m的圆柱形玻璃柱中，用IL无水乙醇分3次对玻璃柱中的固相萃取剂进行淋洗并从玻璃柱下方收集淋洗液，将淋洗液合并后装入蒸馏装置中，蒸馏回收无水乙醇后得到葛根黄酮化合物浓缩液，最后经真空冻干后粉碎并过200目标准筛，包装，S卩得葛根黄酮类提取物。
[0013]所述的复合酶制剂是由纤维素酶和果胶酶按质量比为2:1复配制得。
[0014]本发明制得的葛根黄酮类提取物的提取率达到3.15%，纯度为53.6%，分离速度快，有效成分损失少、成本低，可广泛应用在化妆品、医药、食品等工业中，目前黄酮类化合物在食品工业中，可以作为天然甜味剂、天然色素、保健食品等;应用在药物中可具有抗炎镇痛、免疫调节、抗心脑血管疾病、抗癌抗肿瘤等作用。
[0015]实例2
首先精确称取1.5mmoI黄岑素或黄岑苷和8mmoI甲基丙稀酸装入10mL带有搅拌器、温度计和通气口的三口烧瓶中，再加入55mL无水乙醇，启动搅拌器搅拌直至反应物完全溶解，常温下密封静置使黄酮类模板和功能单体反应过夜；反应结束后在搅拌状态下继续加入4.5gN，N’_亚甲基双丙烯酰胺交联剂和23mg偶氮二异庚腈引发剂，经通气口向烧瓶中通入氮气置换出瓶中空气后密闭瓶口，将烧瓶移入水浴锅加热升温至55°C，保温反应22h产生淡黄色沉淀，过滤后干燥得分子印迹聚合物;将得到分子印迹聚合物研磨后过100目标准筛，将过筛后的粉末放入其体积4倍由0.5mol/L甲醇和0.3mol/L醋酸按体积比为10:1组成的混合液中沉降至上层液澄清为止，过滤后干燥即得分子印迹固相萃取剂，备用；称取1.5kg葛根放入药材粉碎机中粉碎并过100目标准筛，将550g过筛后的葛根粉装入搪瓷酶解罐中，再加入1.5L蒸馏水，用搅拌棒搅拌均匀后，按反应底物总质量7%加入复合酶制剂后，用浓度为
0.5mol/L盐酸调节pH至4.5，放入恒温箱，在43 °C下酶解7h;酶解结束后，过滤去除滤渣得到酶解液，量取450mL酶解液装入IL烧杯中，按液固比为3:1向酶解液中加入备用的分子印迹固相萃取剂，再将烧杯放置超声振荡仪中，在频率为30kHz和功率为150W的条件下超声固相萃取55min;萃取结束后过滤分离得到固相萃取剂，将其装入直径为3cm，高为20cm的圆柱形玻璃柱中，用1.5L无水乙醇分4次对玻璃柱中的固相萃取剂进行淋洗并从玻璃柱下方收集淋洗液，将淋洗液合并后装入蒸馏装置中，蒸馏回收无水乙醇后得到葛根黄酮化合物浓缩液，最后经真空冻干后粉碎并过200目标准筛，包装，S卩得葛根黄酮类提取物。
[0016]所述的复合酶制剂是由纤维素酶和果胶酶按质量比为2:1复配制得。
[0017]本发明制得的葛根黄酮类提取物的提取率达到5.21%，纯度为58.90%，分离速度快，有效成分损失少、成本低，可广泛应用在化妆品、医药、食品等工业中，目前黄酮类化合物在食品工业中，可以作为天然甜味剂、天然色素、保健食品等;应用在药物中可具有抗炎镇痛、免疫调节、抗心脑血管疾病、抗癌抗肿瘤等作用。
[0018]实例3
首先精确称取2mmol黄岑素或黄岑苷和1mmol甲基丙稀酸装入10mL带有搅拌器、温度计和通气口的三口烧瓶中，再加入60mL无水乙醇，启动搅拌器搅拌直至反应物完全溶解，常温下密封静置使黄酮类模板和功能单体反应过夜;反应结束后在搅拌状态下继续加入5gN，N’-亚甲基双丙烯酰胺交联剂和25mg偶氮二异庚腈引发剂，经通气口向烧瓶中通入氮气置换出瓶中空气后密闭瓶口，将烧瓶移入水浴锅加热升温至60°C，保温反应24h产生淡黄色沉淀，过滤后干燥得分子印迹聚合物;将得到分子印迹聚合物研磨后过100目标准筛，将过筛后的粉末放入其体积5倍由0.5mol/L甲醇和0.3mol/L醋酸按体积比为10:1组成的混合液中沉降至上层液澄清为止，过滤后干燥即得分子印迹固相萃取剂，备用；称取2kg葛根放入药材粉碎机中粉碎并过100目标准筛，将600g过筛后的葛根粉装入搪瓷酶解罐中，再加入2L蒸馏水，用搅拌棒搅拌均匀后，按反应底物总质量8%加入复合酶制剂后，用浓度为0.5mol/L盐酸调节PH至5，放入恒温箱，在45°C下酶解8h;酶解结束后，过滤去除滤渣得到酶解液，量取500mL酶解液装入IL烧杯中，按液固比为3:1向酶解液中加入备用的分子印迹固相萃取剂，再将烧杯放置超声振荡仪中，在频率为35kHz和功率为200W的条件下超声固相萃取60min;萃取结束后过滤分离得到固相萃取剂，将其装入直径为3cm，高为20cm的圆柱形玻璃柱中，用2L无水乙醇分5次对玻璃柱中的固相萃取剂进行淋洗并从玻璃柱下方收集淋洗液，将淋洗液合并后装入蒸馏装置中，蒸馏回收无水乙醇后得到葛根黄酮化合物浓缩液，最后经真空冻干后粉碎并过200目标准筛，包装，S卩得葛根黄酮类提取物。
