032] 向上述酶解后原料中每次加入80kg乙酸乙酯回流提取3h，共提取2次，过滤，滤液 浓缩至l〇kg，放置24h以上，离心，沉淀先用石油醚洗剂，再用质量浓度为0. 5%盐酸洗涤， 收集沉淀；
[0033] 加入4. 58Kg乙醇回流溶解，再加入15. 3g活性炭保温脱色2h，过滤，静置冷却析 晶，得到249. 2g对香豆酸，含量为98. 4%。
[0034] 【实施例2】
[0035] 取竹茹原料10Kg，分别加入30Kg水、18. 2g木质过氧化物酶和21. 8g木葡聚糖酶， 拌匀后升温至50°C酶解2h，过滤得酶解原料。
[0036] 向上述酶解后原料中加入60Kg乙酸甲酯回流提取2次，每次3h，过滤，滤液浓缩 至7Kg，放置24h以上，离心，沉淀先用石油醚洗剂，再用质量浓度为0. 1 %硫酸洗涤，收集沉 淀；
[0037] 加入4. 87Kg乙醇溶液回流溶解，再加入26g活性炭保温脱色2h，过滤，静置冷却析 晶，得到253. 7g对香豆酸，含量为97. 8%。
[0038] 【实施例3】
[0039] 取竹茹原料10Kg，分别加入30Kg水、22. 7g木质过氧化物酶和27. 3g木葡聚糖酶， 拌匀后升温至50°C酶解2h，过滤得酶解原料。
[0040] 向上述酶解后原料中加入70Kg正丁醇回流提取3h，共提取2次，过滤，滤液浓缩 至8Kg，放置24h以上，离心，沉淀先用石油醚洗剂，再用质量浓度为1 %柠檬酸洗涤，收集沉 淀；
[0041] 加入4. 81Kg乙醇回流溶解，再加入19. 3g活性炭保温脱色2h，过滤，静置冷却析 晶，得到251. 3g对香豆酸，含量为98. 3%
[0042] 【实施例4】
[0043] 取竹茹原料10Kg，分别加入30Kg水、27. 3g木质过氧化物酶和32. 7g木葡聚糖酶， 拌匀后升温至50°C酶解2h，过滤得酶解原料。
[0044] 向上述酶解后原料中加入60Kg乙酸甲酯回流提取2次，每次3h，过滤，滤液浓缩 至6Kg，放置24h以上，离心，沉淀先用石油醚洗剂，再用质量浓度为0. 6%盐酸洗涤，收集沉 淀；
[0045] 加入4. 92Kg乙醇溶液回流溶解，再加入32. 8g活性炭保温脱色2h，过滤，静置冷却 析晶，得到254. Ig对香豆酸，含量为98. 1 %。
[0046] 【实施例5】
[0047] 取竹茹原料10Kg，分别加入30Kg水、31. 8g木质过氧化物酶和38. 2g木葡聚糖酶， 拌匀后升温至50°C酶解2h，过滤得酶解原料。
[0048] 向上述酶解后原料中加入SOKg正丁醇回流提取2次，每次3h，过滤，滤液浓缩至 9Kg，放置24h以上，离心，沉淀先用石油醚洗剂，再用质量浓度为0. 8%柠檬酸洗涤，收集沉 淀；
[0049] 加入4. 75Kg乙醇溶液回流溶解，再加入38g活性炭保温脱色2h，过滤，静置冷却析 晶，得到250.1 g对香豆酸，含量为98. 7%。
[0050] 【实施例6】
[0051] 取竹節原料l〇Kg，分别加入30Kg水、36. 4g木质过氧化物酶和43. 6g木葡聚糖酶， 拌匀后升温至50°C酶解2h，过滤得酶解原料。
[0052] 向上述酶解后原料中每次加入50kg乙酸乙酯回流提取3h，共提取2次，，过滤，滤 液浓缩至5Kg，放置24h以上，离心，沉淀先用石油醚洗剂，再用质量浓度为0. 3%硫酸洗涤， 收集沉淀；
