基甲醜胺，冰浴揽拌下加入0. 162g(l.20mmol)N-居基 苯弓并H氮哇，将0. 273g(1. 20mmol) 1-己基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐溶于3ml 二氯甲焼，滴加N-甲基吗晰调节抑至7,加至上述反应液中，揽拌0. 5小时得到反应液，将 1. 172g(l. 05mmol)肥 1.Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys(Fmoc)-Pro-OBzl溶于 5ml二氯甲焼，冰 浴揽拌下滴加N-甲基吗晰调节抑至8,加入刚刚得到的反应液中，缓慢滴加N-甲基吗晰调 节抑至9,室温揽拌20小时，TLC显示原料完全消失，反应结束。冰浴揽拌下加入20ml饱和 化Cl水溶液，反应液用二氯甲焼萃取3次，合并二氯甲焼层，依次用饱和NaHCA水溶液、饱 和化Cl水溶液、5%K服〇4水溶液、饱和化Cl水溶液、5%Na肥化水溶液和饱和化Cl水溶液 各萃洗3次，二氯甲焼层用无水Na2S〇4干燥，减压过滤，滤液减压浓缩至干，经硅胶柱层析纯 化（二氯甲焼：甲醇=10 : 1)，得〇.451g(32.6%)目标化合物，为黄色固体。ESI-MS(m/ e) :1384.6[M+H]+。
[0064] 实施例8制备化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6, 7,12-四氨巧隙巧，3-a]哇嗦-6-甲 酉先-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro(7)
[0065] 将0.350邑〇).25臟〇1)化巧-3-己醜基-4-氧代-4,6,7，12-四氨日引巧巧，3-曰] 哇嗦-6-甲醜-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys(Fmoc)-Pro-OBzl溶于IOml甲醇，冰浴揽拌下 滴加化OH水溶液（2M)调节抑至12,冰浴揽拌10小时，TLC显示原料完全消失，反应结 束。冰浴揽拌下滴加饱和KHS04水溶液调节抑至7,减压浓缩除去甲醇，残留物加5ml蒸 傭水，冰浴揽拌下滴加稀氨水调节抑至9,经C18柱层析纯化（甲醇：水=7 : 1)，得 0. 087g(32. 0%)目标化合物，为黄色固体。Mp;231.5-233. 8°C;[a巧= -20.64(C=O. 10， 邸30田；IR化化）；3408,3379,3350,3323,3074, 3045,2962,2877,1666,1639,1544,1444， 1327,1273,1242,1205,1172,1097,1033,871,838,765cm' ；ESI-MS(m/e) :1072. 5[M+H]； Ih-NMR巧OOMHz，DMS0-d6) : 5/ppm= 11.92(s，lH)，8. 17(d，J= 8. 0Hz，lH)，7. 67(d，J= 7. 5Hz，lH)，7. 44(d，J= 10. 0Hz，lH)，7. 28(t，J= 6. 0Hz，lH)，7. 09(t，J= 6. 0Hz，lH), 6. 81 (d，J= 8.0Hz，IH) ,5.97 (d，J= 8.0Hz，IH) ,4.55 (d，J= 7.0Hz，IH) ,4.45 (m，3H), 4. ：M(dd，Jl= 3.甜z，J2 = 13. 0Hz，lH)，4. 27(d，J= 7. 0Hz，2H)，4. 18(m，3H)，4. 10(d，J =7.甜z，lH)，4. 