一种复合微生物菌剂及其制备方法与应用_2

文档序号:9642199阅读:来源:国知局
种微量元素,能够作为生产复合微生物水溶性肥的原料,对能源的循环利用具有 重要意义。
[0032] 本发明的有益效果在于:
[0033] 本发明提供了一种复合微生物菌剂,将不同功能的微生物进行复合,并对其组合 进行配伍优化,混合得到的复合菌用于中草药废液的处理,具有以下优点:(1)针对中草药 废液中的成分,采用了合理的菌种组成,大部分有害物质都有对应的菌株对其进行降解,有 效提高了菌剂的专一性;(2)本发明的复合菌剂通过产生多种酶,能够有效的分解中草药 废液中的COD、BOD等物质;(3)复合微生物菌剂分泌产生的物质能够有效抑制病原微生物 的生长,减少臭味的产生;(4)经处理的中草药废液中含有多种活性成分,能够促进作物生 长,防治植物病虫害;(5)本发明中的一些微生物对重金属有很强的钝化作用,减少重金属 对环境的污染。本发明专门用于中草药废液的处理,使用简单、成本低廉、效果持久。
【具体实施方式】
[0034] 下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实 施例的给出仅是为了起到说明的目的,并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技 术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下,可以对本发明进行各种修改和替换。
[0035] 本发明所用试剂和原料均为市售可得。
[0036] 实施例1
[0037] 实施例1用于说明本发明所述的复合微生物菌剂。
[0038] 所述复合微生物菌剂包括:
[0039] 枯草芽抱杆菌 VTS-2 (Bacillus subtilis),活菌数为 I X 108_6 X 108cfu/mL ;
[0040] 巨大芽孢杆菌为VTS-I (Bacillus megatherium),其活菌数为 I. 5X 107-5X 107cfu/mL ;
[0041 ]毕赤酵母 VTJ-6 (Pichia pastoris),活菌数为 2X 108-4X 108cfu/mL ;
[0042] 犁头霉 VTJ-3 (Absidia),活菌数为 I X 106-4X 106cfu/mL。
[0043] 实施例2
[0044] 实施例2用于说明本发明所述复合微生物菌剂的制备方法。
[0045] 包括如下步骤:
[0046] 1)固体斜面培养将枯草芽孢杆菌VTS-2 (Bacillus subtilis)、巨大芽孢 杆菌VTS-I (Bacillus megatherium)接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基中,毕赤酵母 VTJ-6(Pichia pastoris)、毛霉(犁头霉VTJ-3(Absidia))接种于PDA固体培养基中,于 28°C恒温培养1天,使菌株活化;
[0047] 其中,牛肉膏蛋白胨固体培养基配方为牛肉膏5g,蛋白胨10g,氯化钠5g,水 lOOOmL,琼脂20g ;PDA固体培养基配方为土豆200g,葡萄糖20g,水lOOOmL,琼脂20g。
[0048] 2) -级种子培养:将步骤1)中活化的枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌菌株接种于牛 肉膏蛋白胨培养基中,活化的毕赤酵母、毛霉接种于PDA培养基中,于28°C,160rpm下培养 1天,当液体培养菌密度〇D_值达到0. 6时停止培养,即得一级种子;
[0049] 其中,牛肉膏蛋白胨培养基配方为牛肉膏5g,蛋白胨10g,氯化钠5g,H2O 1000 mL ; PDA培养基配方为土豆200g,葡萄糖20g,H201000mL。
[0050] 3)二级种子培养:将所得枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌一级种子液分别接种于牛 肉膏蛋白胨培养基中,毕赤酵母、毛霉接种于PDA培养基中培养,于28°C,160rpm下培养1 天,即得二级种子液;所述牛肉膏蛋白胨培养基和PDA培养基同步骤2)。
[0051] 4)将步骤3)中获得的枯草芽孢杆菌种子液以5%的接种量接种于发酵培养基中, 于28°C,llOrpm,通气量1.0 vvm下进行高密度发酵培养,进行高密度发酵培养,获得菌剂 A ;发酵培养基配方按质量百分比为:糖蜜4%、玉米粉0. 35%、硫酸铵0. 5%,磷酸二氢钾 0· 05 %,硫酸镁0· 05 %,余量为水,pH为7. 0。
[0052] 5)将步骤3)中获得的巨大芽孢杆菌种子液以5%的接种量接种于发酵培养基中, 于28°C,160rpm,通气量1.0 vvm下进行高密度发酵培养,进行高密度发酵培养,获得菌剂B。 发酵培养基同步骤4)。
