用于从微生物细胞获得微生物油的方法

用于从微生物细胞获得微生物油的方法
【专利摘要】本发明公开了用于从一个或多个微生物细胞获得包含一种或多种多不饱和脂肪酸(PUFA)的微生物油的方法，其通过裂解细胞以形成裂解细胞组合物，处理所述裂解细胞组合物以形成含油乳液，然后从所述含油乳液回收所述油。本发明还公开了包含一种或多种PUFA的微生物油，其通过至少一个本文所述的方法自微生物细胞回收。
【专利说明】用于从微生物细胞获得微生物油的方法
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2013年12月20日提交的美国临时专利申请No.61/919,000和2014年12 月18日提交的No. 62/093，986的申请日权益，其公开内容在此通过提述并入本文。
[圆]发明背景
[0004] 本发明公开了用于从一个或多个微生物细胞获得包含一种或多种多不饱和脂肪 酸(PUFA)的微生物油的方法，其通过裂解细胞W形成裂解细胞组合物，处理所述裂解细胞 组合物W形成含油乳液，然后从所述含油乳液回收所述油。本发明还公开了包含一种或多 种PUFA的微生物油，其通过至少一个本文所述的方法自微生物细胞回收。
[0005] 含有一种或多种PUFA的微生物油是由微生物所生产，例如，举例而言，藻类及真菌 类。
[0006] 从微生物细胞获得含PUFA的油的通常方法设及:使能够生产所需的油的微生物在 发酵器、池或生物反应器中生长W产生微生物细胞生物质(biomass);从所述生物质生长的 发酵培养基分离该生物质;干燥该微生物细胞生物质，使用不与水混溶的有机溶剂(例如己 烧)从该干燥的细胞提取所述油；W及从所述油去除该有机溶剂(例如己烧）。此方法还可设 及用水稀释含有所述细胞生物质的该发酵培养基然后离屯、W从经稀释的发酵培养基分离 所述生物质。
[0007] 从微生物细胞获得含PUFA的油的另一种方法设及:使能够生产所需的油的微生物 在发酵器、池或生物反应器中生长W生产微生物细胞生物质；通过使用机械力（例如均质 化）、酶处理、或化学处理破坏细胞壁，从而将所述含PUFA的油释放至该细胞生长的发酵培 养基中；W及用水溶性有机溶剂(例如异丙醇)从所得的含有含PUFA的油、细胞碎片和液体 的组合物回收该油。可W从该组合物机械地分离所述油，并且必须从所述油和水性生物质 废物流二者去除醇。
[000引从微生物细胞获得含PUFA的油的上述任一项方法的工业规模利用需要使用大量 的挥发性且可燃的有机溶剂，运产生了危险的操作条件且需要使用昂贵的防爆设备。此外， 使用有机溶剂会产生有机溶剂废物流，其需要执行昂贵的溶剂回收工艺W解决对于挥发性 有机化合物(V0C)排放的严格环境限制，运又导致需要更多的人力W及昂贵的设备。
[0009] 并且，上述方法中使用热来干燥细胞和/或从回收的油去除溶剂可降解含PUFA的 油且增加能源的使用，运可进一步增加加工成本。当含PUFA的油暴露于氧时(如当微生物细 胞壁的完整性被破坏时)和/或微生物细胞暴露于热时，发生降解。
[0010] 用于从微生物细胞获得含PUFA的油的无溶剂方法设及:使能够生产所需的油的微 生物在发酵器、池或生物反应器中生长W产生微生物细胞生物质;通过使用机械力(例如均 质化）、酶处理、或化学处理破坏细胞壁而将所述含PUFA的油释放至该细胞生长的发酵培养 基中；W及通过提升pH、添加盐、加热，和/或揽拌所得的组合物而从所得的组合物（其包含 含有PUFA的油、细胞碎片和液体）回收粗制油。然而，此种从细胞获得含PUFA的油的无溶剂 方法可需要长的油回收时间、大量的盐，和/或许多步骤，其都能增加加工成本。
[0011] 结果，仍然需要一种用于从微生物细胞获得高质量的含PUFA的油的方法，其不使 用挥发性有机溶剂、可w使用容易得到的设备进行、需要最小数目的步骤、具有更短的油回 收时间，并且能提供高质量的含PUFA的油的高产量/收率(yield)。
