9获自美国典型培养物保藏中心并维持在37°C的潮湿气氛(含 5%C02)下的RPMI-1640(其中补充有1%L-谷氨酰胺、1%青霉素/链霉素和10%胎牛血清） (Life Technologies，Inc·)中。
[0174] 动物
[0175] 动物程序按照南加州大学实验动物使用与管理委员会批准的协议进行。在程序 中，在4至6周龄的20g至30g雄性无胸腺小鼠（BALB/c nu/nu)的肩部以1 X 106细胞/0. lmL的 浓度皮下注射HT-29人结肠腺癌细胞(美国典型培养物保藏中心），并给予足够的时间以使 肿瘤生长到至少3毫米的直径。
[0176] 体外细胞结合测定
[0177] 19F-DEG-VS-NT和NT(8-13)的体外NTR1-结合亲和力和特异性是如前所述（18)利 用125I-NT(8-13)通过竞争性细胞结合测定（PerkinElmer，Waltham，MA)进行评估。详细地， 将HT-29细胞置于48孔板（1百万/0.4mL/孔)并温育过夜。细胞用结合缓冲液(50mM Hepes， 125mM NaCl，7.5mM KCl，5.5mM MgCl2，lmM EGTA，5g/L BSA，2mg/L胰凝乳，100mg/L大豆胰 蛋白酶抑制剂，50mg//L杆菌肽，pH 7.4)洗涤三次。册-29细胞一式三份分别与25000叩111的 125I-NT(8-13)以及不同浓度（O.OOlnM 至 ΙΟΟΟηΜ)的 19F-DEG-VS-NT 和 NT(8-13)在 37°C 温育 1 小时。洗涤后，将细胞在37°C用lmol/L NaOH溶解，其放射活性用γ -计数器测定。ΗΤ-29细 胞最佳拟合50%抑制浓度（1〇5())值通过使用6瓜口11?3(1?1^81]1(6瓜口11?3(1软件)非线性回归拟 合数据来进行计算。实验是用一式三份样品进行的。
[0178] 2.小鼠 ΗΤ-29肿瘤异种移植物的生物分布和显微PET成像
[0179] 在携带HT-29结肠异种移植物的裸鼠尾静脉注射3.7MBq 18F-DEG-VS-NT或18F-FBEM-NT(分另ljn = 3)后进行显微PET成像。为进行阻断研究，将NT(8-13)(100yg)与18F-DEG-VS-NT (η = 3)共同注射。串行成像(注射后0.5、1和2小时;扫描持续时间分别为5分钟、5分钟 和 10分钟）使用显微PET R4扫描器（Concorde Microsystems，Knoxville，TN;8cm轴向视野， 空间分辨率2.0mm )。
[0180] 图像通过MAP迭代算法使用显微PET Manager软件（Concorde Microsystems， Knoxville，TN)重建，然后通过Acquisition Sinogram Image Processing(ASIPro)软件 (Concorde Microsystems，Knoxvilie，TN)分析该图像。肝脏内平均放射性累积从PET肝脏 图像的中央部分内绘制的所关注三维区域(R0I)获得。使用通过扫描充有已知活性浓度 18F 的圆柱假体获得的校准因子，将图像强度转换为活性浓度(Bq/cm3)的单位。假定组织密度 为lg/mL，测定的组织活性浓度被换算成以Bq/g为单位，再乘以100并除以注射剂量，以获得 源于图像的百分比注射剂量/克组织（％ ID/g)。
[0181] 生物分布是用带有HT-29结肠异种移植物的裸鼠进行。在注射3.7 MBq18F-DEG_VS- NT后2小时，吸入麻醉下处死动物。切除并称重所关注的器官。使用γ 计数器测定每个切 除的标本的放射性;放射性摄取用％ID/g表达。计算各组动物平均摄取（％ID/g)和相应的 标准偏差。
[0182]体内代谢稳定性
[0183] 评价了在携带HT-29肿瘤的裸鼠中的18F-DEG-VS-NT和18F-FBEM-NT的体内代谢稳 定性。静脉注射7.4MBq的18F-DEG-VS-NT和18F-FBEM-NT后30分钟，将小鼠处死。收集尿液并 用lmL的roS稀释。血液在14,000rpm离心5分钟。收集肝、肾脏和肿瘤并使用匀浆机匀化，悬 浮在lmL PBS缓冲液中，然后在14,000rpm离心5分钟。对于每个样品，在除去上清液后，将 50%TFA的100yL PBS加入到该溶液中，接着混合并离心5分钟。然后将上层溶液收集，并注 射进行HPLC分析(HPLC方法3)。用级分收集器收集洗脱液(1.0分钟/级分），每个级分的放射 性用γ 计数器测定。对于18F-DEG-VS-C(RGDyC)和18F-FBEM- C(RGDyC)，收集尿液样品并通 过HPLC分析。