[0053] 加入5. 02Kg乙醇回流溶解，再加入50. 3g活性炭保温脱色2h，过滤，静置冷却析 晶，得到253. 7g对香豆酸，含量为98. 3%。
【主权项】
1. 一种分离纯化竹茹中对香豆酸的方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤1 :向原料竹茹中加入水和复合生物酶，得酶解后原料；所述复合生物酶为木质过 氧化物酶和木葡聚糖酶的混合酶； 步骤2 :将酶解后原料晾干或烘干，加入有机物回流提取，合并提取液并浓缩，放置，过 滤，收集沉淀；所述有机物为乙酸乙酯、乙酸甲酯和正丁醇中的任意一种或多种的混合； 步骤3 :步骤2所得的沉淀先用石油醚洗涤，再用酸性溶液洗涤；所述酸性溶液为盐酸、 硫酸或柠檬酸的水溶液； 步骤4 :向步骤4洗涤后的沉淀中加入乙醇回流溶解，然后加入活性炭吸附除杂，过滤， 放置冷却析晶，干燥即得对香豆酸。2. 根据权利要求1所述的分离纯化竹茹中对香豆酸的方法，其特征在于，所述步骤1具 体是：向原料竹茹中加入原料质量3倍量的水和原料质量0. 3% -0. 8%的复合生物酶，得酶 解后原料；所述复合生物酶为木质过氧化物酶和木葡聚糖酶的混合酶；所述木质过氧化物 酶和木葡聚糖酶的质量比为1 :1. 2。3. 根据权利要求2所述的分离纯化竹茹中对香豆酸的方法，其特征在于：所述步骤1 是在50°C保温酶解2h。4. 根据权利要求1所述的分离纯化竹茹中对香豆酸的方法，其特征在于，所述步骤2具 体是：将酶解后原料晾干或烘干，加入原料质量5-8倍量的有机物回流提取，合并提取液并 浓缩至原料质量0. 5-1倍量的浸膏，放置，过滤，收集沉淀；所述有机物为乙酸乙酯、乙酸甲 酯和正丁醇中的任意一种或多种的混合。5. 根据权利要求1所述的分离纯化竹茹中对香豆酸的方法，其特征在于，所述步骤3具 体是：步骤2所得的沉淀先用等倍量石油醚洗涤，再用质量浓度为0. 1 % -1 %酸性溶液洗 涤；所述酸性溶液为盐酸、硫酸或柠檬酸的水溶液。6. 根据权利要求1所述的分离纯化竹茹中对香豆酸的方法，其特征在于，所述步骤4 具体是：向步骤4洗涤后的沉淀中加入沉淀质量15倍量乙醇回流溶解，然后加入沉淀质量 5%-15%的活性炭吸附除杂，过滤，放置冷却析晶，干燥即得对香豆酸。
【专利摘要】本发明提供一种分离纯化竹茹中对香豆酸的方法，采用酶解-提取-洗涤-重结晶等步骤对竹茹中的对香豆酸进行分离纯化；主要采用生物酶解的方法使对香豆酸完全的游离出来，操作条件缓和，且酶的专一性可以避免一些其他成分的分解，或遇酸碱而溶出，降低了后续处理的难度。该方法采用四步即可将竹茹中的对香豆酸进行分离纯化，首先酶解为后续的分离纯化做了很好的铺垫，再通过小极性有机溶剂提取明显减少了杂质的含量，从而避免了【背景技术】中各种柱层析的使用，缩短了工艺流程，适用于工业化生产。
【IPC分类】C07C51/42, C12P7/42, C07C57/42
【公开号】CN105384626
【申请号】CN201510873726
【发明人】张瑜, 王晓莹, 肖红, 金富林
【申请人】陕西嘉禾生物科技股份有限公司
【公开日】2016年3月9日
【申请日】2015年12月2日