[0012] 本文公开了一种用于从一个或多个微生物细胞获得包含一种或多种多不饱和脂 肪酸(PUFA)的微生物油的方法，该方法包括：
[0013] (a)裂解包含所述微生物油的细胞W形成裂解细胞组合物；
[0014] (b)处理所述裂解细胞组合物W形成含油乳液；
[0015] (C)从所述裂解细胞组合物分离所述含油乳液；
[0016] (d)将所述含油乳液去乳化;和
[0017] (e)回收所述油。
[0018] 本文公开了一种用于从一个或多个微生物细胞获得包含一种或多种多不饱和脂 肪酸(PUFA)的微生物油的方法，该方法包括：
[0019] (a)裂解包含所述微生物油的细胞W形成裂解细胞组合物；
[0020] (b)处理所述裂解细胞组合物W形成含油乳液；
[0021 ] (C)从所述裂解细胞组合物分离所述含油乳液；
[0022] (d)将所述含油乳液去乳化;和
[0023] (e)回收所述油，
[0024] 其中（a)或(b)中至少一个还包括提升所述细胞或裂解细胞组合物的pH。
[0025] 本文公开了一种用于从一个或多个微生物细胞获得包含一种或多种多不饱和脂 肪酸(PUFA)的微生物油的方法，该方法包括：
[0026] (a)裂解包含所述微生物油的细胞W形成裂解细胞组合物；
[0027] (b)处理所述裂解细胞组合物W形成含油乳液；
[0028] (C)从所述裂解细胞组合物分离所述含油乳液；
[0029] (d)将所述含油乳液去乳化;和
[0030] (e)回收所述油，
[0031] 其中（a)或(b)中至少一个还包括将所述细胞或裂解细胞组合物加热到至少50°C。
[0032] 本文公开了一种用于从一个或多个微生物细胞获得包含一种或多种多不饱和脂 肪酸(PUFA)的微生物油的方法，该方法包括：
[0033] (a)裂解包含所述微生物油的细胞W形成裂解细胞组合物；
[0034] (b)处理所述裂解细胞组合物W形成含油乳液；
[0035] (C)从所述裂解细胞组合物分离所述含油乳液；
[0036] (d)将所述含油乳液去乳化;和
[0037] (e)回收所述油，
[0038] 其中（a)或(b)中至少一个还包括揽拌所述细胞或裂解细胞组合物。
[0039] 本文公开了一种用于从一个或多个微生物细胞获得包含一种或多种多不饱和脂 肪酸(PUFA)的微生物油的方法，该方法包括：
[0040] (a)裂解包含所述微生物油的细胞W形成裂解细胞组合物；
[0041] (b)处理所述裂解细胞组合物W形成含油乳液；
[0042] (C)从所述裂解细胞组合物分离所述含油乳液；
[0043] (d)将所述含油乳液去乳化;和
[0044] (e)回收所述油，
[0045] 其中（a)还包括添加酶。
[0046] 本文公开了一种用于从一个或多个微生物细胞获得包含一种或多种多不饱和脂 肪酸(PUFA)的微生物油的方法，该方法包括：
[0047] (a)裂解包含所述微生物油的细胞W形成裂解细胞组合物；
[0048] (b)处理所述裂解细胞组合物W形成含油乳液；
[0049] (C)从所述裂解细胞组合物分离所述含油乳液；
[0050] (d)将所述含油乳液去乳化;和
[0化1] (e)回收所述油，
[0化2] 其中（b)还包括添加盐。
[0053] 本文公开了一种用于从一个或多个微生物细胞获得包含一种或多种多不饱和脂 肪酸(PUFA)的微生物油的方法，该方法包括：
[0054] (a)裂解包含所述微生物油的细胞W形成裂解细胞组合物；
[0055] (b)处理所述裂解细胞组合物W形成含油乳液；
[0056] (C)从所述裂解细胞组合物分离所述含油乳液；
[0057] (d)将所述含油乳液去乳化;和 [0化引（e)回收所述油，
[0化9] 其中（C)还包括离屯、。
[0060] 本文公开了一种用于从一个或多个微生物细胞获得包含一种或多种多不饱和脂 肪酸(PUFA)的微生物油的方法，该方法包括：
