一种新的柠檬苦素类化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体设及从干燥的积壳中分离得到的一种巧樣苦素类 化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 积壳为芸香科植物酸澄（CitrusaurantiumL.)及其栽培变种的干燥未成熟果 实。7月果皮尚绿时采收，自中部横切为两半，晒干或低溫干燥。味苦、辛、酸。性微寒。归 脾、胃经。具有理气宽中，行滞消胀之功效。用于胸胁气滞，胀满疼痛，食积不化，疲饮内停， 脏器下垂。积壳是中药典型的理气药之一，广泛应用于中医临床。
[0003] 积壳所含化学成分较为复杂，目前已知的有效成分主要有黄酬类、挥发油类、生物 碱类、香豆素类和一些微量元素等。积壳中黄酬类成分主要有：澄皮巧、新澄皮巧、抽皮巧、 抽皮芸香巧、异抽皮巧、陈皮素、抽皮素、川陈皮素、红橘素、5-0-去甲基川陈皮素、去甲川陈 皮素、澄黄酬、4'，5, 7, 8-四甲氧基黄酬、4-0-甲基黄琴素、3-径基-3'，4'，5, 6, 7, 8-六甲氧 基黄酬和5, 6-二径基-7, 4'-二甲氧基黄酬等。挥发油主要有巧樣締、芳精醇、2-十一烧酬、 丫-松油締。积壳中所含的生物碱类活性成分主要有辛弗林、N-甲基酪胺、酪胺、大麦芽碱 等。积壳中所含的香豆素类成分主要有葡萄内醋、伞形花内醋、异前胡素、马明丙酬化合物、 泼朗弗林、异米拉素、花椒毒酪、5-异戊締氧基线巧喃香豆素、5-甲氧基线巧喃香豆素等。
[0004]积壳中的澄皮巧具有抗炎、抗氧化、抗癌和保肝等作用；抽皮巧具有抗炎镇痛、降 血糖等作用；川陈皮素具有抗炎，抗病毒，抗氧化等药理作用；川陈皮素具有很好的抗肿瘤 的作用；抽皮素具有抗抑郁、保肝、抗氧化、改善大鼠学习记忆障碍、抗血小板聚集的作用。 积壳挥发油的主要成分是巧樣締。在临床上，巧樣締胶囊已上市，主要用于胆囊炎、胆管炎、 胆结石和胆道术后综合征等的治疗。在积壳挥发油中，另一重要成分为芳精醇，具有防腐、 抗菌、抗病毒和镇静等作用。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种从干燥的积壳中分离得到的一种巧樣苦素类化合物，含 其的药物组合物及其制备方法和应用。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得W实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物（I):
[0008]
[0009] 所述的化合物（I)的制备方法，包含W下操作步骤：(a)将干燥的积壳粉碎，用 70~80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水饱和 的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；化）步骤（a)中 乙酸乙醋萃取物用大孔树脂除杂，先用10 %乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗脱8个 柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤化）中70%乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为85:1、50:1、25:1、10:1和1:1的二氯甲烧-甲 醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为 15:1、10:1和5:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2用十八 烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~ 12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)。
[0010]进一步地，步骤（a)中，用75%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0011] 进一步地，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
[0012]一种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的 载体。
[0013] 所述的化合物（I)在制备治疗肝癌的药物中的应用。
[0014]所述的药物组合物在制备治疗肝癌的药物中的应用。
[0015]本发明化合物用作药物时，可W直接使用，或者W药物组合物的形式使用。
[0016]该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017]所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料W及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物W单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[001引图1为化合物（I)结构式；
[0019] 图2为化合物（I)计算ECD和实验ECD图；
[0020] 图3为化合物（I)对胎pG2及L02细胞增殖的影响（η= 3)。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可W对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0022] 主要材料、试剂来源及仪器类型：
[0023] 乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲烧为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限 公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0024] 实施例1 :化合物（I)分离制备及结构确证
