>[0029] 本发明所述试剂盒还可包括核酸DNA提取试剂。
[0030] 本发明所述DNA提取试剂可为本领域常规的用于DNA提取的试剂。优选的，所述提 取试剂按W:V比包含5~10%化elex-100,其中，本发明所述化elex-100是一种由苯乙締、二 乙締苯共聚体组成的化学馨合树脂，含有成对的亚氨基二乙酸盐离子。
[0031 ] 本发明所述试剂盒还可包括PCR反应所需的化q聚合酶、dNTP等，此外，还可包括说 明书。
[0032] 本发明还一方面提供了一种用于检测CYP2C19基因分型的PC时式剂，所述PC时式剂 包括本发明所述的引物对、巧光探针W及PCR缓冲液。
[0033] 在本发明【具体实施方式】中，所述引物对中各引物和探针在PC时式剂中的浓度为:正 向引物CYP2C19*2-F和/或正向引物CYP2C19*3-F的终浓度为0.08-0.15μΜ，反向引物 CYP2C19*2-R和/或反向引物CYP2C19*3-R的终浓度为0.72-1.5541，和/或，巧光探针 CYP2C19巧-P和/或巧光探针CYP2C19*3-P的终浓度为0.12-0.25μΜ。
[0034] 在本发明【具体实施方式】中，所述PCR试剂还可包括化q酶、dNTP等。本发明PCR试剂 中化q酶、dNTP的浓度的确定对于本领域技术人员来说可W根据所掌握的普通技术知识确 认，本发明对此不作限定。
[0035] 本发明另一方面提供了一种检测CYP2C19基因分型的方法，包括如下步骤：
[0036] (1)提供用于扩增CYP2C19*2基因的特异性引物对和/或用于扩增CYP2C19*3的特 异性引物对；
[0037] 其中，所述用于扩增CYP2C19*2基因的特异性引物对包括一条正向引物CYP2C19* 2-F和一条反向引物CYP2C19*2-R，所述正向引物CYP2C19*2-F具有序列表中SEQ ID NO: 1所 示的核巧酸序列，所述反向引物〔￥口2(：19巧-1?具有序列表中的56〇10^:2所示的核巧酸序 列；
[003引所述用于扩增CYP2C19*3基因的特异性引物对包括一条正向引物CYP2C19*3-F和 一条反向引物CYP2C19*3-R，所述正向引物CYP2C19*3-F具有序列表中SEQ ID N0:3所示的 核巧酸序列，所述反向引物〔￥口2(：19*3-1?具有序列表中的56010^:4所示的核巧酸序列；
[0039] (2)提供用于检测CYP2C19*2基因的巧光探针CYP2C19*2-P和/或用于检测 CYP2C19*3基因的巧光探针CYP2C19*3-P;
[0040] 其中，所述巧光探针〔￥口2(：19*2斗具有序列表中的569 10^):5所示的核巧酸序 列；
[0041 ] 所述巧光探针〔￥?2(：19*3斗具有序列表中的569 10^:6所示的核巧酸序列；
[0042] 所述巧光探针为在5'末端区域具有巧光基团，在3'末端区域具有泽灭基团的双标 记探针；
[0043] (3)加入待检测样品和步骤(1)所述的引物对及步骤(2)所述的巧光探针进行巧光 PCR扩增反应，对PCR产物进行烙解曲线分析，通过有无特定的烙解峰来判断样品的基因型。
[0044] 在本发明【具体实施方式】中，所述巧光PCR扩增反应的条件为:37°C1~10min，90~ 95°C3~lOmin，95°C10~20s，59~68°C40~60s，30~40个循环;所述烙解曲线分析的条件 为：95°C10s，40°Clmin，80°C10s。
[0045] 本发明所述检测CYP2C19基因分型的方法可包括疾病诊断或治疗目的，也包括非 疾病诊断或治疗目的。
[0046] 在本发明一【具体实施方式】中，所述引物对包括用于扩增CYP2C19*2基因的特异性 引物对和用于扩增CYP2C19*3的特异性引物对，所述巧光探针同时包括用于检测CYP2C19*2 基因的巧光探针CYP2C19巧-P和用于检测CYP2C19*3基因的巧光探针CYP2C19*3-P; CYP2C19 基因分型结果判定的具体方法为：
