浓缩液，真空喷雾干燥，即得到木馨叶蛋白多肤。
[0041] 连施例2:
[0042] 一种微波辅助制备木馨叶蛋白多肤的方法，包括如下步骤：
[0043] (1)取新鲜木馨叶，经清洗，凉干后，切碎成碎片；
[0044] (2)取鲜木馨叶碎片按固液比1:2加入稀碱液，并添加稳定剂，调抑值为8. 5,将 料液置于胶体磨中磨浆，粗过滤，弃去滤渣，至微波提取装置加热至55°C，在此溫度下保持 比，得到鲜木馨叶提取粗滤液；所述的稀碱液为化0H溶液，其加入量可使料液的抑值调至 9. 0弱碱性；所述的稳定剂为亚硫酸氨钢，其加入量占木馨叶质量的0. 2% ;所述的微波提 取装置的频率为2450M监，功率为20KW;
[0045] (3)酶解1 :将上述的鲜木馨叶提取粗滤液降至室溫，调其抑值为8. 5,按底物质 量的3 %加入膜蛋白酶，充分揽拌，启动微波提取装置加热20min，PH值保持在7. 5W上， 得到第一次酶解液；酶解溫度为55°C;酶解抑值为7. 5 ;所述的微波提取装置的频率为 2450M监，功率为20KW;
[0046] (4)酶解2 :待第一次酶解液降至常溫，再调整其抑值至7.6,按底物质量2%加 入中性酶，充分揽拌，再次启动微波提取装置加热lOmin，当抑值降至7. 2时，酶解完成；酶 解溫度为55°C;酶解抑值> 7. 5 ;所述的中性酶为木瓜酶；所述的微波提取装置的频率为 2450M监，功率为20KW;
[0047] 妨待酶解完成后，再次启动微波提取装置加溫至90。维持lOmin，灭酶活即完 成；所述的微波提取装置的频率为2450MHZ，功率为20KW; W48] (6)在灭酶活的鲜木馨叶蛋白酶解液中按底物3%加入活性炭，揽拌均匀，在70°C 保持比，然后使用Ξ足离屯、机滤去沉渣，滤液再经过陶瓷微滤膜过滤、超滤、钢滤、R0纤维 膜过滤、浓缩，将滤过浓缩液合併得到木馨叶蛋白多肤浓缩液；所述的Ξ足离屯、机的滤布为 200目W上；所述陶瓷微滤膜为能截留15000-20000分子量的陶瓷膜；所述超滤、钢滤、R0 纤维膜为分别能截留1〇〇〇〇、2000、1000、200W上分子量的纤维膜； W例 （7)将所得木馨叶蛋白多肤浓缩液，真空喷雾干燥，即得到木馨叶蛋白多肤。 阳化0]连施例3:
[0051] 一种微波辅助制备木馨叶蛋白多肤的方法，包括如下步骤：
[0052] (1)取新鲜木馨叶，经清洗，凉干后，切碎成碎片；
[0053] (2)取鲜木馨叶碎片按固液比1:2加入稀碱液，并添加稳定剂，调抑值为8. 5,将 料液置于胶体磨中磨浆，粗过滤，弃去滤渣，至微波提取装置加热至55°C，在此溫度下保持 比，得到鲜木馨叶提取粗滤液；所述的稀碱液为化0H溶液，其加入量可使料液的抑值调至 8.8弱碱性；所述的稳定剂为亚硫酸氨钢，其加入量占木馨叶质量的0. 15%;所述的微波提 取装置的频率为2450M监，功率为20KW;
[0054] (3)酶解1 :将上述的鲜木馨叶提取粗滤液降至室溫，调其抑值为8. 5,按底物质 量的3 %加入膜蛋白酶，充分揽拌，启动微波提取装置加热20min，PH值保持在7. 5W上， 得到第一次酶解液；酶解溫度为55°C;酶解抑值为7.8;所述的微波提取装置的频率为 2450M监，功率为20KW; 阳化5] (4)酶解2 :待第一次酶解液降至常溫，再调整其抑值至7.6,按底物质量2%加 入中性酶，充分揽拌，再次启动微波提取装置加热lOmin，当抑值降至7. 2时，酶解完成；酶 解溫度为55°C;酶解抑值> 7. 5 ;所述的中性酶为木瓜酶；所述的微波提取装置的频率为 2450M监，功率为20KW;
[0056] 妨待酶解完成后，再次启动微波提取装置加溫至90。维持lOmin，灭酶活即完 成；所述的微波提取装置的频率为2450MHZ，功率为20KW;
[0057] (6)在灭酶活的鲜木馨叶蛋白酶解液中按底物3%加入活性炭，揽拌均匀，在70°C 保持比，然后使用Ξ足离屯、机滤去沉渣，滤液再经过陶瓷微滤膜过滤、超滤、钢滤、R0纤维 膜过滤、浓缩，将滤过浓缩液合併得到木馨叶蛋白多肤浓缩液；所述的Ξ足离屯、机的滤布为 200目W上；所述陶瓷微滤膜为能截留15000-20000分子量的陶瓷膜；所述超滤、钢滤、R0 纤维膜为分别能截留1〇〇〇〇、2000、1000、200W上分子量的纤维膜；
[005引（7)将所得木馨叶蛋白多肤浓缩液，真空喷雾干燥，即得到木馨叶蛋白多肤。
[0059]连施例4 :传统叶蛋白的提取方法
[0060] 取0. 3g左右的植物叶片，用液氮研磨，色素多的可按材料鲜重的10%加入PVP， 并将充分研磨过的样品转入离屯、管中，加入4mL的提取缓冲液，摇匀并放在4Γ条件下提取 比，充分溶解蛋白。放置后的样品充分摇匀，4°C100(K)r/min离屯、30min，弃沉淀，上清液 中加入2.5-3倍体积的村-20°(：条件下过夜，让蛋白充分沉淀。之后，4°(：1000化/111^离屯、 30min，其上清，沉淀置于-20°C下，使丙酬完全挥发，如有必要加入上样缓冲液溶解沉淀。缓 冲液用量300ul，沉淀充分溶解后，转移至1. 5血离屯、管中，4°C120(K)r/min离屯、15min，取 上清液即为所提取的叶蛋白溶液。
