加。对三酶包埋膜中固定化脂肪酶的活性进行测量。结果发现，固定化酶的酶活为0.94U。与单独包埋相比，酶活保持率在85%以上。
[0049]以4-硝基苯基-β -D-吡喃葡萄糖苷(p-NPG)为底物对β -葡萄糖苷酶酶活进行测试，取面积为2X2cm2的酶膜置于5mL酶活测定底物溶液中(50mM醋酸钠缓冲液(pH=4.8)，4mM p-NPG)，于40°C下震荡反应30分钟，反应结束后立即加入终止试剂(1mL IMNa2CO3)，使用紫外可见分光光度计测量溶液在405nm下的吸光度，I个单位β -葡萄糖苷酶酶活定义为:在上述条件下每分钟催化形成I ymol对硝基苯酸的酶量。经此种方法测定，酶膜的酶活为4.8U/mgo与单独包埋相比，酶活保持率在90%以上。
[0050]实施例3:
[0051]将300 μ L，2mmol/mL的异丙基硫杂蒽酮丙酮溶液均勾地涂覆在4X4cm2的棉布上，然后将涂覆有溶液的棉布置于两片石英片之间，随后将此体系置于高压汞灯(光强为lmff/cm2)下在室温下照射10分钟。紫外辐照完毕后，使用丙酮对棉布抽提24小时，室温下晾干。
[0052]将一定量的葡萄糖氧化酶溶解于0.1M的Tris-HCl (pH = 7.0)缓冲液中，震荡溶解，形成10mg/mL的葡萄糖氧化酶溶液，将此溶液与亚甲基双丙烯酰胺按照2:l(v/v)进行混合后，取500 μ L涂敷在接枝有异丙基硫杂蒽酮的棉布一侧，然后将涂覆有溶液的棉布置于两片石英片之间，随后将此体系置于氙灯(光强为2mW/cm2)下照射60分钟。可见光辐照完毕后，将棉布浸泡在0.1M的Tris-HCl (pH = 7.0)缓冲液中浸泡24小时，之后用大量缓冲液对棉布进行冲洗以去除未固定的葡萄糖氧化酶。
[0053]将一定量的辣根过氧化物酶溶解于0.1M的Tris-HCl (pH = 7.0)缓冲液中，震荡溶解，形成12.0mg/mL的辣根过氧化物酶溶液，将此溶液与亚甲基双丙烯酰胺按照2:1 (v/v)进行混合后，取500 μ L涂敷在包埋有葡萄糖氧化酶的网布层的棉布上，然后将涂覆有溶液的棉布置于两片石英片之间，随后将此体系置于氙灯(光强为2mW/cm2)下照射60分钟。可见光辐照完毕后，将棉布浸泡在0.1M的Tris-HCl (pH = 7.0)缓冲液中浸泡24小时，之后用大量缓冲液对棉布进行冲洗以去除未固定的辣根过氧化物酶。
[0054]葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化产生的过氧化氢能使靛蓝胭脂红发生褪色反应，使用紫外可见分光光度计测量溶液在615nm下的吸光度，据此测定出产生的过氧化氢的量，进而计算出葡萄糖氧化酶活力。葡萄糖氧化酶活力定义为:37°C条件下，Imin内催化葡萄糖反应产生I μ g过氧化氢所需的葡萄糖氧化酶量为1U。经此种方法测定，双酶包埋膜中葡萄糖氧化酶的酶活为945U/mg。与单独包埋相比，酶活保持率在92%以上。
[0055]使用连苯三酚测定辣根过氧化物酶酶活，以过氧化氢为底物，在辣根过氧化酶作用下，连苯三酚可形成红掊酚，使用紫外可见分光光度计测量溶液在430nm下的吸光度，据此测定出产生的红掊酚的量。辣根过氧化物酶酶活力定义为:在标准测定条件下，每分钟使Λ A430nm增加0.001的酶量为一个酶活单位。经此种方法测定，双酶包埋膜中葡萄糖氧化酶的酶活为330U/mg。与单独包埋相比，酶活保持率在90%以上。
[0056]实施例4:
[0057]将lmL，2mmol/mL的异丙基硫杂蒽酮丙酮溶液均勾地涂覆在4X 4cm2聚乙稀无纺布的一侧，然后将涂覆有溶液的无纺布置于两片石英片之间，随后将此体系置于高压汞灯(光强为7mW/cm2)下在室温下照射3分钟。紫外辐照完毕后，使用丙酮对无纺布抽提48小时，室温下晾干。
[0058]将一定量的木瓜蛋白酶溶解于0.2M的Tris-HCl (pH = 8.0)缓冲液中，震荡溶解，形成15mg/mL的木瓜蛋白酶溶液，将此溶液与聚乙二醇二丙烯酸酯按照1:2 (v/v)进行混合后，取ImL涂敷在接枝有异丙基硫杂蒽酮的无纺布一侧，然后将涂覆有溶液的无纺布置于两片石英片之间，随后将此体系置于氙灯(光强为0.9mW/cm2)下照射60分钟。可见光辐照完毕后，将膜浸泡在0.2M的Tris-HCl (pH = 8.0)缓冲液中浸泡24小时，之后用大量缓冲液对膜进行冲洗以去除未固定的木瓜蛋白酶。
