[0034]步骤值）得到的富含新颖倍半祗内醋的粗产品，进行反相制备型高效液相柱层 析，用20~40 %的乙腊水洗脱，进一步优选，用30 %的乙腊水等度洗脱，洗脱所得部分流分 蒸干，即得到所述新颖倍半祗内醋。所述新颖倍半祗内醋与另一倍半祗内醋类成分极性非 常相近，普通硅胶柱层析及反相中压柱层析，均难W将运两种物质分开。制备型高效液相色 谱具有上样量大，柱效高，分离效率高等优点。实验中，首先，尝试用40%甲醇水系统为流动 相制备分离，但未能将两种极性相近的倍半祗内醋有效分离，得到的所述新颖倍半祗内醋 纯度较低，且分离效率亦非常低；随后，改用30%乙腊水为洗脱剂洗脱后，使得两种极性非 常接近的倍半祗内醋类化合物达到了良好的分离。
[0035] 本发明还提供了一种所述的倍半祗内醋类化合物在制备治疗癌症药物中的应用。 更具体地说，所述倍半祗内醋化合物对两种人源乳腺癌细胞，具有较显著的抑制作用。W MlT法，对得到的泽兰属植物中所述新颖倍半祗内醋化合物，进行了抑制人源肿瘤细胞株 增殖活性研究，结果显示，本发明制备的新颖倍半祗内醋化合物对两株人源乳腺癌细胞具 有较显著的抑制作用，给药24h后，半数抑制浓度ICw约为：2.67~3.05ymol/L。上述 细胞株可采用市售产品，如：可采用美国模式培养物集存库ATCC(Ame;ricantypecu；Uure collection)的各种细胞株。
[0036] 本发明泽兰属植物中新颖倍半祗内醋化合物可与市售或者常用的载体结合，用于 制备预防或者/和治疗，或者/和协同治疗癌症的药物。所述的药物可W为脂肪乳剂、注射 油剂、粉针剂、片剂、胶囊剂等形式。
[0037] 与现有的技术相比，本泽兰属植物中新颖倍半祗内醋化合物制备方法及其癌症治 疗应用的优点在于：化合物结构新颖，生物活性强。利用系统溶剂法及正相、反相色谱，中 压、高压色谱，分离、纯化得到了一个结构新颖的倍半祗内醋化合物。使用的溶剂廉价易得， 且毒性较低。本发明泽兰属植物中新颖倍半祗内醋的制备方法科学合理，操作简单，生产成 本低，具有良好的应用前景。
【附图说明】
[0038] 图1 (A)是化合物1的核磁共振氨谱。
[0039] 图1度）是化合物1的核磁共振碳谱。 W40] 图1 (C)是化合物1的DEPT谱。 阳OW 图1值）是化合物1的H-肥SOY谱。
[0042] 图1似是化合物1的服QC谱。
[0043] 图1 (巧是化合物1的HMBC谱。 W44] 图1 (G)是化合物1的N犯SY谱。 W45] 图1做是化合物1的高分辨质谱。
【具体实施方式】
[0046] W下通过具体实施例对本发明的内容作进一步详细的说明，但不应将实施例理解 为对本发明的限制。在不脱离本发明上述思想的情况下，根据本领域普通技术知识和常规 手段作出的各种替换手段或变更，均包含在本发明之内。 阳047] 实施例1
[0048] 本泽兰属植物中新颖倍半祗内醋的制备方法包括下述步骤：
[0049] A、提取：野马追药材打粉，过40目筛备用。取野马追药材粗粉化g，加适量95 %乙 醇润湿后装柱，再加适量95 %乙醇冷浸24h后渗漉提取，收集渗漉液。提取总溶剂体积相当 于药材质量的18倍量（总计用去95%的乙醇36L)。
[0050] B、萃取：将步骤A得到的渗漉液减压浓缩至近干，得稠浸膏84. 3g，加水混悬至1L， 分别用IL的石油酸、IL的乙酸乙醋，各萃取溶剂均萃取=次，合并各次的萃取液，分别得到 野马追石油酸萃取液，乙酸乙醋萃取液，通过TLC检识，野马追倍半祗内醋主要集中在乙酸 乙醋萃取液中，乙酸乙醋萃取液减压回收溶剂，得到野马追乙酸乙醋提取物57. 2g。
[0051] C、柱层析：取上述野马追乙酸乙醋提取物，上100~200目的正相硅胶柱进行分 离，分别使用多个不同的洗脱剂洗脱，各个洗脱剂均由石油酸和乙酸乙醋组成，且体积均为 1.5以各个洗脱剂中石油酸和乙酸乙醋的体积比分别为20:1，15:1，10:1，6:1，3: 1，2 : 1，1 : 1，0 : 1并按极性由小到大的顺序依次进行梯度洗脱。所得流分经化C、LC-MS 检识，富含所述新颖倍半祗内醋的流分，主要集中在石油酸和乙酸乙醋0 : 1的洗脱剂的洗 脱液中，收集上述洗脱液，用旋转蒸发仪在4(TC减压回收溶剂，得到富含所述新颖倍半祗内 醋的提取物9. 5邑。
