3)。用固定化酶2催化反应。酶的使用浓度为550U/mL，使用20m3带夹套 搅拌反应釜，加入反应介质，等摩尔加入底物Π 和ΙΠ ，反应液中浓度为0.01-0.2 mol/L，用 三乙胺调节pH，pH为10.7，反应温度50°C，加入固定化酶2，开始反应。采用流加操作，反应1 小时后，开始流加操作，等摩尔流加 Π 和ΙΠ ，流加量为0.15mol/h L，反应时间22小时。滤出 固定化酶，蒸出有机溶剂，得到产品，固定化酶可以重复使用。产率97%，对映体过量率ee值 为 99 %。
[0016] 实施例5 用1，4_二噻烷-2,5-二醇（Π )与苯甲酰氧乙醛（ΙΠ )反应，反应介质为四氢呋喃与乙酸 乙酯的混合物（1:0.3)。采用市售地衣芽孢杆菌蛋白酶，按照前述固定化酶2的方法固定化 后进行催化反应，酶的使用浓度为600U/mL，使用lm 3带夹套搅拌反应釜，加入反应介质，等 摩尔加入底物Π 和ΙΠ ，反应液中浓度为0.15 mol/L，用三乙胺调节pH，pH为11，反应温度45 °C，加入固定化地衣芽孢杆菌蛋白酶，开始反应。采用流加操作，反应1小时后，开始流加操 作，等摩尔流加 Π 和ΙΠ ，流加量为0.2mol/h L，反应时间28小时。滤出固定化酶，蒸出有机溶 剂，得到产品，固定化酶可以重复使用。产率95 %，对映体过量率ee值为97 %。
[0017] 实施例6 用1，4_二噻烷-2,5-二醇（Π )与苯甲酰氧乙醛（ΙΠ )反应，反应介质为四氢呋喃(THF)， 采用市售地衣芽孢杆菌蛋白酶，按照前述固定化酶2的方法固定化后进行催化反应，酶的使 用浓度为300U/mL，使用0. lm3带夹套搅拌反应釜，加入反应介质，等摩尔加入底物Π 和！Π ， 反应液中浓度为0.04 mol/L，用三乙胺调节pH，pH为9，反应温度30°C，加入固定化地衣芽孢 杆菌蛋白酶，开始反应。采用流加操作，反应2小时后，开始流加操作，等摩尔流加 Π 和m，流 加量为〇. 〇5mo 1 /h L，反应时间20小时。滤出固定化酶，蒸出有机溶剂，得到产品，固定化酶 可以重复使用。产率93%，对映体过量率ee值为99%。
[0018] 实施例7 用1，4_二噻烷_2,5_二醇（Π )与苯甲酰氧乙醛（ΙΠ )反应，反应介质为乙酸乙酯，采用市 售地衣芽孢杆菌蛋白酶，按照前述固定化酶2的方法固定化后进行催化反应，酶的使用浓度 为500U/mL，使用lm3带夹套搅拌反应釜，加入反应介质，等摩尔加入底物Π 和ΙΠ ，反应液中 浓度为0.15 mol/L，用三乙胺调节pH，pH为10,反应温度50°C，加入固定化地衣芽孢杆菌蛋 白酶，开始反应。采用流加操作，反应1小时后，开始流加操作，等摩尔流加 Π 和ΙΠ ，流加量为 0.2mo 1/h L，反应时间22小时。滤出固定化酶，蒸出有机溶剂，得到产品，固定化酶可以重复 使用。产率96%，对映体过量率ee值为97%。
[0019] 实施例8 用1，4_二噻烷-2,5-二醇（Π )与苯甲酰氧乙醛（ΙΠ )反应，反应介质为四氢呋喃(THF)， 采用市售短小芽孢杆菌蛋白酶，按照前述固定化酶2的方法固定化后进行催化反应，酶的使 用浓度为600U/mL，使用0. lm3带夹套搅拌反应釜，加入反应介质，等摩尔加入底物Π 和！Π ， 反应液中浓度为0.04 mol/L，用三乙胺调节pH，pH为9，反应温度30°C，加入固定化短小芽孢 杆菌蛋白酶，开始反应。采用流加操作，反应2小时后，开始流加操作，等摩尔流加 Π 和m，流 加量为〇. 〇5mo 1 /h L，反应时间20小时。滤出固定化酶，蒸出有机溶剂，得到产品，固定化酶 可以重复使用。产率98 %，对映体过量率ee值为98 %。
