一种柠檬苦素类化合物、制备方法和神经保护作用
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物领域，具体涉及从芸香的干燥全草中分离得到的一种新的柠檬苦 素类化合物及其制备方法和医药用途。
【背景技术】
[0002] 芸香RutagarveolensL.，别称七里香、香草、芸香草、小香茅草、野芸香草、石灰草、 臭草，系芸香科多年生草本植物，全草供药用，在全球许多地区为药用目的广泛栽培，全年 可采，洗净阴干或鲜用。辛、微苦，凉。清热解毒，散瘀止痛。用于感冒发热，牙痛，月经不调， 小儿湿疹;外用治疮疖肿毒，跌打损伤。
[0003] 现代研究表明，该植物含有吖啶酮生物碱、香豆素、黄酮、柠檬苦素和木脂素等化 合物。已知的天然吖啶酮生物碱仅来源于芸香科植物。
[0004] -些国家的传统医学将芸香用作通经和堕胎药，也用于治疗心血管疾病引起的心 悸等症。现代研究表明芸香具有抗菌、解痉、兴奋子宫等各种不同的药理活性。生物碱和呋 喃香豆素具有可逆的解痉、抗炎和抗组胺活性。呋喃香豆素类还具有光敏、光毒和致突变作 用，可引起皮肤不良反应。另外，芸香香豆素具有抗生育和抗植入作用。芸香苷具有解痉作 用，它可以降低毛细血管通透性和脆性。芸香提取物具有延缓细胞有丝分裂的作用，这种抗 有丝分裂的特性，与其所含的花椒毒素有关。此外，芸香还具有抗炎、抗真菌、抗动脉硬化等 作用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种从芸香的干燥全草中分离得到的一种新的柠檬苦素 类化合物；
[0006] 本发明的另一目的在于提供该新化合物的制备方法；
[0007] 本发明的再一目的在于提供该化合物用于制备神经保护药物的医药用途。
[0008] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0009] 具有下述结构式的化合物(I)，
[0011] 所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将芸香的干燥全草粉碎，用 70~80 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和 的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中乙 酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱10个柱体积，再用75%乙醇洗脱12个柱 体积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤(b)中75%乙醇洗脱 浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80 :1、40:1、20:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1、20:1 和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合 的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集9~13个柱体积洗脱 液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。
[0012] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0013] 进一步地，所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为75%。
[0014] -种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的载 体。
[0015] 所述的化合物(I)在制备神经保护的药物中的应用。
[0016] 所述的药物组合物在制备神经保护的药物中的应用。
[0017] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0018] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对 人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0019] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0020] 图1为化合物(I)结构式；
[0021] 图2为化合物（I)理论E⑶值与实验E⑶值比较。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0023]实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0024] 药材和试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海 凌峰化学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0025]制备方法：（a)将芸香的干燥全草(8kg)粉碎，用75 %乙醇热回流提取(25L X 3次）， 合并提取液，浓缩至无醇味(6L)，依次用石油醚(6L X 3次）、乙酸乙酯(6L X 3次)和水饱和的 正丁醇(6LX 3次)萃取，浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(315g)和正丁醇萃 