一种新的柠檬苦素类化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体设及从干燥的积实中分离得到的一种巧樣苦素类 化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 积实为临床常用中药，为芸香科植物酸澄CitrusaurantiumL.及其栽培变种或 甜澄CitrussinensisOsbeck的干燥幼果。5~6月收集自落的果实，除去杂质，自中部横 切为两半，晒干或低溫干燥，较小者直接晒干或低溫干燥。积实的产地主要有四川、江西、湖 南、福建等地，W江西产酸澄为道地药材，且W江西产碟眼积实质量最好。积实具有破气消 积，化疲散瘡等功效。临床用于积滞内停，瘡满胀痛，泻频后重，大便不通，疲滞气阻，胸搏， 结胸，脏器下垂，《中医方大辞典》收录的方剂中超过7%的方剂中含有积实，足见积实药材 在临床应用之广。
[0003] 积实的主要有效成分为挥发油类、生物碱类及其黄酬类成分。其中，挥发油类主要 成分为右旋巧樣締、构祿酸等；生物碱类成分主要为辛弗林、N-甲基酪胺；黄酬类成分主要 为抽皮巧、新澄皮武及澄皮武。基原不同的积实其辛弗林、抽皮巧和澄皮巧的含量差异很 大。酸澄果实未成熟时含新澄皮武，在果实成熟时新澄皮武消失。甜澄果实不含新澄皮巧。 不同生长期采摘的积实药材、不同粒径大小的积实药材其有效成分的含量也不同。积实挥 发油中的成分除与品种有关外，还与产地有关。辛弗林的含量随着采摘期的延长，辛弗林的 含量降低明显，但其含量差异与品种、产地没有明显的相关性。随着积实粒径的增加，积实 中抽皮巧的含量呈上升趋势。湘积实中总生物碱和挥发油的含量最高，但与議积实、绿衣积 实无明显差异，甜澄积实含量最低。其中，辛弗林的含量W碟眼积实最高，澄皮巧的含量W 绿衣积实最高，抽皮巧的含量W抽含量最高。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种从干燥的积实中分离得到的一种巧樣苦素类化合物，含 其的药物组合物及其制备方法和应用。 阳〇化]本发明的上述目的是通过下面的技术方案得W实现的：
[0006] 具有下述结构式的化合物（I):
[0007]
阳00引所述的化合物（I)的制备方法，包含W下操作步骤：(a)将干燥的积实粉碎，用 70~80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水饱和 的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；化）步骤（a)中 乙酸乙醋萃取物用大孔树脂除杂，先用5%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗脱8个柱 体积，收集70 %洗脱液，减压浓缩得70 %乙醇洗脱浓缩物；(C)步骤化）中70 %乙醇洗脱浓 缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱 得到4个组分；（d)步骤（C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1、5:1和 2:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2用十八烷基硅烷键合 的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗 脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)。
[0009] 进一步地，步骤（a)中，用75%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0010] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0011] 一种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的 载体。
[0012] 所述的化合物（I)在制备神经保护的药物中的应用。
[0013] 所述的药物组合物在制备神经保护的药物中的应用。
[0014] 本发明化合物用作药物时，可W直接使用，或者W药物组合物的形式使用。
[0015] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0016] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 W及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物W单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0017]图1为化合物（I)结构式； 阳〇1引图2为化合物（I)计算ECD和实验ECD图；
[0019] 图3为化合物（I)对培养不同时间海马神经元细胞活力的影响；
[0020] 图4为化合物（I)对Αβ25-35诱导海马神经元细胞活力的影响；
[0021] 图5为化合物（I)对Aβ25-35诱导的海马神经细胞调亡的影响。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可W对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0023] 主要材料、试剂来源及仪器类型：
[0024] 乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲烧为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限 公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。 阳0巧]经鉴定积实为芸香科植物酸澄CitrusaurantiumL.的干燥幼果。
[0026] 实施例1 :化合物（I)分离制备及结构确证
[0027] (a)将干燥的积实（8kg)粉碎，用75%乙醇热回流提取（3化X3次），合并提取液， 浓缩至无醇味化L)，依次用石油酸（化X3次）、乙酸乙醋化LX3次）和水饱和的正下醇 (化X3次）萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（375g)和正下醇萃取物；化）步 骤（a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8大孔树脂除杂，先用5 %乙醇洗脱6个柱体积，再用70% 乙醇洗脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物（129g) ;(c)步骤 (b)中70%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1 (8个柱体积）、30:1 (8 个柱体积）、15:1 (8个柱体积）和5:1 (10个柱体积）的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到4个 组分；（d)步骤（C)中组分4(27g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1(8个柱体 积）、5:1 (10个柱体积）和2:1 (8个柱体积）的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e) 步骤（d)中组分2(15g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲 醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I) (138mg)。
[0028] 结构确证：HR-ESIMS显示[M+Na]+为m/z 607. 2208,结合核磁特征可得分子式 为C3化6〇11，不饱和度为14。核磁共振氨谱数据(卵m，DMS0-d6,400MHz) :H-3(5.07,S)， H-5 (3. 15, dd，J = 7. 6, 5. 4)，H-6 (2. 37, dd，J = 16. 5, 5. 4)，H-6 (2. 27, dd，J = 16. 5， 7. 6)，16, m)，H-12(1.91，d，J = 15. 5)，H-12(2. 33, d，J = 15. 5)，H-14(1.59， dd，J = 12. 5,6. 8)，H-15(2. 71，dd，J = 18. 6,6. 8)，H-15(3. 54, dd，J = 18. 6，12. W， H-17(4. 92, s)，H-18(1.01，s)，H-19(0. 91，s)，H-21(7. 24, s)，H-22化.12，m)，H-23(7. 32， t，J= 1.7)，H-28(0. 85, s)，H-29(0. 81，s)，H-30(3. 36, s)，H-2,巧.92, dq，J= 15. 5， 1.7)，H-3,（7. 13，dq，J= 15. 5,7. 0)，H-4,（1.93，dd，J = 7. 0，1.7)，7-0邸3(3. 65，s);核 磁共振碳谱数据δ。(卵m，DMS0-de，100MHz) :208. 1(C，1-C)，77. 5(C，2-C)，83. 8(CH，3-C)， 38. 6 (C，4-C)，42. 3 (CH，5-C)，31. 1 (邸2, 6-C)，173.ο(C，7-C)，61. 2 (C，8-C)，61. 7 (C，9-C)， 49. 8 (C，10-C)，55. 9