一种用于内皮细胞保护的新的柠檬苦素类化合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体设及从川棟子的干燥成熟果实中分离得到的一种 具有内皮细胞保护作用的巧樣苦素类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 川棟子（又名金铃子）为棟科植物川棟Melia toosendan Sieb. et Zucc.的干燥 成熟果实，始载于《神农本草经》，冬季果实成熟时采收，为传统理气、驱虫药，广泛分布于四 川、湖南、湖北、贵州等地，W四川的产者最为上乘，故名为川棟子。其味微苦，有小毒，具有 疏肝泄热、行气止痛、杀虫等功效，适用于肝郁化火、胸胁、腕腹胀痛、痛气疼痛、虫积腹痛等 症，临床上具有较为广泛的应用。
[0003] 据研究报道，川棟子中含有多种化学成分，主要包括祗类、挥发油、巧樣苦素、黄 酬、脂肪酸、酪酸类和多糖等化合物。其中=祗类成分川棟素为棟属植物的特征性成分，又 是川棟子的毒性成分和驱虫的有效成分。川棟子挥发油的主要成分包括饱和有机酸、醇类、 醒酬类、醋类，其炮制品的挥发油成分相对于生品明显减少，而饱和有机酸的相对含量明显 增加。
[0004] 川棟子作为传统中药临床应用十分广泛，目前国内外对其药理作用的研究主要集 中在棟烧型=祗及巧樣苦素类化合物。研究表明川棟子具有驱咖杀虫、抗肿瘤、抗病毒、呼 吸抑制、抗氧化、抑制破骨细胞、镇痛等作用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从川棟子的干燥成熟果实中分离得到的一种具有内皮 细胞保护作用的巧樣苦素类化合物及其制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得W实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物（I)，
[0008]
[0009] 所述的化合物（I)的制备方法，包含W下操作步骤：(a)将川棟子的干燥成熟果 实粉碎，用70~80 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙 醋和水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；化） 步骤（a)中乙酸乙醋萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用80%乙 醇洗脱10个柱体积，收集80%乙醇洗脱液，减压浓缩得80%乙醇洗脱物浸膏；（C)步骤化） 中80 %乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为75:1、45:1、25:1、15:1和1:1的二 氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次 用体积比为20:1、15:1和8:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中 组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗 脱，收集10~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)。
[0010] 进一步地，所述大孔树脂为Dioi大孔吸附树脂。
[0011] 进一步地，所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为75 %。
[0012] 一种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的 载体。
[0013] 所述的化合物（I)在制备内皮细胞保护的药物中的应用。
[0014]所述的药物组合物在制备内皮细胞保护的药物中的应用。
[0015]本发明化合物用作药物时，可W直接使用，或者W药物组合物的形式使用。
[0016]该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017]所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料W及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物W单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】 阳〇1引图1为化合物（I)结构式；
[0019] 图2为化合物（I)理论ECD值与实验ECD值比较。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可W对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0021] 实施例1:化合物（I)分离制备及结构确证
[0022] 试剂来源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲烧为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0023] 制备方法：（a)将川棟子的干燥成熟果实（IOkg)粉碎，用75%乙醇热回流提取 (2化X3次），合并提取液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油酸（化X3次）、乙酸乙醋0LX3 次）和水饱和的正下醇0LX3次）萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（431g) 和正下醇萃取物；(b)步骤（a)中乙酸乙醋萃取物用DlOl大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗 脱8个柱体积，再用80 %乙醇洗脱10个柱体积，收集80 %乙醇洗脱液，减压浓缩得80 %乙 醇洗脱物浸膏（161g) ;(c)步骤化）中80%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比 为75:1 (8个柱体积）、45:1 (8个柱体积）、25:1 (8个柱体积）、15:1 (10个柱体积）和1:1 (5 个柱体积）的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（C)中组分4 (52g)用正相 硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1(8个柱体积）、15:1 (10个柱体积）和8:1(8个柱体 积）的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2(26g)用十八烷基娃 烧键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗脱，收集10-12个柱 体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)(37mg)。
[0024]结构确证：HR-ESIMS显示[M+Na]+为m/z 683. 3010,结合核磁特征可得分子式 为〔35恥〇12,不饱和度为12。核磁共振氨谱数据5H(ppm，DMS0-d6,600MHz) :H-1(5.42， d，J = 4. 0)，H-2 (2. 39, dd，J = 15. 0,4. 0)，H-2 (2. 86, d，J = 15. 0)，H-5 (2. 33, d，J = 7. 5)，H-6(2. 14, m)，H-6(3. 15, d，J = 18. 9)，H-9(3. 32, d，J = 7. 6)，H-1U5. 28, dd，J =11.0,7. 6)，H-12巧.62, d，J = 11.0)，H-15(3. 66, s)，H-16(1.69, m)，H-16(2. 09, m)， H-17 (2. 88, dd，J = 10. 5, 7. 3)，H-18〇). 83, s)，H-19 (I. 55, s)，H-2U6. 97, s)，H-22化.04， s)，H-23(7. 16, s)，H-28(0. 91，s)，H-29(l. 02, s)，H-30(4. 98, s)，H-30巧.27, s)， 7-0邸3(3. 47, s)，I-OAc (1.86, s)，Il-OAc (1.90, s)，H-2'（1.98, m)，H-3'（0.80, d，J = 7.0)，H-4'〇).81，d，J = 7.0);核磁共振碳谱数据5 c(卵m，DMS0-de，150Hz) :77. 7(CH，1-C)， 36. 8(細2,2-〇，211. 6(C，3-C)，49. 0(C，4-C)，44. I (CH，5-C)，31. 3(邸2,6-〇，174. 5(C， 7-C)，134. I (C，8-C)，50. 2(CH，9-C)，46. I (C，10-C)，71. 7(CH，11-C)，74. I (CH，12-C)， 45. 2 (C，13-C)，70. 7 (C，14-C)，59. I (CH，15-C)，33. 3(邸2,16-C)，37. 2 (CH，17-C)，12. 9 (邸3， 18-C)，16. 7(細3, 19-C)，122. 0(C，20-C)，139. 6(CH，21-C)，110. 7(CH，22-C)，142. 2(CH， 23-C)，24. 6 (邸3, 28-C)，24. I (邸3, 29-C)，123. 0 (邸2, 30-C)，51. 4 (邸3,7-OCH3)，169.6(C， l-0Ac)，19.8(CH3，1-0Ac)，174. 5(C，ll-0Ac)，21.2(CH3，11-0Ac)，175. 5(C，r -C)，33. 7(CH， 2' -〇，18.0畑3,3' -C)，18. 1畑3,4' -C);碳原子标记参见图1。红外光谱表明该化合物 含有径基（3441cm1)和幾基（1735cm1)基团。"CNMR谱和DEPT谱显示有35碳信号，其中 包括九个的甲基，四个亚甲基（一个締控碳），十一个次甲基个締控碳，四个含氧碳）， W及十一个季碳（二个締控碳，五个幾基碳，一个含氧碳）。此外，该化合物含有一个P单 取代巧喃环[5C122.O(C-20)，139.6(C-21)，110. 7 (C-22)和 142. 2 (C-23)]，根据HMBC谱 中H-17(S