[0052] D、中压柱层析及制备型高效液相柱层析：取上述提取物约4. 2g，进行中压柱层析 分离，中压柱填料为十八烷基键合相硅胶，粒径为40-60ym，样品用四氨巧喃溶解后湿法上 样，用45 %、65 %的甲醇水溶液梯度洗脱，每个梯度洗脱约化，收集65 %甲醇水洗脱液对应 的部分流分，减压回收溶剂，得到提取物约876mg，取该提取物约200mg，用流动相溶解后， 进行反相制备型高效液相柱层析，用30%的乙腊水溶液等度洗脱，收集相应吸收峰对应流 分，减压回收溶剂得到如式1所示化合物（〔22&(3〇8)约43. 8mg。 阳〇5引实施例2
[0054] A、提取：取野马追药材化g，加8倍量95%乙醇，85°C回流提取，每次提取时间为 2h，共提取3次，合并3次提取液。总计用去95%的乙醇48L。 阳化日]B、萃取：将步骤A得到的提取液减压浓缩至近干，得稠浸膏92. 7g，加水混悬至1L， 分别用IL的石油酸、IL的乙酸乙醋萃取，各萃取溶剂均萃取=次，合并各次的萃取液，分 别得到野马追石油酸萃取液，乙酸乙醋萃取液，通过TLC检识，野马追倍半祗内醋类成分主 要集中在乙酸乙醋萃取液中，乙酸乙醋萃取液减压回收溶剂，得到野马追乙酸乙醋提取物 60. 3g〇
[0056] C、柱层析：取上述野马追乙酸乙醋提取物，上100~200目的硅胶正相柱进行分 离，然后分别使用多个不同的溶剂梯度洗脱，各个洗脱剂均由石油酸和乙酸乙醋组成且体 积均为1.SL各个洗脱剂中石油酸和乙酸乙醋的体积比分别为20 : 1，15 : 1，10 : 1，6 :1，3 : 1，2 : 1，1 : 1，0 : 1，并按极性由小到大的顺序依次进行梯度洗脱。所得流分 经化C、LC-MS检识，所述新颖倍半祗内醋主要集中于石油酸和乙酸乙醋0 : 1的洗脱剂的 洗脱液中，收集上述洗脱液，用旋转蒸发仪在40°C减压回收溶剂，即得到富含新颖倍半祗内 醋的提取物11. 2邑。
[0057] D、中压柱层析：取上述提取物约4. 2g，进行中压柱层析分离，中压柱填料为十八 烷基键合相硅胶，粒径为40-60ym，样品用45 %甲醇水溶解后，湿法上样，用45 %、65 %的 甲醇水溶液梯度洗脱，每个梯度洗脱约化，收集65%甲醇水洗脱液对应的部分流分，减压 回收溶剂，得到提取物约816mg，取该提取物约200mg，用流动相溶解后，进行反相制备型高 效液相柱层析，用30%的乙腊等度洗脱，收集相应吸收峰对应流分，减压回收溶剂得到如式 1所示化合物也2&6〇8)约35. 4mg。 阳O郎]实施例3
[0059]A、提取：野马追药材打粉，过40目筛备用。取野马追药材粗粉化g，加适量95%乙 醇润湿后装柱，再加适量95%乙醇冷浸24h后渗漉提取，收集渗漉液。提取总溶剂体积相当 于药材质量的18倍量（总计用去95%的乙醇36L)。
[0060]B、萃取：将步骤A得到的渗漉液减压浓缩至近干，得稠浸膏82. 4g，加水混悬至1L， 分别用IL的石油酸、IL的乙酸乙醋萃取，各萃取溶剂均萃取=次，合并各次的萃取液，分别 得到野马追石油酸萃取液，乙酸乙醋萃取液，通过TLC检识，野马追倍半祗内醋主要集中在 乙酸乙醋萃取液中，乙酸乙醋萃取液减压回收溶剂，得到野马追乙酸乙醋提取物58. 3g。
[0061] C、柱层析：取上述野马追乙酸乙醋提取物，上100~200目的正相硅胶柱进行分 离，然后分别使用多个不同的洗脱剂洗脱，各个洗脱剂均由石油酸和乙酸乙醋组成，且体积 均为1.化，各个洗脱剂中石油酸和乙酸乙醋的体积比分别为20 : 1，15 : 1，10 : 1，6 : 1， 3 : 1，2 : 1，1 : 1，0 : 1并按极性由小到大的顺序依次进行梯度洗脱。所得流分经TLC、 LC-MS检识，富含所述新颖倍半祗内醋的流分，主要集中在石油酸和乙酸乙醋0 : 1的洗脱 剂的洗脱液中，收集上述洗脱液，用旋转蒸发仪在40°C减压回收溶剂，得到富含所述新颖倍 半祗内醋的提取物8. 9邑。
[0062] D、中压柱层析及制备型高效液相柱层析：取上述提取物约4. 2g，进行中压柱层析 分离，中压柱填料为十八烷基键合相硅胶，粒径为40-60 y m，样品用四氨巧喃溶解后湿法上 样，用45%、65%的甲醇水溶液梯度洗脱，每个梯度洗脱约化，收集65%甲醇水洗脱液对应 的部分流分，减压回收溶剂，得到提取物约851mg，取该提取物约200mg