一种酿酒酵母菌菌株及其用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种酿酒酵母菌菌株，以及所述酿酒酵母菌菌株的用途。
【背景技术】
[0002] 近年来，随着设施栽培技术水平的提高，我国南方地区逐步成为葡萄种植的优势 区域，同时南方葡萄产业的发展，南方许多地区葡萄酒酿造产业也逐渐兴盛。葡萄酒的产 量、质量和发酵生产管理受到葡萄中酵母菌群极大影响，同时酵母菌群对于葡萄酒特色和 风格的形成也有重要的作用。我国气候多样化的特点造就了非常丰富的葡萄酒酵母资源。 在葡萄种植园区，天然酵母与葡萄相伴而生，逐渐形成其特有的酵母菌群，对特色葡萄酒的 酿造起到不可替代的作用。然而，目前对于南方地区葡萄天然酵母菌群的研究还很少而且 不系统，这在一定程度上限制了南方特色葡萄酒产业的发展。因此，对南方葡萄产区野生酵 母菌的分离筛选研究，对南方葡萄酒产业的发展具有重要的实践意义。
【发明内容】
[0003] 本发明要解决的技术问题之一，在于提供一种酿酒酵母菌菌株。
[0004] 本发明是这样实现上述技术问题之一的：一种酿酒酵母菌菌株，所述菌株为酿酒 酵母菌菌株乂'^(：001(3&(^]1&1'〇1115^68〇616￥181&6)，于2015年08月14日保藏于中国微生 物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编 号为CGMCCNo. 11238。
[0005] 本发明要解决的技术问题之二，在于提供一种所述的酿酒酵母菌菌株的用途
[0006] 本发明是这样实现上述技术问题之二的：一种所述的酿酒酵母菌菌株的用途，所 述酿酒酵母菌菌株VvScOOl用于葡萄果实的发酵酿酒。
[0007] 本发明的优点在于：提供了一种新的来源南方葡萄的酿酒酵母菌菌株VvScOOl， 且该酿酒酵母菌具有葡萄果实发酵能力，为研究南方特色葡萄酒的酿造提供了可能。
【具体实施方式】
[0008] 菌株保藏
[0009] 本发明中的菌株为酿酒酵母菌菌株VvScOOl(Saccharomycescerevisiae)，于 2015年08月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市 朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNo. 11238。
[0010] 本发明的酿酒酵母菌菌株VvScOOl(Saccharomycescerevisiae)是从福建省三明 市明溪县葡萄园采集的葡萄果实分离并筛选得到的菌株。
[0011] 1.酿酒酵母菌菌株VvScOOl的分离：
[0012] (1)葡萄果实自然发酵，将采摘的新鲜葡萄进行自然发酵，于发酵时期（前、中、后 三个时期）进行取样，共取15个发酵样品。发酵前期为开始发酵的第7d取样，发酵中期为 开始发酵的第15天取样，发酵后期为开始发酵的第25天取样。在恒温箱中28°C下发酵。
[0013] (2)在无菌操作下，将取步骤（1)各发酵样品（发酵汁液）5mL分别加入到装有 45mL无菌水的三角瓶中，震荡混匀后，再将溶解液分别吸取lmL至装有9mL无菌水的试管， 配成10 1浓度，依次稀释，配置成浓度梯度为10 \ 10 2、10 3、10 4、10 5、10 6的溶液，每个梯度 重复3次；
[0014] (3)取步骤（2)获得的稀释液100yL至YEH)培养基的平板上，无菌涂布棒涂匀， 涂好的平板用塑料袋装好后倒置于28°C恒温箱中培养48h;
[0015] (4)将步骤（3)培养获得的菌株重新划线接种于YEH)培养基上，并将YEH)培养基 置于28°C恒温箱中培养48h，获得酿酒酵母菌菌株VvScOOl。
[0016] 2.酿酒酵母菌菌株VvScOOl的鉴定：
[0017] 初步鉴定：
[0018] 将上述中所获得的酿酒酵母菌菌株VvScOOl重新划线接种于WL营养琼脂培养基 上，并将WL营养琼脂培养基置于28°C恒温箱中培养5d，置于LeicaM165FC高级电动荧光 体视显微镜下进行镜检观察，观察结果显示：菌落颜色为奶油色带绿色，菌落形态特征为球 形突起，表面光滑、不透明、奶油状，为酿酒酵母菌在WL培养基中的典型特征，因此，可初步 认定菌株VvScOOl为酿酒酵母菌。
[0019] 进一步鉴定：
[0020] A.活化：用接种环将所获得菌株VvScOOl划线于YEH)培养基上，并将YEH)培养 基置于恒温培养箱中培养48-72h，培养温度为28°C;
[0021 ]B.制备菌液：将步骤A所获得的菌株VvScOOl的单菌落接种于20mL的YEH)液体 培养基中，并将其置于恒温振荡摇床中培养24h，恒温振荡摇床的温度设定28°C、转速设定 170rpm/min；