04(t，J= 3. 0Hz，lH)，3. 64(d，J= 2.甜z，lH)，3. 57(d，J= 17. 0Hz，lH), 3. 53 (d，J= 2. 5Hz，IH)，3. 35 (d，J= 5.OHz，IH)，3. 18 (s，IH)，2. 96 (d，J=6.OHz，IH)， 2. 89(d，J=6. 0Hz，2H)，2. 53(s，4H)，2. 37(s，lH)，2. 15(m，lH)，1.94(s，3H)，1.88(t，J= 7.OHz，2H)，I. 81 (s，2H)，I. 71 (s，IH)，I. 58 (m，5H)，I. 43 (t，J= 4.OHz，3H)，I. 32 (t，J= 6.甜z，3H)，I. 23 (m，4H)，I. 06 (s，2H)，0. 82 (d，J=6.甜z，3H)，0. 77 (m，IOH).HPLC:检测波 长254nm，4.6X250mmCis色谱柱，流动相邸3地：&0 =8. 5 :I. 5,流速；0.6血/min,纯度 96. 3%。
[0066] 实验例1测定化合物血药浓度下的透射电镜照片
[0067] 将化合物7按照1X108M的浓度配置纯水溶液，均匀的铺在铜网上，在透射电镜 灯EM，JEM1230JEOL)下观察化合物的自组装性质。得到的照片如图2。结果表明，化合物 7在水中可形成纳米颗粒，直径为44-222nm。
[0068] 实验例2测定化合物7对肿瘤细胞的细胞毒作用
[0069] 1)本发明的化合物7用含0. 1 %DMSO的培养基配巧喊所需浓度。
[0070] 2)实验用的肿瘤细胞为化60 (人白血病细胞），A549(人肺癌细胞），HeLa(人宫 颈癌细胞），HCT-8(人结肠癌细胞），MCF-7 (人乳腺癌细胞），SH-sy5y(人神经母细胞瘤细 胞），化ca-T(人永生化表皮细胞）和S180 (小鼠腹水瘤细胞）。
[0071] 3)实验方法HL60、A549、HeLa、肥T-8、MCF-7、S180 细胞选用RPMI-1640 培养基； SH-sy5y、化ca-T选用DMEM培养基。培养基中均含10%经灭活的胎牛血清和1XIO5IVL青 霉素和lOOmg/L链霉素。
[0072] 贴壁细胞4549、胎1^日、肥1'-8、1〔。-7、5护3757、化。日-1'和半贴壁细胞5180的培养： 分别将生长状态良好、处于对数生长期的细胞W5XIO4个/mL的密度接种于96孔板，每孔 100U以置于37°C和5%C〇2的细胞赔育箱中培养4小时，然后按预设的浓度梯度加入经灭 菌处理的化合物7与含0. 1 %DMSO的培养基配制成的溶液，每孔25UL，对照组加入等体积 的溶解样品的溶媒。继续培养48小时后，每孔加25UL浓度为5mg/mL的MT溶液，置于 37°C和5%C〇2的细胞赔育箱中培养4小时。小必除去上清液后每孔加入100UL的二甲基 亚讽，振荡约15分钟溶解紫色残留物（甲殘），立即于酶标仪上检测0.化（吸光度）值，波 长为570nm。
[0073] 悬浮细胞化60的培养：将生长状态良好、处于对数生长期的细胞W5XIO4个/mL 的密度接种于96孔板，每孔100U以然后按预设的浓度梯度加入经灭菌处理的化合物7与 含0. 1 %DMSO的培养基配制成的溶液，每孔25UL，对照组加入等体积的溶解样品的溶媒， 置于37°C和5%C〇2的细胞赔育箱中培养48小时。每孔加入25UL浓度为5mg/mL的MTT 溶液，置于37°C和5%C〇2的细胞赔育箱中培养4小时。3000转离必15分钟，小必吸出上清 液，每孔加入100UL的二甲基亚讽溶解紫色残留物（甲殘），立即于酶标仪上检测0.化（吸 光度）值，波长为570皿。