[0061] (a)裂解包含所述微生物油的细胞W形成裂解细胞组合物；
[0062] (b)处理所述裂解细胞组合物W形成含油乳液；
[0063] (C)从所述裂解细胞组合物分离所述含油乳液；
[0064] (d)将所述含油乳液去乳化;和 [00化](e)回收所述油，
[0066] 其中（d)还包括加热到至少50°C、添加酸和添加碱中的至少一个。
[0067] 本文公开了一种用于从一个或多个微生物细胞获得包含一种或多种多不饱和脂 肪酸(PUFA)的微生物油的方法，该方法包括：
[0068] (a)裂解包含所述微生物油的细胞W形成裂解细胞组合物；
[0069] (b)处理所述裂解细胞组合物W形成含油乳液；
[0070] (C)从所述裂解细胞组合物分离所述含油乳液；
[0071] (d)将所述含油乳液去乳化;和
[0072] (e)回收所述油，
[0073] 其中（a)和(b)中至少一个包括提升所述细胞或裂解细胞组合物的抑，揽拌所述细 胞或裂解细胞组合物，W及加热所述细胞或裂解细胞组合物。
[0074] 本发明公开了通过本文所述任一方法获得的微生物油。
[0075] 本领域普通技术人员在阅读W下详细说明后，会更容易了解本发明的特征和优 点。应该了解的是，出于更清楚的原因，上文和下文的分开的实施方案的语境中所述的本发 明的某些特征也可W组合W形成其次级组合(sub-combinations)。
[0076] 本文作为示例鉴定的实施方案意欲为说明性的而非限制性的。
[0077] 术语"约"意欲获取所述数字W上和W下的变动，其可W实现与所述数字基本相同 的结果。
[0078] 本文公开了一种用于从一个或多个微生物细胞获得包含一种或多种多不饱和脂 肪酸(PUFA)的微生物油的方法，该方法包括：
[0079] (a)裂解包含所述微生物油的细胞W形成裂解细胞组合物；
[0080] (b)处理所述裂解细胞组合物W形成含油乳液；
[0081 ] (C)从所述裂解细胞组合物分离所述含油乳液；
[0082] (d)将所述含油乳液去乳化;和
[0083] (e)回收所述油。
[0084] 在一些实施方案中，（a)或(b)中至少一个还包括提升所述细胞或裂解细胞组合物 的pH。在一些实施方案中，（a)或(b)中至少一个还包括揽拌所述细胞或裂解细胞组合物。在 一些实施方案中，（a)或(b)中至少一个还包括加热所述细胞或裂解细胞组合物。在一些实 施方案中，（a)或(b)中至少一个还包括提升所述细胞或裂解细胞组合物的抑，揽拌所述细 胞或裂解细胞组合物，和加热所述细胞或裂解细胞组合物中的至少一个。
[00化]在一些实施方案中，（a)还包括添加酶。
[00化]在一些实施方案中，（b)还包括添加盐。
[0087]在一些实施方案中，（C)还包括加热。在一些实施方案中，（C)还包括离屯、。
[008引在一些实施方案中，（d)还包括加热。在一些实施方案中，（d)还包括添加酸。在一 些实施方案中，（d)还包括添加碱。在一些实施方案中，（d)还包括添加乳化剂。
[0089] 在一些实施方案中，（e)还包括离屯、所述油。在一些实施方案中，（e)还包括精制所 述油。
[0090] 本发明公开了通过本文所述任一方法获得的微生物油。
[0091] 基于碳链的长度和饱和度特征来对脂肪酸进行分类。微生物油中存在的脂肪酸能 够具有4至28个碳原子，并根据链中存在的碳数目而被称为短链、中链或长链脂肪酸。当碳 原子之间不存在双键时，脂肪酸被称为饱和脂肪酸，而当存在双键时脂肪酸则被称为不饱 和脂肪酸。当只存在一个双键时，不饱和长链脂肪酸是单不饱和的，而当存在多于一个双键 时，不饱和长链脂肪酸是多不饱和的。
[0092] 本文所述的微生物油意指包含一种或多种PUFA且获取自微生物细胞的油。