取物；（b)步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用纯净水溶解至2L，医用脱脂棉过滤，滤液用AB-8型大 孔树脂（1.5kg)分离，依次用10%乙醇（IOL)和75% (12L)乙醇洗脱，收集75%乙醇洗脱液， 减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏（155g); (c)步骤(b)中75%乙醇洗脱浸膏用200-300目正 相硅胶分离，依次用体积比为80:1 (10个柱体积）、40:1 (8个柱体积）、20:1 (8个柱体积）、10: 1(8个柱体积)和1:1(5个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组 分3(36g)用200-300目正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1 (8个柱体积）、20:1 (8个 柱体积)和10:1(5个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2 (12g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶0DS-C18分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液 等度洗脱，收集9~13个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)(25mg)。
[0026] 结构确证：白色无定形粉末;HR-ESMS显示[M+Na]+为m/z 477.1920,结合核磁特 征可得分子式为〇26113()〇7，不饱和度为12。核磁共振氢谱数据51^。111，〇]\^〇-(16,50〇]\0^):!1-1 (6.66，d，J=12.5)，H-2(5.77，d，J=12.5)，H-5(2.21，dd，J=13.2,4.0)，H-6(1.76，dd，J = 16.0,4.0)，H-6(1.56，ddd，J=16.0，13.2,4.0)，H-7(4.53，m)，H-9(2.52，d，J = 4.0)，H-ll (3.17，q，J = 4.0)，H-12(3.06，t，J = 6.5)，H-15(4.28，s)，H-17(3.16，s)，H-18(0.91，s)，H-19(1.21，s)，H-21(7.21，s)，H-22(6.31，s)，H-23(7.36，s)，H-28(1.14，s)，H-29(1.27，s)， H-30( 1.40, s)，15-OH(6.18，br，s);核磁共振碳谱数据 Sc(ppm，DMS〇-d6,125MHz ):155.6(CH， 卜C)，117.7(CH，2-C)，165.4(C，3-C)，83.5(C，4-C)，51.7(CH，5-C)，26.8(CH2,6-C)，81.1 (CH，7-C)，43.6(C，8-C)，47.5(CH，9-C)，43.9(C，10-C)，53.8(CH，11-C)，59.6(CH，12-C)， 48.2(C，13-C)，96.3(C，14-C)，91.2(CH，15-C)，209.7(C，16-C)，41.6(CH，17-C)，13.5(CH 3， 18-C)，17.6(CH3，19-C)，125.8(C，20-C)，139.4(CH，2hC)，112.3(CH，22-C)，141.5(CH，23-〇,29.7(〇1 3,28-〇,23.2(〇13,29-〇，17.7(〇13,30-〇;碳原子标记参见图1。红外波谱表明 该化合物含有羟基(3461 cnf1)，羰基（1726CHT1)和烯烃（1684cnf1)等基团；且在232nm处有紫 外吸收，表明含有α，β-不饱和酯羰基部分。 1H NMR谱显示五个甲基信号[SH0.91(s，Me-18)， 1.14(s，Me-28)，1.21(s，Me-19)，1.27(s，Me-29)，1.4O(s，Me-3O)]，0-型单取代呋喃环[δ 册.31(8，!1-22)，7.21(8，!1-21)，7.36(8，!1-23)]，四个含氧次甲基质子信号[6!13.06(^ = 6.5他，!1-12)，3.17(9，了 = 4.0抱，!1-11)，4.28(8，!1-15)，4.53(111，!1-7)]，以及〇,3-不饱和酯 羰基结构[3册.66((1，1 = 12.5抱，!1-1)和5.77((1，1 = 12.5抱，!1-2)]。13〇匪1?谱显示有26个碳 信号，包括五甲基，一个亚甲基，十二个次甲基（四个含氧次甲基和五个烯属次甲基），以及 八个季碳(两个羰基碳，两个含氧季碳和一个烯烃季碳）。以上功能片段再结合不饱和数表 明该化合物为五环结构，类型为柠檬苦素类化合物。HMBC谱中H-I与C-3，C-5和C-IO，Η-2与 C-3，偕甲基Me-28和Me-29与C-4，以及Me-19与C-I的相关性表明A环为α，β-不饱和七元内酯 环。此外，两个含氧碳信号[SC53.8 (CH，11-C)和59.6 (CH，12-C)]和两个氢质子信号[δΗ3.17 (9，了 = 4.0他，!1-11)和3.06(^ = 6.5他，!1-12)]的相关性表明(：环存在一个11，12-环氧基 团。HMBC谱中，质子信号SH6.18(br，s)与含氧次甲基碳SC91.2(C-15)的相关性表明C-15位 连有一个羟基。通过HMBC谱中Me-18(SH0.91，s)和Me-30(SH1.40，s)的相关性可知(Μ4(δ C96.3)为含氧季碳。HMBC谱中Η-7 (δΗ4.5