[0020] 实施例9 用1，4_二噻烷_2,5_二醇（Π )与苯甲酰氧乙醛（ΙΠ )反应，反应介质为乙酸乙酯，采用市 售短小芽孢杆菌蛋白酶，按照前述固定化酶2的方法固定化后进行催化反应，酶的使用浓度 为500U/mL，使用lm3带夹套搅拌反应釜，加入反应介质，等摩尔加入底物Π 和ΙΠ ，反应液中 浓度为0.15 mol/L，用三乙胺调节pH，pH为10,反应温度50°C，加入固定化短小芽孢杆菌蛋 白酶，开始反应。采用流加操作，反应1小时后，开始流加操作，等摩尔流加 Π 和ΙΠ ，流加量为 0.2mo 1/h L，反应时间28小时。滤出固定化酶，蒸出有机溶剂，得到产品，固定化酶可以重复 使用。产率98%，对映体过量率ee值为96%。
[0021] 实施例10 用1，4_二噻烷-2,5-二醇（Π )与苯甲酰氧乙醛（ΙΠ )反应，反应介质为四氢呋喃与乙酸 乙酯的混合物（1:0.3)。采用市售短小芽孢杆菌蛋白酶，按照前述固定化酶2的方法固定化 后进行催化反应，酶的使用浓度为300U/mL，使用lm 3带夹套搅拌反应釜，加入反应介质，等 摩尔加入底物Π 和ΙΠ ，反应液中浓度为0.15 mol/L，用三乙胺调节pH，pH为11，反应温度45 °C，加入固定化短小芽孢杆菌蛋白酶，开始反应。采用流加操作，反应1小时后，开始流加操 作，等摩尔流加 Π 和ΙΠ ，流加量为0.2mo 1/h L，反应时间14小时。滤出固定化酶，蒸出有机溶 剂，得到产品，固定化酶可以重复使用。产率97 %，对映体过量率ee值为99 %。
【主权项】
1. 一种酶法制备1，3-氧硫杂戊烧手性中间体（I)的方法，其特征在于用固定化蛋白酶 催化1，4-二嚷烧-2，5-二醇（Π )与苯甲酯氧乙醒（虹）反应，反应介质为四氨巧喃(THF)、乙 酸乙醋或者四氨巧喃与乙酸乙醋的混合物，得到关键手性中间体2R-苯甲酯氧甲基-5S-乙 酷氧基-1，3-氧硫杂戊烧(I )，反应式如下：固定化蛋白酶的使用浓度为300-600U/mL，在反应介质中等摩尔加入底物Π 和虹，使浓 度为0.04-0.2 mo 1/L，用Ξ乙胺调节抑为9-11，反应溫度30-50°C，加入固定化蛋白酶，开始 反应;反应1-2小时后，开始流加操作，等摩尔流加 Π 和m，流加量为0.05-0.2mol A L，反应 时间10-28小时；产率92-98%，对映体过量率ee值为95-99% ;滤出固定化酶，蒸出有机溶 剂，得到拉米夫定关键手性中间体（I )，所述蛋白酶来自地衣芽抱杆菌、枯草芽抱杆菌或者 短小芽抱杆菌。
【专利摘要】本发明提供了一种酶法制备1,3-氧硫杂戊烷手性中间体的方法，即制备2R-苯甲酰氧甲基-5S-乙酰氧基-1，3-氧硫杂戊烷（Ⅰ）的方法，采用固定化蛋白酶催化1，4-二噻烷-2，5-二醇（Ⅱ）与苯甲酰氧乙醛（Ⅲ）反应，反应介质为四氢呋喃（THF）、乙酸乙酯,或者四氢呋喃与乙酸乙酯的混合物，用三乙胺调节pH为9-11，反应温度30-50℃，通过酶催化的动态共价动力学拆分制得，反应产率高，对映体过量率高。本发明以一锅法酶催化高效不对称合成<b>Ⅰ</b>，酶立体选择高，反应条件温和，避免了现有技术中化学催化剂、手性辅助试剂的使用，环境友好，安全性好。
【IPC分类】C12P17/00
【公开号】CN105567757
【申请号】CN201610033381
【发明人】张媛媛, 程明林, 刘均洪
【申请人】青岛科技大学
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2016年1月19日