[0093] 多不饱和脂肪酸(PUFA)是根据距脂肪酸的甲基端的第一个双键的位置来分类的； ω -3 (n-3)脂肪酸在第Ξ个碳上含有第一个双键，而ω -6 (n-6)脂肪酸在第六个碳上含有第 一个双键。例如，二十二碳六締酸（"DHA")是一种链长为22个碳并有6个双键的ω-3长链多 不饱和脂肪酸化C-PUFA)，通常称为"22: 6η-3"。在一个实施方案中，PUFA选自ω -3脂肪酸、 ω-6脂肪酸，及其混合物。在另一个实施方案中，PUFA选自LC-PUFA。在又一个实施方案中， PUFA选自二十二碳六締酸(DHA)、二十碳五締酸化PA)、二十二碳五締酸(DPA)、花生四締酸 (ARA)、丫-亚麻酸(GLA)、二高-丫-亚麻酸(DGLA)、十八碳四締酸(stearidonic acid,SDA)， 及其混合物。在另一个实施方案中，PUFA选自DHA、ARA，及其混合物。在又一个实施方案中， PUFA是DHA。在又一个实施方案中，PUFA是ARA。
[0094] LC-PUFA是含有至少3个双键且具有18个或更多个碳或是20个或更多个碳的链长 的脂肪酸。ω-6系列的LC-PUFA包括但不限于二高-丫-亚麻酸（C20:3n-6)、花生四締酸 (C20:4n-6)r'ARA")、二十二碳四締酸或肾上腺酸(aclrenic acid)(C22:4n-6)，W及二十二 碳五締酸(C22: 5n-6) r'DPA η-护）。ω-3系列的LC-PUFA包括但不限于二十碳Ξ締酸(C20: 化-3)、二十碳四締酸（〔20:411-3)、二十碳五締酸（〔20:511-3)^屯?心'）、二十二碳五締酸 (C22:5n-3)，W及二十二碳六締酸化22:611-3)。1(：斗阳4还包括具有大于22个碳^及4个或 更多个双键的脂肪酸，包括但不限于C24:6(n-3)与C28:8(n-3)。
[00M] PUFA可W为如下形式：游离脂肪酸、盐、脂肪酸醋（例如甲醋或乙醋）、单酷甘油 (MG)、二酷甘油(DAG)、Ξ酷甘油(TAG)，和/或憐脂(PL)。
[0096] 高度不饱合脂肪酸化UFA)是含有4个或更多个不饱和碳-碳键的ω -3和/或ω -6多 不饱和脂肪酸。
[0097] 如本文所用的，"细胞"意指一种含油生物材料，如衍生自油质微生物的生物材料。 由微生物生产的或从微生物细胞获得的油称为"微生物油"。由藻类和/或真菌所生产的油 也分别称为藻类油和/或真菌油。
[009引如本文所用的，"微生物细胞"或"微生物"意指生物体，例如藻类、细菌、真菌、酵 母、原生生物，及其组合，例如单细胞生物。在一些实施方案中，微生物细胞是真核细胞。微 生物细胞包括但不限于，金藻(例如不等鞭毛类(S化amenopiles)界的微生物）、绿藻、娃藻 类、沟鞭藻类(dinoflagellates)(例如沟鞭藻(Dinophyceae)目的微生物，包括隐甲藻属 (Crypthecodinium)的成员，如例如，寇氏隐甲藻(Cryp1:hecodinium cohnii或C. cohnii)); 破囊壶菌目（Thraustochytriales)的微藻类;酵母（子囊菌类或担子菌类），W及毛霉属 (Mucor)和被抱霉属（Mortierel la)的真菌，包括但不限于高山被抱霉（Mortierella alpina)及施穆克被抱霉(Mo;rtierella sect, schmuckeri)，W及腐霉属(P}fthium)，包括但 不限于诡橘腐霉皿insidios皿）。
[0099] 在一个实施方案中，微生物细胞来自被抱霉属、隐甲藻属，或是破囊壶菌目。在又 一个实施方案中，微生物细胞来自寇氏隐甲藻。在又一个实施方案中，微生物细胞选自寇氏 隐甲藻、高山被抱霉、破囊壶菌属(Thraustochyt;rium)、裂殖壶菌属（Schizochy1:;rium)，及 其混合物。
