,9-四氨-目-巧晰-3-駿酸予醋氧化环合为化巧-苯基-3-己醜基-4-氧 代-4,6, 7,12-四氨日引巧[2, 3-a]哇嗦-6-駿酸醋；
[001引 （5)冰浴下在化OH的水溶液（2M)和甲醇中，（6S)-苯基-3-己醜基-4-氧代-4，6, 7,12-四氨巧隙[2, 3-a]哇嗦-6-駿酸醋转化为化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6, 7,12-四 氨剛巧巧，3-a]哇嗦-6-駿酸；
[0014] (6)采用逐步缩合法，在N，N-二环己基碳二亚胺和N-居基苯拼H氮哇的存在下， 在干燥四氨巧喃中反应，得到全保护多肤序列Boc-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys(Fmoc)-Pro-OBzl；
[0015] (7)冰浴下在氯化氨的己酸己醋溶液（4M)中，全保护多肤序列Boc-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys(Fmoc)-Pro-OBzl脱除Boc得Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys(Fmoc)-Pro-OBzl;
[0016] (8)在1-己基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐和N-居基苯拼H氮哇存在 下，在无水N，N-二甲基甲醜胺中化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6, 7,12-四氨剛巧巧，3-a] 哇嗦-6-駿酸和Leu-Pro-Asn-IIe-Ser-Lys(Fmoc) -Pro-OBz1 缩合为化巧-3-己醜基-4-氧 代-4,6, 7,12-四氨日引B朵[2, 3-日]哇嗦-6-甲醜-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys(Fmoc)-Pro-OB zl;
[0017] (9)冰浴下在化OH的水溶液（2M)和甲醇中，化巧-3-己醜基-4-氧代-4， 6,7,12-四氨日引B朵[2, 3-a]哇嗦-6-甲醜-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys(Fmoc)-Pro-OBzl转化为化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6, 7,12-四氨剛巧[2, 3-a]哇嗦-6-甲 酉先-Leu-Pro-Asn-IIe-Ser-Lys-ProO
[0018] 本发明的第H个内容是测定化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6,7，12-四氨剛巧巧， 3-a]哇嗦-6-甲醜-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro的纳米结构。
[0019] 本发明的第四个内容是评价化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6, 7,12-四氨巧隙巧， 3-a]哇嗦-6-甲醜-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro的体外抑制肿瘤细胞增殖的作用。
[0020] 本发明的第五个内容是评价化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6, 7,12-四氨巧隙巧， 3-a]哇嗦-6-甲醜-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro对荷S180小鼠肿瘤生长的抑制作用。
[0021] 本发明的第六个内容是评价化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6, 7,12-四氨巧隙巧， 3-a]哇嗦-6-甲醜-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro体外抑制肿瘤细胞粘附侵袭和迁移的 作用。
【附图说明】
[0022] 图I.发明人创造的抗血栓或抗肿瘤活性化合物的结构类型代表，式中AA为k氨 基酸或甘氨酸。
[002引图2.化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6, 7,12-四氨日引巧[2, 3-a]哇嗦-6-甲 醜-Lys-Glu的合成路线.（i)多聚磯酸，苯甲醇，8(TC ;(ii)l，l，3,3-四甲氧基丙焼，H氣 己酸，二氯甲焼；（iU)双己帰丽，立己胺，丙丽；（iv)盐酸水溶液（2M)，丙丽；（V)化OH水溶 液（2M)，甲醇，(TC ; (Vi) 1-己基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐，N-居基苯拼H氮 哇，二氯甲焼/N，N-二甲基甲醜胺；（Vii)化OH水溶液（2M)，甲醇，(TC; (Viii)N-居基苯弓并H 氮哇，N，N-二环己基碳二亚胺，N-甲基吗晰，四氨巧喃；（ix)氯化氨的己酸己醋溶液（4M)， (TC ;(x)H2，Pd/C，甲醇。
[0024]图3.化合物7在纯水溶液中1X10 %浓度下的透射电镜照片。
【具体实施方式】
[00巧]为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。送些实施例完全是例证性的，它 们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
[0026] 实施例1制备k色氨酸予醋磯酸盐（1)
[0027] 将20. 4旨(100臟〇1化-色氨酸、120mmol苯甲醇和120mmol多聚磯酸依次加入 500ml茄瓶中，瓶口安装冷凝管，置于油浴中加热至80°C，反应72小时，TLC显示原料完全 消失，反应结束。将反应液冷却至室温，加入30ml无水己離，析出白色固体，揽拌2小时，反 应液减压过滤，得白色固体，用无水己離磨洗3次，得35. 4g(90. 4% )目标化合物，为白色固 体。ESI-MS(m/e) :393. 1[M+H]+。
[002引实施例2制备（3巧-1-(2,2-二甲氧己基）-2,3,4,9-四氨-目-巧晰-3-駿酸予 醋似
[0029] 将250ml邸2化加入500ml茄瓶中，冰浴下依次加入15mll，l，3,3-四甲氧基丙焼 和14ml H氣己酸，揽拌0. 5小时，加入20.Og(68mmol) k色氨酸予醋，室温揽拌120小时， 反应结束。冰浴揽拌下向反应液中缓慢加入饱和化2〇)3水溶液，剧烈揽拌，至水层抑为7， 分离二氯甲焼层，二氯甲焼层用5% NaHC〇3水溶液和饱和化Cl水溶液萃洗3次，二氯甲焼 层用无水Na2S〇4干燥，减压过滤，滤液减压浓缩至干，残留物经硅胶柱层析纯化（石油離： 丙丽=3 : 1)，得9. 38g(35%)目标化合物，为无色油状物。ESI-MS(m/e) :395. 2[M+田+。
[0030]实施例3制备（3巧-1- (2，2-二甲氧己基）-2-己醜己醜基-2，3，4，9-四氨-目-巧 晰-3-駿酸予醋（3)
[0031]将 9. 38g(23.8mmol) (3巧-1- (2, 2-二甲氧己基）-2, 3,4,9-四氨-目-巧晰-3-駿 酸予醋溶于200ml丙丽，冰浴揽拌下加入2. 89ml双己帰丽和1. 81mlH己胺，室温揽拌18 小时，TLC显示原料完全消失，反应结束。冰浴揽拌下加入IOml蒸傭水，揽拌1小时，减压 浓缩除去丙丽，残留物用二氯甲焼萃取3次，合并二氯甲焼层，依次用5%NaHC化水溶液和 饱和化Cl水溶液萃洗3次，二氯甲焼层用无水Na2S〇4干燥，减压过滤，滤液减压浓缩至干， 残留物经硅胶柱层析纯化（石油離：丙丽=4 : 1)，得8. 88g(78%)目标化合物，为无色 油状物。ESI-MS(m/e) :479. 2[M+田+。
[003引实施例4制备化巧-苯基-3-己醜基-4-氧代-4,6, 7,12-四氨巧隙[2, 3-a]哇 嗦-6-駿酸醋（4)
[0033] 将8.88邑（18.6臟〇1)(3巧-1-(2,2-二甲氧己基）-2-己醜己醜基-2,3,4,9-四 氨-目-巧晰-3-駿酸予醋溶于200ml丙丽，冰浴揽拌下加入2. 83