0] 称取100毫克聚乙烯亚胺-γ-环糊精溶解于50毫升水中，200毫克金刚烷-二硫键-聚乙二醇溶解于100毫升水中，40毫克金刚烷-聚乙二醇-RGD溶解于40毫升水中，将三者混 合，常温搅拌8小时。反应完毕后，溶液在分子量14000的透析袋中透析8小时，然后冰冻干 燥，得到白色粉末状物质，即聚乙烯亚胺-γ-环糊精/(金刚烷-二硫键-聚乙二醇/金刚烷-聚乙二醇-RGD)。
[0131] 由上述实施例可看出具有氧化还原敏感性、靶向肝癌的特异性、稿基因转染效率 的多功能性，能够特异性地与肝癌细胞结合，增加了多功能超分子系统的肝癌靶向性，可用 于肝脏恶性肿瘤的靶向治疗，具有突出显著的技术效果。
【主权项】
1. 一种基于聚乙烯亚胺-环糊精的多功能超分子基因运载系统，其特征是主要由主体 聚乙烯亚胺-环糊精以及分别装载在主体聚乙烯亚胺-环糊精上的客体金刚烷-二硫键-聚 乙二醇和客体金刚烷-聚乙二醇-靶向肽而形成的复合物。2. 根据权利要求1所述的一种基于聚乙烯亚胺-环糊精的多功能超分子基因运载系统， 其特征是该复合物的具体结构式如下：其中，m、n2、n3分别代表主体聚乙烯亚胺-环糊精单元个数、与客体金刚烷-二硫键-聚 乙二醇自组装的聚乙烯亚胺-环糊精单元个数、与客体金刚烷-聚乙二醇-靶向肽自组装的 聚乙烯亚胺-环糊精单元个数，别代表金刚烷-二硫键-聚乙二醇中聚乙二醇单元个 数和金刚烷-聚乙二醇-靶向肽中聚乙二醇单元个数， Xl、yi分别代表主体聚乙烯亚胺-环糊 精中伯氨基单元数量和仲氨基单元数量，x2、y 2分别代表客体金刚烷-二硫键-聚乙二醇中聚 乙稀亚胺的伯氨基单元数量和仲氨基单元数量，X3、y3分别代表客体金刚烧-聚乙二醇-革巴向 肽中聚乙稀亚胺的伯氨基单元数量和仲氨基单元数量;111、112、113、1111、1112、11、12、13、71、72、73均 为大于〇的整数。3. 根据权利要求1所述的一种基于聚乙烯亚胺-环糊精的多功能超分子基因运载系统， 其特征是:所述的主体聚乙烯亚胺-环糊精是由环糊精与聚乙烯亚胺反应得到，所述的客体 金刚烷-二硫键-聚乙二醇是由金刚烷通过二硫键与聚乙二醇结合制备得到。4. 根据权利要求1所述的一种基于聚乙烯亚胺-环糊精的多功能超分子基因运载系 统，其特征是:所述的金刚烷-聚乙二醇-靶向肽是由金刚烷甲酸和聚乙二醇反应后再结合 靶向肽制备得到。5. -种基于聚乙烯亚胺-环糊精的多功能超分子基因运载系统的制备方法，其特征是： 由环糊精与聚乙烯亚胺反应得到聚乙烯亚胺-环糊精，由金刚烷通过二硫键与聚乙二醇结 合制备得到金刚烷-二硫键-聚乙二醇，由金刚烷甲酸和聚乙二醇反应后再结合靶向肽形成 金刚烷-聚乙二醇-靶向肽，再将三者按照1:0.5-2:0.5-2的摩尔比例混合，经自组装反应得 到多功能超分子运载系统;其具体反应式如下： A、金刚烷-二硫键-聚乙二醇的合成 - B、金剛炕-衆乙二酲-靶冋肌的贫成0、叫 c、聚乙烯亚胺-环糊精的合成D、多功能超分子运载系统的自组装其中，反应式中，结构1是聚乙二醇，结构2是金刚烷甲酸，结构3是金刚烷-二硫键-聚乙 二醇，结构4是金刚烷胺，结构5是金刚烷-聚乙二醇-靶向肽，结构6是环糊精，结构7是聚乙 烯亚胺-环糊精，结构8是目标产物多功能超分子基因运载系统，CDI是连接剂N，N'_二羰基 咪唑的简称，SPDP是3- (2-吡啶二巯基）丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯的简称，SP94是靶向肽的 简称。6.根据权利要求5所述的一种基于聚乙烯亚胺-环糊精的多功能超分子基因运载系统 的制备方法，其特征是:所述金刚烷-二硫键-聚乙二醇的合成采用以下具体方式： 1.1) 将聚乙二醇溶解于足量的二甲基亚砜中，将加入至用足量二甲亚砜溶解、含有相 对于聚乙二醇的0.5-1倍量的用于活化羟基的连接剂溶液中，在氮气保护下避光搅拌反应 2-4小时； 1.2) 将得到的反应液加入至足量的乙醚和四氢呋喃混合溶液中，其中乙醚和四氢呋喃 体积比为2-10:1，冰浴静置1-4小时，过滤后再次溶解于足量的二甲基亚砜中； 1.3) 称取相对于聚乙二醇1-2倍量的胱胺二盐酸盐溶解于足量的二甲基亚砜中，并加 入相对于聚乙二醇1-2倍量的催化剂，搅拌1-4小时； 1.4) 将上述步骤1.2)中所述过滤后的二甲亚砜溶液缓慢滴加至胱胺二盐酸盐溶液中， 滴加2-5h，滴加后继续反应3-8h，反应完毕后溶液在透析袋中透析24小时，然后冰冻干燥， 得到白色粉末状物质； 1.5) 将相对于聚乙二醇0.05-0.1倍量的金刚烷甲酸和相对于聚乙二醇0.05-0.1倍量 的用于活化羟基的连接剂，溶解于足量的二氯甲烷中，常温反应l_3h，向其中加入聚乙二醇 0.225-0.5倍量上述步骤1.4)得到的白色粉末状物质，继续搅拌反应l-3h，将反应液加入至 足量的乙醚和四氢呋喃混合溶液中，其中乙醚和四氢呋喃体积比为2-10:1，冰浴静置0.5-2 小时，过滤得到金刚烷-二硫键-聚乙二醇。