[0100] 在又一个实施方案中，微生物细胞包括但不限于属于W下的微生物:被抱霉属、耳 霉属(Conidiobolus)、腐霉属、疫霉属(Phyto地thora)、青霉属(Penicillium)、枝抱霉属 (Cladospori um)、毛霉属、镶抱属（Fusarium)、曲霉属（Aspergillus)、红酵母属 (Rhodotorula)、虫霉属化ntomophthora)、刺抱囊霉属化chinosporangium)，W及水霉属 (Saprolegnia)。在另一个实施方案中，ARA获取自微生物细胞，所述微生物细胞来自被抱霉 属，包括但不限于长抱被抱霉（Mortierel la elongata)、微小被抱霉（Mortierel la exigua)、喜湿被抱霉（Mortierella hygrophila)、高山被抱霉、施穆克被抱霉 (Mo;rtierella schmuckeri)，W及小被抱霉(Mo;rtierella minutissima)。在另一个实施方 案中，ARA获取自微生物细胞，所述微生物细胞来自：长抱被抱霉IF08570、微小被抱霉 IF08571、喜湿被抱霉 IF05941、高山被抱霉 IF08568、ATCC16266、ATCC32221、ATCC42430、 CBS219.35、CBS224.37、CBS250.53、CBS343.66、CBS527.72、CBS529.72、CBS608.70、和 CBS754.68,及其突变体。在又一个实施方案中，微生物细胞来自高山被抱霉。
[0101]在更进一步的实施方案中，微生物细胞是来自破囊壶菌目（T虹austochytriales) 的微藻，其包括但不限于破囊壶菌属(τ虹austochytrium)(物种包括arudimentale、金黄色 破囊壶菌(aureum)、benthicola、球破囊壶菌(globosum)、金尼破囊壶菌化innei)、动抱破 囊壶菌(111〇1：；[￥11111)、多增殖性破囊壶菌(1]11111：；[1'11(1；[1116]11：日16)、厚皮破囊壶菌(9日油7(161'1]111111)、 层出破囊壶菌(proliferum)、粉红破囊壶菌(roseum)，W及纹带破囊壶菌（S化ia化m));裂 殖壶菌属（Schizochyhium)(物种包括聚生裂殖壶菌（aggregatum)、li皿aceum、红树林裂 殖壶菌(mangrovei)、微小裂殖壶菌(minutum)、八抱裂殖壶菌(octosporum));吾肯氏壶菌 属（Ulkenia)(物种包括变形吾肯氏壶菌（amoeboidea)、克格伦吾肯氏壶菌 (kerguelensis)、小吾肯氏壶菌(minuta)、深海吾肯氏壶菌(pro化nda)、福射吾肯氏壶菌 (radiate)、sailens、沙氏吾肯氏壶菌（sarkariana)、schizochytrops、威瑟氏吾肯氏壶菌 (visurgensis)、约肯氏吾肯氏壶菌（yorkensis));Aurantiacochytrium 属； 〇131〇]1邑1油7化1111]1属、81〇7〇1(1〇〇1171：1111]1属、？曰；1"10]11：1〇117化1111]1属、6〇付7〇油7付1111]1属，及其 组合。在吾肯氏壶菌属化化enia)内所描述的物种会视为裂殖壶菌属的成员。在另一个实施 方案中，微生物细胞来自破囊壶菌目。在又一个实施方案中，微生物细胞来自破囊壶菌属。 在又一个实施方案中，微生物细胞来自裂殖壶菌属。在又一个实施方案中，微生物细胞选自 破囊壶菌属、裂殖壶菌属，或其混合物。
[0102] 在一个实施方案中，该方法包括裂解包含微生物油的微生物细胞W形成裂解细胞 组合物。术语"裂解(lyse)"及"裂解(lysing)"意指使微生物细胞的壁和/或膜破裂的方法。 在一个实施方案中，通过至少一种选自下组的处理来裂解微生物细胞:机械处理、化学处 理、酶处理、物理处理，及其组合。在另一个实施方案中，所述方法包括裂解包含微生物油的 微生物细胞W形成裂解细胞组合物，其中所述裂解选自机械处理、化学处理、酶处理、物理 处理，及其组合。