[0184] 3.统计分析
[0185] 定量数据表示为平均值土 SD。使用单向AN0VA和t分布检验进行比较。P<0.05被认 为是统计学显著。
[0186] 实施例2
[0187] 神经降压素受体(NTR)的过度表达与前列腺癌的进展和生长增加和增殖有关。这 项工作的目的是评估用于前列腺癌的NTR1靶成像的PET剂18F-DEG-VS-NT。
[0188] 13个氨基酸的NT肽经设计在氨基端具有游离巯基(NT-SH)。巯基（sulfhydryl)特 异性18F-乙烯基砜(18F-VS)被开发用于NT-SH偶联。18F-DEG-VS-NT的体外研究(包括受体结 合测定、细胞摄取和流出测定)是使用人前列腺癌PC3细胞系进行的。体内PET和生物分布研 究也使用带有PC3异种移植物的裸鼠进行。
[0189]从共沸干燥18F-氟化物开始，18F-VS是一步合成的，并且在生产规模下有24.3 %的 经衰减校正的产率。NT-SH和18F-VS的偶联在室温以30.5 %分离产率生成18F-DEG-VS-NT。在 冷的NT肽的存在下，18F-DEG-VS-NT在PC3细胞中的摄取被成功阻断。PET成像分析展示出PC3 肿瘤模型中的高肿瘤摄取和低背景摄取。在注射后3小时进行生物分布研究，其表明肿瘤与 肌肉、肝脏和肾脏的比率分别为19.4±5.5、15.6±4.1和3.0±0.3。
[0190] 18F-DEG-VS-NT展示出高的PC3肿瘤摄取和正常组织中的低背景，如显微PET图像所 示。 18F-DEG-VS-NT是有前景的通过靶向NTR1诊断前列腺癌的PET剂。
[0191] 实施例3
[0192] 基于新开发的本发明的18F-乙烯基砜(18F-VS)，已开发了 18F-DEG-VS-NT用于神经 降压素受体(NTR)靶向成像。在这项工作中，发明人研究了该巯基反应性合成子与成熟 18F-FBEM标记方法相比是否显示出优势。
[0193] 基于已经成熟确立的18F-FBEM和发明人新开发的18F-乙烯基砜，合成了 18F-FBEM-NT和18F-DEG-VS-NT用于NTR1靶向成像。使用携带HT29异种移植物的裸鼠进行了体内PET和 代谢稳定性研究。
[0194] 基于HPLC积分，以> 90 %产率获得了 18F-FBEM-NT和18F-DEG-VS-NT。两种试剂在 PBS溶液中显示出良好的稳定性。然而，代谢稳定性研究表明，这些试剂在体内有数种代谢 物，这可能是由于神经降压素类似物的半衰期很短所致。在成像研究中未见明显的骨摄取， 表明体内脱氟可忽略不计。尽管这两种示踪剂在稳定性研究中没有表现出显著差异，但是 18f-deg-vs-nt确实有比18f-fbem-nt更低的腹部背景和更高的肿瘤肿瘤。
[0195] 相对于18F-FBEM-NT，18F-DEG-VS-NT在体内成像实验中显示出更好的成像品质和 对比度。
[0196] 实施例4
[0197]神经降压素受体(NTR)已被认为在癌症生长和存活中起关键作用。这项工作的目 的是开发用于各种癌症类型的NTR1靶向成像的18F标记的PET试剂。
[0198] 将乙酸基引入CysNT肽的氨基端，然后将该肽与18F-乙烯基砜(18F-VS)反应。体内 PET成像使用携带HT29、BXPC3和Colo 205异种移植物的裸鼠进行。
[0199] (Ac)CysNT能与18F-VS高效反应，基于HPLC积分其产率SgO^^F-VS-U^NT的放 射化学纯度>98%。无创显微PET表明， 18F-VS-(Ac)NT在皮下HT-29、BXPC3和Colo 205异种 移植物中展示出NTR特异性肿瘤摄取。阻断实验成功地证明了受体特异性。
[0200] 18F-VS-(Ac)NT在结肠直肠癌和胰腺癌模型中展示出特异性肿瘤摄取和良好的肿 瘤与背景对比度。 18F-VS-(Ac)NT是有前景的NTR1靶向PET成像用试剂。
[0201] 尽管本发明已经就具体的示例性实施方式和实例而言进行了描述，但是应当理 解，这里公开的实施方式仅用于说明用途，本领域技术人员可以在不脱离如所附权利要求 所阐述的本发明的主旨和范围的情况下进行修改和变化。
[0202] 表1.选择的用于18F-DEG-VS放射合成的条件
[0203]
[0204] 参考文献
[0205]本文依赖于下面的参考文献并将其整体并入：
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