[0059]将一定量的脂肪酶溶解于0.2M的Tris-HCl (pH = 8.0)缓冲液中，震荡溶解，形成15mg/mL的脂肪酶溶液，将一定量的β _葡萄糖苷酶溶解于0.2Μ的Tris-HCl (pH = 6.0)缓冲液中，震荡溶解，形成15mg/mL的β -葡萄糖苷酶溶液，将两种酶溶液与亚甲基双丙烯酰胺按照1:1:1 (v/v)混合后，取ImL涂敷在包埋有木瓜蛋白酶网布层的无纺布上，然后将涂覆有溶液的无纺布置于两片石英片之间，随后将此体系置于LED灯(光强为0.3mff/cm2)下照射120分钟。可见光辐照完毕后，将固定有三种酶的无纺布浸泡在0.2M的Tris-HCl (pH=7.0)缓冲液中浸泡24小时，之后用大量缓冲液对膜进行冲洗以去除未固定的酶。
[0060]酶活测定方法同实施例2。经测定，三酶包埋膜中木瓜蛋白酶的酶活为2007Units/mg，脂肪酶的酶活为0.94U，β -葡萄糖苷酶的酶活为3.5U/mg。
[0061]实施例5:
[0062]将1.5mL, 3mmol/mL的异丙基硫杂蒽酮丙酮溶液均勾地涂覆在4X4cm2棉布的一侦牝然后将涂覆有溶液的棉布置于两片石英片之间，随后将此体系置于高压汞灯(光强为4mff/cm2)下在室温下照射5分钟。紫外辐照完毕后，使用丙酮对棉布抽提48小时，室温下晾干。
[0063]将一定量的胰蛋白酶溶解于0.4M的Tris-HCl (pH = 7.0)缓冲液中，震荡溶解，形成10mg/mL的胰蛋白酶溶液，将此溶液与聚乙二醇双甲基丙烯酸酯按照1:1 (v/v)进行混合后，取1.5mL涂敷在接枝有异丙基硫杂蒽酮的棉布一侧，然后将涂覆有溶液的棉布置于两片石英片之间，随后将此体系置于LED灯(光强为0.3mW/cm2)下照射90分钟。可见光辐照完毕后，将棉布浸泡在0.4M的Tris-HCl (pH = 7.0)缓冲液中浸泡24小时，之后用大量缓冲液对棉布进行冲洗以去除未固定的胰蛋白酶。
[0064]将一定量的葡萄糖氧化酶溶解于0.4M的Tris-HCl (pH = 7.0)缓冲液中，震荡溶解，形成lOmg/mL的葡萄糖氧化酶溶液，将一定量的辣根过氧化物酶溶解于0.4M的Tris-HCl (pH = 7.0)缓冲液中，震荡溶解，形成10mg/mL的辣根过氧化物酶溶液，将两种酶溶液与聚乙二醇二丙烯酸酯按照2:2:3 (v/v)混合后，取ImL涂敷在包埋有胰蛋白酶网布层的棉布上，然后将涂覆有溶液的棉布置于两片石英片之间，随后将此体系置于氙灯(光强为2.5mff/cm2)下照射60分钟。可见光福照完毕后，将固定有三种酶的棉布浸泡在0.4M的Tris-HCl (pH = 7.0)缓冲液中浸泡48小时，之后用大量缓冲液对棉布进行冲洗以去除未固定的酶。
[0065]胰蛋白酶酶活测定方法同实施例1，葡萄糖氧化酶与辣根过氧化物酶的酶活测定方法同实施例3。经测定，三酶包埋膜中胰蛋白酶的酶活为6824Units/mg，葡萄糖氧化酶的酶活为947Units/mg，辣根过氧化物酶的酶活为483Units/mg。
[0066]实施例6:
[0067]将200 μ L，4mmol/mL的异丙基硫杂蒽酮丙酮溶液均勾地涂覆在3 X 3cm2双向拉伸聚丙烯膜的两侧，然后将涂覆有溶液的双向拉伸聚丙烯膜置于两片石英片之间，随后将此体系置于高压汞灯(光强为4mW/cm2)下在室温下照射5分钟。紫外辐照完毕后，使用丙酮对双向拉伸聚丙烯膜抽提48小时，室温下晾干。
[0068]首先将11.5mg/mL的胰蛋白酶溶液与聚乙二醇二丙稀酸酯按照75:45 (v/v)进行混合后，取60 μ L涂敷在接枝有异丙基硫杂蒽酮的双向拉伸聚丙稀膜一侧，将3.5mg/mL的谷氨酰胺转移酶溶液与聚乙二醇二丙烯酸酯按照75:45 (v/v)进行混合后，取60 μ L涂敷在膜的另一侧，然后将涂覆有溶液的膜置于两片石英片之间，随后将此体系置于氙灯(波长420nm，3mff/cm2)