[0103] 在一些实施方案中，在裂解细胞之前，可对所述细胞进行洗涂和/或己氏消毒 (pasteurize)。在一些实施方案中，洗涂细胞包括使用水溶液(例如水)来去除任何细胞外 的水溶性或水分散性化合物。在一些实施方案中，可W将细胞洗涂一次、二次、Ξ次，或更多 次。在一些实施方案中，对细胞进行己氏消毒包括加热该细胞W使任何不合意的酶(例如任 何可能降解该油或降低PUFA产量/收率的酶)失活。在一些实施方案中，可W洗涂该细胞然 后在裂解该细胞之前对其进行己氏消毒。在一些实施方案中，要裂解的细胞包含于发酵液 中。
[0104] 在一些实施方案中，所述方法包括裂解包含微生物油的未洗涂的微生物细胞W形 成裂解细胞组合物。在一些实施方案中，用例如水首先洗涂含有包含微生物油的微生物细 胞的发酵液，然后裂解该细胞W形成裂解细胞组合物。在其他实施方案中，所述方法包括裂 解发酵培养基中未洗涂的细胞W形成裂解细胞组合物。
[0105] 机械处理包括但不限于均质化、超声、冷压、磨制，及其组合。在一些实施方案中， 所述方法包括通过均质化来裂解细胞。在一些实施方案中，所述方法包括用均质机来裂解 细胞。
[0106] 均质化包括但不限于使用下列设备的方法：弗氏细胞压碎器（French cell press)、超声破碎器、均质机，微流化器(microfluidizer)、球磨机、棒磨机、碱磨机(pebble mill)、珠磨机(bead mill)、高压娠磨漉、立轴式冲击机(vertical shaft impactor)、工业 共混机、高剪切混合机、奖式混合机、polytron均质机、工业均质机(例如Niro Soavi VHP均 质机及APV Rannie和APV Gaulin均质机）、工业高剪切流体处理器化igh shear fluid processors)(例如微流体高剪切流体处理器）、细胞裂解/珠磨均质机(例如Dyno-Mi 11和 Buhler)，及其组合。在一些实施方案中，细胞流经任选加热的均质机。在一些实施方案中， 合适的均质化可W包括1次至3次通过处于高压和/或低压的均质机。
[0107] 在一些实施方案中，均质化过程中的压强为150己(bar)至1，400己；150己至1，200 己；150己至900己；150己至300己；300己至1,400己；300己至1,200己；300己至900己；400己 至800己；500己至700己；或600己。在一些实施方案中，均质化过程中的压强为2，00化si至 20,OOOpsi;2,OOOpsi至18,000psi;2,000psi至16,000psi;2,OOOpsi至14,OOOpsi;2, OOOpsi至12,000psi;2,000psi至10,000psi;2,000psi至8,000psi;2,000psi至6,000psi; 2,000psi 至4,000931;4,000931至20,000931;4,00化31至18,000931;4,000931至16， 000psi;4,000psi 至 14,000psi;4,000psi 至 12,000931;4,00化31至10,000931;4,00化31至 8,000psi;4,000psi至6,000psi;6,000psi至20,000psi;6,000psi至18,000psi;6,000psi 至16,OOOpsi;6,OOOpsi至14,OOOpsi;6,OOOpsi至12,OOOpsi;6,OOOpsi至10,OOOpsi;6, OOOpsi至8,OOOpsi;8,OOOpsi至20,OOOpsi;8,OOOpsi至18,OOOpsi;8,OOOpsi至16,OOOpsi; 8,000psi 至 