[002引 （a)干燥的积壳（10kg)粉碎，用75%乙醇热回流提取（3化Χ3次），合并提取液， 浓缩至无醇味化L)，依次用石油酸（化X3次）、乙酸乙醋化LX3次）和水饱和的正下醇 (化X3次）萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（381g)和正下醇萃取物；化）步 骤（a)中乙酸乙醋萃取物用D101大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱体积，再用70% 乙醇洗脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物（131g) ;(c)步骤 (b)中70%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为85:1 (8个柱体积）、50:1 (8 个柱体积）、25:1 (8个柱体积）、10:1 (10个柱体积）和1:1 (8个柱体积）的二氯甲烧-甲 醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（C)中组分4 (27g)用正相硅胶进一步分离，依次用体 积比为15:1 (8个柱体积）、10:1 (8个柱体积）和5:U6个柱体积）的二氯甲烧-甲醇梯度 洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2 (18g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用 体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓 缩得到纯的化合物（I) (230mg)。
[0026]结构确证：白色无定形粉末，HR-ESIMS显示[M+Na]+为m/z601. 2612,结合核磁特 征可得分子式为〔3。成2〇…不饱和度为10。核磁共振氨谱数据5H(ppm，DMS0-de，500MHz): H-l(4. 91，d，J= 7. 5)，H-2(2. 85,dd，J= 16. 0,7. 5)，H-2(3. 46,d，J= 16. 0)，H-5(2. 15， d，J= 13. 0)，H-6(1. 71，m)，H-6(l. 89，m)，H-7(4. 33，d，J= 2. 0)，H-9(2. 65，d，J= 4. 0)， 46,d，J= 4.0)，H-12 (3.64,dd，J= 6. 0,4.0)，H-15 (3.22,m)，H-16 (1.69,m)， H-16 (1. 91，m)，H-17 (2. 52,dd，J= 11. 0,6. 0)，H-18 〇). 81，s)，H-19 (1. 41，s)，H-21 (7. 29， s)，H-22化.43,d，J= 1. 0)，H-23 (7. 36,t，J=1. 5)，H-28 (1. 14,s)，H-29 (1. 36,s)， H-30(1.08，s)，l-0Ac(1.81，s)，7-0Ac(2. 01，s);核磁共振碳谱数据 5c(卵m，DMSO-dg， 125MHz) :71. 5 (CH，1-C)，34. 2 (細2, 2-C)，169. 3 (C，3-C)，84. 6 (C，4-C)，44. 1 (CH，5-C)， 25. 9 (細2, 6-C)，73. 7 (CH，7-C)，44. 1 (C，8-C)，39. 9 (CH，9-C)，34. 7 (C，10-C)，75. 6 (CH， 11-C)，81. 2(CH，12-C)，45. 2(C，13-C)，84. 2(C，14-C)，71. 7(CH，15-C)，41. 1(邸2，16-〇， 39. 0 (CH，17-C)，13. 3 (細3,18-C)，16. 3 (細3, 19-C)，123. 8 (C，20-C)，140. 2 (CH，21-C)， 112. 9 (CH，22-C)，141. 1 (CH，23-C)，33. 8 (邸3, 28-C)，22. 4 (邸3, 29-C)，20. 6 (細3, 30-C)， 169. 1 (C，1-OAc)，20. 3 (邸3,1-OAc)，169. 3 (C，7-OAc)，20. 7 (邸3, 7-OAc);碳原子标记参见图 1。红外波谱表明该化合物含有径基（3447cm1)和幾基（1727cm1)基团。古NMR谱显示屯 个甲基信号（δΗ2. 01,1. 81,1. 41,1. 36,1. 14,1.08,0. 81，各抓，S)，β-单取代的巧喃环 (δΗ7. 29,S;6. 43,d，J= 1.0Hz和 7. 36,t，J= 1. 5Ηζ)，W及两个乙酷氧基[δΗ1. 81 (3Η， s)，2. 01(3H，s)]。"CNMR、DEPT和服QC谱中显示有30个碳信号，包括屯个甲基，Ξ个亚甲 基，十一个次甲基（五个含氧次甲基和Ξ个締属次甲基），W及九个季碳（Ξ个幾基碳，两个 含氧季碳和一个締控季碳）。上述数据表示，该化合物为巧樣苦素类化合物，再结合不饱和 数可知该化合物为五环结构。HMBC谱中，H-1 (δH4. 91，山J= 7.甜Z)与C-2 (δC34. 2)和两 个幾基碳[δC169. 1 (OAc)和169. 3(C-3)]的相关性表明，C-1位连有一个乙酷氧基。R犯SY 谱中，H-1与Me-19的交叉峰表明C-1位的乙酷氧基为α构型。HMBC谱中H-1与C-3，C-5 和C-10, 与C-3,Me-28和Me-29与C-4,Me-19与C-1的相关性表明A环为屯元内醋 环。HMBC谱中，H-7(δH4. 33,山J= 2.OHz)与相应幾基碳（δC169. 3)的交叉峰表明C-7 位也连有一个乙酷氧基。R犯SY谱中，Η-7与Me-30的相关性表明7-OAc为α构型。此外， 四个含氧碳信号δC75. 6 (CH，11-C)，81. 2 (CH，12-C)，84. 2 (CH，14-C)和 71. 7 (CH，15-C)表 明它们各连有一个径基。HMBC谱中，&-16与C-15的相关性表明D环为五元环。通过HMBC 谱中Η-17与C-20,C-21和C-22,W及&