[0053] 6)步骤3)中获得的毕赤酵母的种子液以以5%的接种量接种于发酵培养基中,于 28°C,llOrpm,通气量0. 8vvm下进行高密度发酵培养,获得菌剂C。发酵培养基同步骤4)。
[0054] 7)骤3)中获得的毛霉的种子液以5%的接种量接种于发酵培养基中,于28°C, llOrpm,通气量0. 8vvm下进行高密度发酵培养,获得菌剂D。发酵培养基同步骤4)。
[0055] 8)将步骤4)、5)、6)及步骤7)中获得的菌剂A、菌剂B、菌剂C和菌剂D以体积比 1:1:1:1混合,即得复合微生物菌剂。
[0056] 实施例3
[0057] 实施例3用于说明本发明所述复合微生物菌剂的另一可选的制备方法。
[0058] 包括如下步骤:
[0059] 1)固体斜面培养将枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基 中,毕赤酵母、毛霉接种于PDA固体培养基中,于29°C恒温培养2天,使菌株活化;
[0060] 其中,牛肉膏蛋白胨固体培养基配方为牛肉膏5g,蛋白胨10g,氯化钠5g,水 lOOOmL,琼脂20g ;PDA固体培养基配方为土豆200g,葡萄糖20g,水lOOOmL,琼脂20g。
[0061] 2) -级种子培养:将步骤1)中活化的枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌菌株接种于牛 肉膏蛋白胨培养基中,活化的毕赤酵母、毛霉接种于PDA培养基中,于29°C,170rpm下培养 3天,当液体培养菌密度0D_值达到0. 8时停止培养,即得一级种子;
[0062] 其中,牛肉膏蛋白胨培养基配方为牛肉膏5g,蛋白胨10g,氯化钠5g,H2O 1000 mL ; PDA培养基配方为土豆200g,葡萄糖20g,H201000mL。
[0063] 3)二级种子培养:将所得枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌一级种子液分别接种于牛 肉膏蛋白胨培养基中,毕赤酵母、毛霉接种于PDA培养基中培养,于29°C,170rpm下培养3 天,即得二级种子液;所述牛肉膏蛋白胨培养基和PDA培养基同步骤2)。
[0064] 4)将步骤3)中获得的枯草芽孢杆菌种子液以15%的接种量接种于发酵培养基 中,于29°C,130rpm,通气量I. 3vvm下进行高密度发酵培养,进行高密度发酵培养,获得菌 剂A ;发酵培养基配方按质量百分比为:糖蜜6%、玉米粉0. 45%、硫酸铵0. 6%,磷酸二氢 钾0. 10 %,硫酸镁0. 10%,余量为水,pH为7. 1。
[0065] 5)将步骤3)中获得的巨大芽孢杆菌种子液以15%的接种量接种于发酵培养基 中,于29°C,180rpm,通气量I. 3vvm下进行高密度发酵培养,进行高密度发酵培养,获得菌 剂B。发酵培养基同步骤4)。
[0066] 6)步骤3)中获得的毕赤酵母的种子液以以15%的接种量接种于发酵培养基中, 于29°C,130rpm,通气量0. 9vvm下进行高密度发酵培养,获得菌剂C。发酵培养基同步骤 4)〇
[0067] 7)骤3)中获得的毛霉的种子液以10%的接种量接种于发酵培养基中,于29°C, 130rpm,通气量0. 9vvm下进行高密度发酵培养,获得菌剂D。发酵培养基同步骤4)。
[0068] 8)将步骤4)、5)、6)及步骤7)中获得的菌剂A、菌剂B、菌剂C和菌剂D以体积比 1:2:1:3混合,即得复合微生物菌剂。
[0069] 实施例4
[0070] 实施例4用于说明本发明所述复合微生物菌剂的另一可选的制备方法。
[0071] 包括如下步骤:
[0072] 1)固体斜面培养将枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基 中,毕赤酵母、毛霉接种于PDA固体培养基中,于30°C恒温培养3天,使菌株活化;
[0073] 其中,牛肉膏蛋白胨固体培养基配方为牛肉膏5g,蛋白胨10g,氯化钠5g,水 lOOOmL,琼脂20g ;PDA固体培养基配方为土豆200g,葡萄糖20g,水lOOOmL,琼脂20g。
[0074] 2) -级种子培养:将步骤1)中活化的枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌菌株接种于牛 肉膏蛋白胨培养基中,活化的毕赤酵母、毛霉接种于PDA培养基中,于30°C,180rpm下培养 2天,当液体培养菌密度0D_值达到0. 7时停止培养,即得一级种子;
[0075] 其中,牛肉膏蛋白胨培养基配方为牛肉膏
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