14,000931;8,00化31至12,000931;8,00化31至10,000931;10,000931至20， OOOpsi;10,OOOpsi至18,OOOpsi;10,OOOpsi至16,OOOpsi;10,OOOpsi至14,OOOpsi;10， OOOpsi至12，000psi;12,OOOpsi至20,OOOpsi;12,OOOpsi至18,OOOpsi;12,OOOpsi至16， OOOpsi;12,OOOpsi至14,OOOpsi;14,OOOpsi至20,OOOpsi;14,OOOpsi至18,OOOpsi;14， OOOpsi 至 16,000931;16,000931至20,000931;16,000931至18,000931;或18,000931至20， OOOpsi ο
[0108] 在一些实施方案中，在均质化前将微生物细胞在高剪切混合机中混合。在一些实 施方案中，所述高剪切混合机W如下范围的转速操作：至少5，0(K)rpm;至少7，50化pm;至少 10 , ΟΟΟ?φπι;至少12,500;rpm;至少15 , ΟΟΟ?φπι; 5 , OOOrpm至15 , ΟΟΟ?φπι; 5 , OOOrpm至12 , 500;rpm; 5, OOOrpm至 10,000;rpm; 5, OOOrpm至7,500rpm; 7,500;rpm至 15,000;rpm; 7,500rpm至 12,500巧m;7,500rpm至10,OOOrpm;10,000巧m至15,OOOrpm;10,OOOrpm至12,500巧m;或12, 500巧m至 15,000巧m。
[0109] 物理处理包括但不限于:加热，其包括但不限于，电阻式(resistive)、对流、蒸汽、 流体浴、太阳能，及其组合。在一些实施方案中，在蓋中加热细胞，所述蓋在其壁之内/之上 具有电阻线圈。在一些实施方案中，在液体浴中加热细胞，所述液体浴具有穿过其间的管 子。
[0110] 化学处理包括但不限于：提高细胞的pH;降低细胞的pH;使细胞接触化学品；及其 组合。
[0111] 在一些实施方案中，通过提高细胞的抑来裂解细胞。在一些实施方案中，通过添加 碱来提高抑。碱包括但不限于氨氧化物（例如LiOH、化0山1(0山〔3((^)2，及其组合）、碳酸盐 类（例如，化2C〇3，K2CO3，MgC〇3，及其组合）、碳酸氨盐类（例如，LiHC〇3，化HC03，K肥〇3，及其组 合），及其组合。碱可W是固体形式(例如晶体，颗粒，与小丸）；液体形式(例如水溶液）；及其 组合。
[0112] 在一些实施方案中，所述碱具有1至12、1至10、1至8、1至6、1至5、2至12、2至10、2至 8、2至6、2至5、3至10、3至6、3至5、4至10、4至8、4至6、5至10、或5至8的pKb。本文所用的术语 "pKb"意指碱的碱缔合常数化b)的负对数。Kb意指碱在水中的离子化的平衡常数，其中： y [ΗΕΠ[ΟΗ ]
[0113] B + 扫游 打技+ΟΗ-;并且碱8的时定义为:馬=-- 〇·
[0114] 在一些实施方案中，W按重量(或体积)计细胞培养液的约2%至约10%，约2%至 约9%，约2%至约8%，约2%至约7 %，约2%至约6%，约3%至约6 %，约4%至约6%，约5% 至约6%，约2%至约5%，约2%至约4%，约2%至约3%，约3%至约5%，约3%至约4%，或约 4%至约5%的量添加碱W提升pH。
[0115] 在一些实施方案中，可W通过氯碱法来提升细胞的抑。在一些实施方案中，对含有 氯化钢及所述细胞的发酵液进行电解，所述电解导致氨氧化钢的形成，其提升细胞的pH。在 一些实施方案中，发酵液除氯化钢外还包含氯化巧或氯化钟，或是包含氯化巧或氯化钟W 代替氯化钢，并且电解导致氨氧化巧或氨氧化钟的形成，由此提升细胞的pH。
[0116] 在一些实施方案中，通过降低细胞的抑来裂解细胞。在一些实施方案中，通过添加 酸来降低抑。酸包括但不限于:硫酸;憐酸;盐酸;氨漠酸;氨舰酸;次氯酸;亚氯酸;氯酸;高 氯酸;氣硫酸;硝酸;氣錬酸;氣棚酸;六氣憐酸;铭酸;棚酸;乙酸;巧樣酸；甲酸;及其组合。