[0061] 表1本发明提取方法的有益效果
[0062]
[0063]
[0064] 从表1可知，上述传统方法不可避免使用较大量酸碱及溶剂，而且工序复杂，耗时 长，提取率低，杂质多等弱点和不足；而本发明采用微波辅助提取，不需溶剂，酸碱用量少， 酶解时间短，转化率高，且为下一步制备多肤创造更好条件。
[0065] 前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。运些描述 并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可W进行很多改变 和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应 用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案W及 各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。
【主权项】
1. 一种微波辅助制备木薯叶蛋白多肽的方法，其特征在于，包括如下步骤： (1) 取新鲜木薯叶，经清洗，凉干后，切碎成碎片； (2) 取鲜木薯叶碎片按固液比1:2加入稀碱液，并添加稳定剂，调pH值为8. 5,将料液 置于胶体磨中磨浆，粗过滤，弃去滤渣，至微波提取装置加热至55°C，在此温度下保持lh， 得到鲜木薯叶提取粗滤液； (3) 酶解1 :将上述的鲜木薯叶提取粗滤液降至室温，调其pH值为8. 5,按底物质量的 3%加入胰蛋白酶，充分搅拌，启动微波提取装置加热20min，PH值保持在7. 5以上，得到第 一次酶解液； (4) 酶解2 :待第一次酶解液降至常温，再调整其pH值至7. 6,按底物质量2%加入中性 酶，充分搅拌，再次启动微波提取装置加热lOmin，当pH值降至7. 2时，酶解完成； (5) 待酶解完成后，再次启动微波提取装置加温至90°C，维持lOmin，灭酶活即完成； (6) 在灭酶活的鲜木薯叶蛋白酶解液中按底物3%加入活性炭，搅拌均匀，在70°C保持 lh，然后使用三足离心机滤去沉渣，滤液再经过陶瓷微滤膜过滤、超滤、钠滤、RO纤维膜过 滤、浓缩，将滤过浓缩液合併得到木薯叶蛋白多肽浓缩液； (7) 将所得木薯叶蛋白多肽浓缩液，真空喷雾干燥，即得到木薯叶蛋白多肽。2. 根据权利要求1所述的微波辅助制备木薯叶蛋白多肽的方法，其特征在于，步骤（2) 中所述的稀碱液为NaOH溶液，其加入量可使料液的pH值调至8. 5-9. 0弱碱性；所述的稳定 剂为亚硫酸氢钠，其加入量占木薯叶质量的0. 1-0. 2%。3. 根据权利要求1所述的微波辅助制备木薯叶蛋白多肽的方法，其特征在于，步骤（3) 和步骤（4)中的酶解温度为55°C。4. 根据权利要求1所述的微波辅助制备木薯叶蛋白多肽的方法，其特征在于，步骤（3) 中碱性酶解pH值为8. 0-7. 5。5. 根据权利要求1所述的微波辅助制备木薯叶蛋白多肽的方法，其特征在于，步骤（4) 中中性酶解pH值多7. 5。6. 根据权利要求1所述的微波辅助制备木薯叶蛋白多肽的方法，其特征在于，步骤（4) 中所述的中性酶为木瓜酶。7. 根据权利要求1所述的微波辅助制备木薯叶蛋白多肽的方法，其特征在于，步骤 (2)、（3)、（4)和（5)中所述的微波提取装置的频率为2450MHZ，功率为20KW。8. 根据权利要求1所述的微波辅助制备木薯叶蛋白多肽的方法，其特征在于，步骤（6) 中所述的三足离心机的滤布为200目以上。9. 根据权利要求1所述的微波辅助制备木薯叶蛋白多肽的方法，其特征在于，步骤（6) 中所述陶瓷微滤膜为能截留15000-20000分子量的陶瓷膜；所述超滤、钠滤、R0纤维膜为分 别能截留10000、2000、1000、200以上分子量的纤维膜。
【专利摘要】本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种微波辅助制备木薯叶蛋白多肽的方法。一种微波辅助制备木薯叶蛋白多肽的方法，包括以下步骤：清洗、晾干、切碎、加稀碱液、胶磨、微波处理1、粗过滤、酶解1、微波处理2、酶解2、微波处理3、灭酶活、脱色、微滤、超滤、浓缩和喷雾干燥。本发明提取的木薯叶蛋白多肽的方法具有收率高、纯度高、溶剂消耗少、成本低和易于工业化生产的优点。本发明整个工艺流程短、时间短，能耗低、污染少、不使用有毒试剂、无污染物排放，达到清洁生产目标。
【IPC分类】C12P21/06
【公开号】CN105368906
【申请号】CN201510906319
【发明人】梁满水, 余冰妮, 梁尚文, 曾志亮
【申请人】南宁知本康业生物技术有限公司, 梁满水
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2015年12月9日