[0022] C.基因组DNA的提取：取步骤B所获得的菌液lmL于已灭菌的1. 5mL离心管中，并 按照TIANampYeastDNAKit提取试剂盒说明书操作以提取菌株VvScOOl的基因组DNA;
[0023]D.菌株VvScOOl的PCR鉴定：采用26SrDNAD1/D2基因序列的特异引物NL1(5 '-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3')和NL4 (5 ' -GGTCCGTGITTCAAGACGGG-3')，进行 26S rDNAD1/D2基因序列的PCR扩增，其中，PCR反应体系（25yL体系）：
[0024]TaqPlusPCRMasterMix12. 5μ L，ddw9. 5μ L，引物NL1 1μ L，引物NL4 1μ L， 模板DNA1μ L。
[0025]PCR扩增程序：95°C预变性 5min，94°C变性lmin，52°C退火lmin，72°C延伸lmin 20s，35 个循环，72°C延伸 10min，10°C保存。
[0026]PCR反应结束后，采用1. 5%的琼脂糖凝胶电泳检测PCR反应的产物，上样量为 8μL，电压为110V，电泳时间50min，并用UVP凝胶成像仪进行检测，确定有条带后送铂尚 生物技术有限公司测序检测：测序结果与NCBI数据库比对结果表明，菌株VvScOOl同标 准菌株SaccharomycescerevisiaeAY048154(JX103177)同源性为 100%，即确认该菌株 VvScOOl为酿酒酵母菌。
[0027] 3.酿酒酵母菌菌株VvScOOl的葡萄果实发酵产酒能力检测：
[0028] 将上述分离筛选鉴定获得的酿酒酵母菌菌株VvScOOl培养离心后获得菌体，并以 安琪RV002酵母、VF、德国ERBSC0H公司生产的干酵母〇FG、法国ERBSL0H公司生产 的干酵母0FC酵母菌为对照，通过考察其发酵后葡萄酒的酒精度、还原糖、可溶性糖和酸度 等指标，初步了解其葡萄酒发酵的能力与其发酵后葡萄酒的特色，结果见表1。
[0029] 表1酿酒酵母菌菌株VvScOOl发酵后葡萄酒的理化指标
[0030]
[0031] 从表1可以看出，在相同的发酵条件下，本发明筛选出来的酿酒酵母菌菌株 VvScOOl与市售的RV002、0FC酵母菌酒精的发酵能力相当，并极显著于市售的VF和0FG酵 母；酿酒酵母菌菌株VvScOOl发酵后的葡萄酒总糖的含量最低，与市售的RV002相当，并与 VF、0FG、0FC有极显著的差异；酿酒酵母菌菌株VvScOOl发酵后的葡萄酒还原糖含量最高， 与VF、0FC有显著差异，而与RV002、0FG有极显著差异；在葡萄酒的总酸方面，酿酒酵母菌 菌株VvScOOl总酸较高，与0FC相当，与RV002、VF、0FG差异极显著。以上理化指标初步说 明，本发明的酿酒酵母菌菌株VvScOO1为较优良的南方葡萄酿酒酵母。
[0032] 综上所述，酿酒酵母菌菌株VvScOOl具有良好的葡萄果实酒精发酵能力，并具有 较优良的特性，为研究南方特色葡萄酒的酿造提供了可能。
【主权项】
1. 一种酿酒酵母菌菌株，其特征在于：所述菌株为酿酒酵母菌菌株 VvSc001(Saccharomyces cerevisiae)，于2015年08月14日保藏于中国微生物菌种保藏 管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 11238。2. -种如权利要求1所述的酿酒酵母菌菌株的用途，其特征在于：所述酿酒酵母菌菌 株VvScOOl用于葡萄果实的发酵酿酒。
【专利摘要】本发明提供了一种酿酒酵母菌菌株及其用途，所述菌株为酿酒酵母菌菌株VvSc001(Saccharomyces？cerevisiae)，于2015年08月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC？No.11238。所述酿酒酵母菌菌株VvSc001用于葡萄果实的发酵酿酒。本发明的酿酒酵母菌菌株VvSc001具有葡萄果实发酵能力，为研究南方特色葡萄酒的酿造提供了可能。CGMCC NO.1123820150814
【IPC分类】C12G1/022, C12R1/865, C12N1/16
【公开号】CN105238705
【申请号】CN201510639214
【发明人】赖呈纯, 范丽华, 黄贤贵, 潘红
【申请人】福建省农业科学院农业工程技术研究所
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2015年9月30日