[0074] 按下式求出各个浓度下化合物5抑制肿瘤细胞增殖的活性：
[0075]细胞增殖（％ )=(化合物7组平均0.化值/对照组平均0.化值）X100 %，实 验重复3次，W细胞增殖对药物浓度作图，按作图法求出ICw(半数有效抑制浓度）值。
[0076] 4)结果见表 1-2。结果表明，化合物 7 对HL60，A549，HeLaJCT-8，MCF-7，SH-sy5y， 化ca-T和S180等8株肿瘤细胞无明显细胞毒作用。
[0077] 表1.化合物7对化60、A549、化La和肥T-8细胞增殖的影响（ICs。，均值+SDUM)
[0079] n = 15
[0080] 表2.化合物7对MCF-7、SH-sy5y、化ca-T和S180细胞增殖的影响（IC5。，均值 +SDuM)
[0083] n = 15
[0084] 实验例3评价化合物7的体内抗肿瘤活性
[0085] 1)本发明的化合物7含吐温80的生理盐水溶解，阿霉素和阿糖胞巧用生理盐水溶 解作为阳性对照，含吐温80的生理盐水作为阴性对照；
[0086]。化合物7和含吐温80的生理盐水均灌胃给药，化合物7的给药剂量为 0.1Umol/kg，含吐温80的生理盐水的给药剂量为0.2血/20g，连续给药10天，共给药10 次；阿霉素腹腔给药，给药剂量为2U mol/kg，连续给药10天，共给药10次；阿糖胞巧腹腔 给药，给药剂量为8.2U mol/kg，连续给药10天，共给药10次。
[0087]扣实验动物为ICR雄性小鼠（清洁级），体重20±2g，每组15只小鼠。
[008引4)瘤源为小鼠S180肉瘤，购自北京大学医学部动物实验中必，自行传代维持。
[0089] 5)动物模型与治疗无菌条件下抽取接种生长旺盛的S180腹水瘤瘤液，用生理盐 水稀释成（1:2)的液体充分混合，将肿瘤细胞悬液用新鲜配制的0.2%台盼藍染色，混匀 后按白细胞计数方法计数，染藍色者为死细胞，不染色者为活细胞，并按如下公式计算细胞 浓度和细胞存活率。
[0090] 细胞浓度=4大方格内活细胞数/4XIO4X稀释倍数=细胞数/mL
[0091] 细胞存活率=活细胞数/(活细胞数+死细胞数）X100%
[0092] 将存活率大于90 %的瘤液用匀浆法制备成2. 0XIO7个/mL的细胞悬液，于鼠胶皮 下接种，0. 2血/只，制造S180荷瘤小鼠。肿瘤接种24h后，治疗组小鼠每日口服化合物7， 剂量为0.1Umol/kg。空白组小鼠每日口服0. 2血含吐温80的生理盐水。阳性对照组小 鼠每日腹腔注射阿霉素和阿糖胞巧，剂量为2ymol/kg和8.2ymol/kg。实验进行至第11 天，称小鼠体重，己離麻醉，脱颈椎处死小鼠，然后用綴子固定小鼠右胶肿瘤生长部位，剪开 皮肤，暴露肿瘤，纯性剥离，称重，按如下公式计算抑瘤率；抑瘤率％ =(阴性对照组平均瘤 重-化合物7组平均瘤重）/阴性对照组平均瘤重X100%。实验数据采用t检验和方差分 析，瘤重則；+SDg)表示。结果见表3。由表3可W看出，在0.1ymol/kg的口服剂量下， 化合物7治疗组小鼠的瘤重与生理盐水组相比具显著性差异，与阿糖胞巧组相比没有显著 性差异。可见，化合物7的有效剂量比阿糖胞巧低82倍。
[0093] 表3.化合物7的体内抗肿瘤活性
[0096] n= 15 ;a)与生理盐水组相比P< 0. 01，与阿糖胞巧组相比P> 0. 05.
[0097] 实验例4评价化合物5和7的体外抗肿瘤细胞粘附活性
[0098] 1)化合物5和7用含0. 1 %DMSO的DMEM培养基配制成浓度为100UM的溶液。
[0099] 2)细胞为肥化M3 (高转移人肝癌