[0047] (1)样本检测烙解曲线中，如果在一个巧光通道内出现一个烙解峰，且Tm值在 47.5- 52°C之间（681GG)，在另一个巧光通道内出现一个烙解峰，且Tm值在46-48.8°C之间 (636GG)，样本基因型判断为CYP2C19*1/*1;
[004引（2)样本检测烙解曲线中，如果在一个巧光通道内出现两个烙解峰，且Tm值分别在 47.5- 52°C之间和55.9-59.3°C之间（681GA)，在另一个巧光通道内出现一个烙解峰，且Tm值 在46-48.8°C之间（636GG)，样本基因型判断为CYP2C19*l/*2;
[0049] (3)样本检测烙解曲线中，如果在一个巧光通道内出现一个烙解峰，且Tm值在 55.9-59.3°C之间（681AA)，在另一个巧光通道出现一个烙解峰，且Tm值在46-48.8°C之间 (636GG)，样本基因型判断为CYP2C19巧/*2;
[0050] (4)样本检测烙解曲线中，如果在一个巧光通道内出现一个烙解峰，且Tm值在 47.5- 52°C之间（681GG)，在另一个巧光通道内出现两个烙解峰，且化值分别在46-48.8°C之 间与56.8-60.3°C之间（636GA)，样本基因型判断为CYP2C19*l/*3;
[0051] (5)样本检测烙解曲线中，如果在一个巧光通道内出现一个烙解峰，且Tm值在 47.5- 52°C之间（681GG)，在另一个巧光通道内出现一个烙解峰，且Tm值在56.8-60.3°C之间 (636AA)，样本基因型判断为CYP2C19*3/*3;
[0052] (6)样本检测烙解曲线中，如果在一个巧光通道内出现两个烙解峰，且Tm值分别在 47.5- 52°C之间与55.9-59.3°C之间（681GA)，在另一个巧光通道内出现两个烙解峰，Tm值分 别在46-48.8°C与56.8-60.3°C之间（636GA)，样本基因型判断为CYP2C19巧/*3。
[0053] 在本发明【具体实施方式】中，在进行PCR扩增反应前还包括基因组DM的提取，所述 基因组DNA的提取样品选择全血、体液、组织样品或脱落细胞中的一种，优选为全血。
[0054] 本发明所述基因组DNA的提取的具体方法可采用化eler法、酪氯仿抽提法或磁珠 提取法中的一种或多种。
[0055] 本发明的有益效果包括W下内容：
[0056] 本发明所述检测CYP2C19基因分型的试剂盒及方法，同一突变位点的野生型及突 变型烙解峰的化差值在4°CW上，只需根据烙解峰的化值不同即可有效区分不同基因型。
[0057] 本发明所述的检测CYP2C19基因分型的试剂盒及方法，根据特异性巧光探针结合 不同PCR产物的烙解峰Tm值不同，可在单管中实现CYP2C19基因两个位点的基因分型，操作 简单、耗时短，提高了检测效率，且不需进行PCR产物的后续分析，降低了 PCR产物污染引起 的假阳性风险。
【附图说明】
[0化引图1本发明实施例1中第1个PCR管FAM通道检测结果，636GG型烙解峰，Tm为47.34 °C。
[0化9]图2本发明实施例1中第1个PCR管皿X通道检测结果，681GG型烙解峰，Tm为49.63 °C。
[0060] 图3本发明实施例1中第2个PCR管FAM通道检测结果，636GG型烙解峰，化为46.7°C。
[0061] 图4本发明实施例1中第2个PCR管皿X通道检测结果，681GA型烙解峰，Tm分别为 49.2°C 和 57.33°C。
[0062] 图5本发明实施例1中第3个PCR管FAM通道检测结果，636GG型烙解峰，化为47.2°C。
[0063] 图6本发明实施例1中第3个PCR管HEX通道检测结果，681AA型烙解峰，Tm为56.98 °C。
[0064] 图7本发明实施例1中第4个PCR管FAM通道检测结果，636GA型烙解峰，Tm分别为 46.7化和58.2。(3。
[00化]图8本发明实施例1中第4个PCR管皿X通道检测结果，681GG型烙解峰，Tm为49.62 °C。
[0066] 图9本发明实施例1中第5个PCR管FAM通道检测结果，636AA型烙解峰，Tm为57.77 °C。