[0019]所述的复合酶制剂是由纤维素酶和果胶酶按质量比为2:1复配制得。
[0020]本发明制得的葛根黄酮类提取物的提取率达到6.48%，纯度为62.8%，分离速度快，有效成分损失少、成本低，可广泛应用在化妆品、医药、食品等工业中，目前黄酮类化合物在食品工业中，可以作为天然甜味剂、天然色素、保健食品等;应用在药物中可具有抗炎镇痛、免疫调节、抗心脑血管疾病、抗癌抗肿瘤等作用。
【主权项】
1.一种固相萃取葛根中黄酮类化合物的方法，其特征在于具体提取步骤为: (1)精确称取I?2mmoI黄岑素或黄岑苷和5?1mmoI甲基丙稀酸装入10mL带有搅拌器、温度计和通气口的三口烧瓶中，再加入50?60mL无水乙醇，启动搅拌器搅拌直至反应物完全溶解，常温下密封静置使黄酮类模板和功能单体反应过夜； (2)反应结束后在搅拌状态下继续加入4?5gN，N’_亚甲基双丙烯酰胺交联剂和20?25mg偶氮二异庚腈引发剂，经通气口向烧瓶中通入氮气置换出瓶中空气后密闭瓶口，将烧瓶移入水浴锅加热升温至45?60°C，保温反应20?24h产生淡黄色沉淀，过滤后干燥得分子印迹聚合物； (3)将上述得到分子印迹聚合物研磨后过100目标准筛，将过筛后的粉末放入其体积3?5倍由0.511101/1甲醇和0.311101/1醋酸按体积比为10:1组成的混合液中沉降至上层液澄清为止，过滤后干燥即得分子印迹固相萃取剂，备用； (4)称取I?2kg葛根放入药材粉碎机中粉碎并过100目标准筛，将500?600g过筛后的葛根粉装入搪瓷酶解罐中，再加入I?2L蒸馏水，用搅拌棒搅拌均匀后，按反应底物总质量6?8%加入复合酶制剂后，用浓度为0.5mol/L盐酸调节pH至4?5，放入恒温箱，在40?45 °C下酶解6?8h; (5 )酶解结束后，过滤去除滤渣得到酶解液，量取400?500mL酶解液装入IL烧杯中，按液固比为3:1向酶解液中加入备用的分子印迹固相萃取剂，再将烧杯放置超声振荡仪中，在频率为25?35kHz和功率为100?200W的条件下超声固相萃取50?60min; (6)萃取结束后过滤分离得到固相萃取剂，将其装入直径为3cm，高为20cm的圆柱形玻璃柱中，用I?2L无水乙醇分3?5次对玻璃柱中的固相萃取剂进行淋洗并从玻璃柱下方收集淋洗液，将淋洗液合并后装入蒸馏装置中，蒸馏回收无水乙醇后得到葛根黄酮化合物浓缩液，最后经真空冻干后粉碎并过200目标准筛，包装，S卩得葛根黄酮类提取物。2.根据权利要求1所述的一种固相萃取葛根中黄酮类化合物的方法，其特征在于:所述的复合酶制剂是由纤维素酶和果胶酶按质量比为2:1复配制得。
【专利摘要】本发明公开了一种固相萃取葛根中黄酮类化合物的方法，属于黄酮类化合物领域。本发明以黄岑素或黄岑苷为黄酮类模板，以甲基丙烯酸为功能单体，以N，N’-亚甲基双丙烯酰胺为交联剂制备出分子印迹固相萃取剂，利用分子印迹固相萃取剂在葛根粉酶解液中吸附，再淋洗回收葛根黄酮化合物，对其浓缩、干燥、粉碎即可，本发明得到的葛根黄酮类提取物纯度高，分离回收率高，提取过程中不需要大量溶剂，对环境友好，而且有效成分损失少、成本低、效率快、副产物少。
【IPC分类】B01J20/26, B01J20/30, C07G99/00
【公开号】CN105669782
【申请号】CN201610151227
【发明人】袁春华, 王志慧, 林大伟
【申请人】袁春华
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年3月17日