(CH，11-C)，27. 0 (邸2,12-C)，33. 6 (C，13-C)，37. 9 (CH，14-C)，28. 2 (邸2， 15-C)，168. 7 (C，16-C)，82. 2 (CH，17-C)，22. 6 (邸3,18-C)，17. 1 (邸3,19-C)，120. 2 (C，20-C)， 140. 3 (CH，21-C)，108. 9 (CH，22-C)，143. 1 (CH，23-C)，23. 2 (邸3, 28-C)，20. 1 (邸3, 29-C)， 64. 2(CH，30-C)，164. 5(C，Γ-C)，121. 3(CH，2, -C)，148. 0(CH，3, -C)，17. 7(邸3,4, -C)， 52. 1(CH3,7-0CH3);碳原子标记参见图1。红外光谱显示该化合物含有径基和幾基基团 (3446cm1和1736cm1)。"CNMR和DEPT谱共显示31个碳信号，包括六个甲基（一个甲氧 基），Ξ个亚甲基，十一个次甲基（五个締控碳，Ξ个含氧碳），W及十一个季碳（四个幾基 碳，一个締控碳，Ξ个含氧碳）。电和"CNMR数据分析表明该化合物含有一个典型的β取 代巧喃环（δΗ7. 24,S;6. 12,m和 7. 32,t，J= 1. 7Ηζ;δC120. 2,140. 3,108. 9 和 143. 1)， 一个酬幾基（δC208. 1)和Ξ个醋幾基（δC173. 0,168. 7和164. 5)结构。上述核磁数据 表明该化合物为巧樣苦素类化合物。HMBC谱中，&-19(5册.91，S)和Η-30(δ册.36,S) 与C-1 (δC208. 1)的相关性表明C-1为酬幾基。两组含氧碳信号（δC77. 5, 2-C和64. 2， 30-C;SC61.7,9-C和 55. 9,11-0W及相应质子信号（δ册.36，s，H-30 ;δ册.16，m，H-ll) 表明该化合物含有一个30, 2-环氧基团和9, 11-环氧基团。此外，C-3(SC83.8)位上连有 一个 2-下締酸乙醋。HMBC谱中，Η-3(δ册.07,S)，H-2'（δ册.92,dq，J= 15. 5，1.7Hz) 和H-3'（δΗ7. 13,dq，J= 15. 5,7.OHz)与C-Γ(5C164. 5)的相关性验证了上述推论。 H-2'和H-3'之间的禪合常数（J= 15.甜Z)表明2-下締酸乙醋片段为E构型。HMBC谱 中，-0邸3(8 册.65,S)与C-7(5C173. 0)，Η-6(δ肥.37,dd，J= 16. 5,5. 4Hz;2. 27,dd，J =16. 5, 7.細z)与C-5 (δC42. 3)和C-7的相关性表明C-6 (δC31. 1)连有一个甲氧幾基片 段。根据HMBC谱中Η-17与C-20,C-21和C-22的相关性，可推断巧喃环位于C-17位上。 R犯SY谱中，H-5与H3-29，H-5与H-17,W及H-12 0与H-17表明运些质子为0-构型；H-14 与&-18的交叉峰表明Me-18和H-14是α-构型。综合氨谱、碳谱、HMBC谱和R犯SY谱，W 及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如图1所示，立体构型进一步通过ECD 试验确定，理论值与实验值基本一致（图2)。
[0029] 实施例2 :化合物（I)药理作用试验
[0030] -、材料和仪器
[0031] 健康雌性SD大鼠由上海第二军医大学实验动物中屯、提供。化合物（I)制备方法 见实施例LHPLC归一化纯度大于98%。二甲基亚讽、银杏提取物巧抓761，阳性药）、MTT、 Aβ25-35、k多聚赖氨酸均购于美国SIGMA公司。DMEM高糖培养基、Neurobasal、B27购于 美国GIBC0公司。NSE购于英国ABC0M公司。Tunel购于武汉Boster公司。LDH试剂盒购 于南京建成生化试剂公司。 阳0扣]电子天平，北京赛多利斯。1815TCC〇2恒溫解育箱（美国化el-L油公司），TH-2C恒溫震荡器（江苏太仓实验设备厂），解剖显微镜（日本OLYMPUS公司），台式离屯、机（德 国Heraeus公司），酶标仪（日本DynaTtech公司），J2-服全自动高速冷冻离屯、机（美国 Beckman公司）。 阳〇3引二、试验方法