7. 根据权利要求5所述的一种基于聚乙烯亚胺-环糊精的多功能超分子基因运载系统 的制备方法，其特征是:所述的金刚烷-聚乙二醇-靶向肽的合成采用以下具体方法： 2.1) 将聚乙二醇琥珀酰亚胺单酯溶解于足量的二氯甲烷中，将其缓慢滴加至用足量二 氯甲烷溶解、含有相对于聚乙二醇琥珀酰亚胺单酯的0.1-0.3倍量的金刚烷胺溶液中，常温 搅拌滴加1-3小时，继续搅拌反应0.5-2小时； 2.2) 将上述步骤2.1)中得到的反应液加入至足量的乙醚和四氢呋喃混合溶液中，其中 乙醚和四氢呋喃体积比为2-10:1，冰浴静置0.5-2小时，过滤后混合到用足量二氯甲烷溶 解、含有相对于聚乙二醇琥珀酰亚胺单酯1-2倍量的连接剂溶液中，常温搅拌反应l_3h; 2.3) 将上述步骤2.2)中得到的反应液加入至足量的乙醚和四氢呋喃混合溶液中，其中 乙醚和四氢呋喃体积比为2-10:1，冰浴静置0.5-2小时，过滤并再次溶解于足量二甲基亚砜 中，将其滴加至用足量二甲亚砜溶解、含有相对于聚乙二醇琥珀酰亚胺单酯0.1-0.2倍量的 3，3 ' -二氨基二丙胺的溶液中，常温滴加0.5-2h，继续搅拌反应0.5-2h; 2.4) 反应完毕后的溶液在透析袋中透析6-24小时，然后冰冻干燥，获得白色粉末状物 质； 2.5) 将上述步骤2.4)中的白色粉末状物质再次溶解于足量的pH7.4的PBS溶液中，再加 入到用足量无水乙醇溶解的、相对于步骤2.4)中白色粉末状物质0.05-0.1倍量的连接剂溶 液中，常温搅拌0.5-2h，加入相对于步骤2.4)中白色粉末状物质0.2-0.4倍量的靶向肽加入 反应液，常温反应l_4h，反应完毕后透析袋中透析6-12小时，然后冰冻干燥，得到金刚烷-聚 乙二醇-靶向肽。8. 根据权利要求5所述的一种基于聚乙烯亚胺-环糊精的多功能超分子基因运载系统 的制备方法，其特征是:所述的聚乙烯亚胺-环糊精的合成采用以下具体方法： 3.1) 将环糊精溶解于足量二甲基亚砜中配置环糊精溶液，再配置用足量二甲亚砜溶 解、相对于环糊精〇. 2-0.5倍量的连接剂溶液，在氮气保护下于暗处将连接剂溶液加入环糊 精溶液中，再加入相对于环糊精1-1.5倍量的催化剂； 3.2) 将相对于环糊精1-2倍量的聚乙烯亚胺溶解于足量的二甲基亚砜中，在氮气保护 下于暗处，将聚乙烯亚胺溶液滴加在步骤3.1)所述的环糊精溶液中，滴加4-6小时，滴加完 毕后在常温下继续反应6-12小时，反应完毕后的溶液在透析袋中透析12-24小时，然后冰冻 干燥，得到聚乙烯亚胺-环糊精。9. 根据权利要求5所述的一种基于聚乙烯亚胺-环糊精的多功能超分子基因运载系统 的制备方法，其特征是:所述的多功能超分子运载系统的自组装是将聚乙烯亚胺-环糊精与 相对于聚乙烯亚胺-环糊精0.5-2倍量的金刚烷-二硫键-聚乙二醇和0.1-0.4倍量的金刚 烷-聚乙二醇-靶向肽在水中混合，常温下搅拌反应6-12h后，溶液在透析袋中透析6-12h，然 后冰冻干燥得到基于聚乙烯亚胺-环糊精的多功能超分子基因运载系统。
【专利摘要】本发明公开了一种基于聚乙烯亚胺-环糊精的多功能超分子基因运载系统及其制备方法。以聚乙烯亚胺-环糊精聚阳离子化合物为骨架，以具有氧化还原反应性的金刚烷-二硫键-聚乙二醇、具有靶向性的金刚烷-聚乙二醇-靶向肽为修饰基团，利用自组装原理将聚乙烯亚胺-环糊精与金刚烷-二硫键-聚乙二醇、金刚烷-聚乙二醇-靶向肽进行组合，主客体作用形成超分子基因载体。本发明的运载系统具有多功能性，即氧化还原敏感性、靶向肝癌的特异性、优秀的基因转染效率，能够携带功能基因高效治疗肝脏恶性肿瘤。
【IPC分类】C08G83/00, C12N15/87
【公开号】CN105463024
【申请号】CN201510799067
【发明人】梁廷波, 胡奇达, 汤谷平, 王凯, 李洋, 孙旭
【申请人】浙江大学
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2015年11月18日