[0034] 1、海马神经细胞的原代培养
[0035] 1. 1海马组织取材的具体过程
[0036] (1)将16-18d孕龄的健康雌性SD大鼠常规麻醉并消毒，解剖后取出胎鼠，放入 D-Hank'S平衡盐溶液中。
[0037] (2)将其放置于解剖显微镜下缓慢剥离胎鼠的头部皮肤与烦骨，然后看到暴露的 大脑双侧半球。
[0038] (3)于大脑半球外侧面小屯、分离脑膜和大脑皮层，即可见海马组织。
[0039] (4)用解剖綴小屯、夹取海马组织，将其放于D-Hank'S平衡盐溶液中反复漂洗Ξ 遍，彻底去除脑膜和表面血管。
[0040] (5)分离血丝和脑膜，即得海马组织，用于海马神经细胞的原代培养。
[0041] 1. 2海马神经细胞原代培养的具体过程
[0042] (1)将所取得的海马组织用眼科剪充分剪碎。
[0043] 似用浓度为0. 125%的膜酶消化25min，然后用含15%胎牛血清的DMEM高糖培 养基完全培养液终止消化。
[0044] (3)于离屯、机中W8〇0巧m的速度离屯、lOmin。
[0045] (4)弃去上清并加入培养基（NeurobasalMedium/B27)后，用尖端已被火焰抛光 的弯头吸管缓慢的吹打，反复吹打直至吹打均匀后，静置5min，所得的上液即为所需的海马 神经细胞悬液。
[0046] (5)用计数板计数，按所需细胞密度分别植入预先包被k多聚赖氨酸的96孔板或 6孔培养板中。其中96孔培养板中每孔约100μL，6孔培养板中每孔约1. 5mL。
[0047] (6)放入37°C的％解育箱中，培养3d后用于实验。 W48] 2、化合物（I)最佳效应时间和最佳作用浓度的筛选
[0049] 设计如下屯组分组洒10μg/血组；②20μg/血组；③40μg/血组；④60μg/mL 组；⑥80μg/血组；⑧100μg/血组；⑦0μg/血组（即空白对照组）。将化合物（I)各 剂量组分别作用2地，4化和72h，分别每孔加入二甲基亚讽100μ以充分溶解后，在波长为 570nm的全自动酶标仪下观察并测定其光密度值（0D值），取光密度最高处的药物浓度及对 应的作用时间作为本实验筛选的化合物（I)的最佳作用条件。采用MTT比色法进行最佳 作用条件的筛选。
[0050] 3、化合物（I)对Αβ25-35诱导损伤情况下海马神经元的影响
[0051] 采用已配制好在37°C下聚合7d的Αβ25-35建立海马神经细胞损伤的模型。实 验分组如下：A:空白对照组Control组，Β:Αβ组，C:化合物（I)+Αβ组，D:化合物 (I)+I(inhibitor)+A0组（在化合物（I)+Αβ组基础上加入抓NF的括抗剂K252a)， E:EGB+A0组，F:化合物（I)组，G:EGB组；海马神经细胞原代培养3d后，在培养液中加 入25μg/mL的Aβ25-35,4h后再按照分组分别给药。
[0052] 3. 1化合物（I)对Αβ25-35诱导海马神经元细胞毒性的影响 阳05引 3. 1. 1ΜΤΤ比色法检测海马神经细胞活力的步骤
[0054] (1)将海马神经细胞原代培养3d后，分别加入化合物（I) :40μg/mL，Ε抓761 : 150μg/mL及空白对照组什么都不加。4化后进行MTT比色法。 阳〇5引 似分别在96孔板中每孔加入配制好的MTT10μL。
[0056] (3)将其置于37°C的C〇2培养箱中解育地。
[0057] (4)缓慢吸去上清后每孔加入100 μ L的二甲基亚讽作用lOmin，使之充分溶解。
[0058] (5)在波长为570nm的全自动酶标仪下测定每孔的光密度值。
[0059] 3. 2化合物（I)对Aβ25-35诱导的海马神经细胞调亡的影响
[0060] 3. 2. 1实验分组
[0061] 通过检测海马神经细胞调亡过程中的关键蛋白酶化spase-3的活性，观察化合物 (I)对Αβ25-35诱导海马神经细胞调亡的影响。实验共分为屯个组：A:Control组，B: Αβ组，C:化合物（I)+Αβ组，D:化合物（I)+Ι+Αβ组，E:EGB+A0组，F:化合物（I) 组，G:EGB组。
[0062] 3. 2. 2实验步骤 阳06引 （1)按