[0117] 酶处理意指使细胞接触一种或多种酶。酶包括但不限于：蛋白酶、纤维素酶、半纤 维素酶、壳多糖酶、果胶酶，及其组合。蛋白酶的非限制性实例包括丝氨酸蛋白酶、苏氨酸蛋 白酶、半脫氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、金属蛋白酶、谷氨酸蛋白酶、Alacase，及其组合。 纤维素酶的非限制性实例包括薦糖酶、麦芽糖酶、乳糖酶、α-葡糖巧酶、β-葡糖巧酶、淀粉 酶、溶菌酶、神经氨酸酶、半乳糖巧酶、α-甘露糖巧酶、葡糖醒酸糖巧酶、透明质酸酶、普鲁兰 酶（Ρ U 1 1 U 1 a η a S e )、葡糖脑巧脂酶、半乳糖基神经酷胺酶、乙酷基半乳糖胺酶 (acet}dgalactosaminidase)、岩藻糖巧酶、己糖胺酶、艾杜糖醒酸糖巧酶（iduronidase)、 麦芽糖酶-葡糖淀粉酶，及其组合。壳多糖酶的非限制性实例包括壳Ξ糖巧酶 (chitotriosidase)。果胶酶(pectinase)的非限制性实例包括果胶裂合酶(pectolyase)、 化ctozyme、聚半乳糖醒酸酶，及其组合。在一些实施方案中，一些酶通过加热来活化。在一 些实施方案中，裂解不包括酶的使用。
[0118] 如本文所用的，"裂解细胞组合物"意指包含一个或多个裂解的细胞(包括细胞碎 片和细胞的其他内容物）、与微生物油(来自所述裂解的细胞)和任选的培养液(其含有液体 (如水）、营养物、和微生物细胞)组合的组合物。在一些实施方案中，微生物细胞包含于含水 的发酵液或培养基中。在一些实施方案中，裂解细胞组合物意指运样的组合物，其包含一个 或多个裂解的细胞、细胞碎片、微生物油、该细胞的天然内容物，W及来自发酵液的水组份。 在一个实施方案中，该裂解细胞组合物包含液体、细胞碎片W及微生物油。在一些实施方案 中，裂解细胞组合物呈水包油乳液形式，其包含连续水相和分散油相的混合物。在一些实施 方案中，分散油相W按重量(或体积)计乳化的裂解细胞组合物的约1%至约60%;约1%至 约50% ;约1 %至约40% ;约1 %至约30% ;约1 %至约20%;约5%至约60% ;约5%至约50% ; 约5%至约40% ;约5 %至约30% ;约5%至约20% ;约10 %至约60% ;约10%至约50% ;约 10%至约40% ;约20%至约60% ;20%至50% ;20%至约40% ;约30%至约60%;约30%至约 50% ;或约40%至约60%的浓度存在。
[0119] 在一些实施方案中，裂解微生物细胞导致自细胞或细胞生物质中的内源性材料形 成乳液，所述内源性材料包括但不限于蛋白质、憐脂、碳水化合物，及其组合。术语"乳液"和 "乳化的"意指两个或更多个不互溶相或层的混合物，其中一个相或层分散于另一个相或层 中。术语"破碎（break)"、"破碎（break-叩）"、"去乳化（demulsify)"、"去乳化作用 (demulsification)"、"去乳化(demulsifying)"，W及"破碎(breaking)"意指分离乳液的 不互溶相或层的方法。例如，在一些实施方案中，本发明的方法使含油乳液从单一相破碎为 两相或更多相。在一些实施方案中，所述两相或更多相包括油相和水相。在一些实施方案 中，本发明的方法使含油乳液破碎为至少Ξ个相。在一些实施方案中，所述Ξ个相选自油 相、水相、和固相。在一些实施方案中，所述相选自油相、乳化相、水相、和固相。
[0120] 在一些实施方案中，去乳化过程中形成的油珠的平均粒度选自：5微米至50微米;5 微米至45微米;5微米至40微米;5微米至35微米;5微米至30微米;5微米至25微米;5微米至 20微米;5微米至15微米；10微米至50微米；10微米至45微米；10微米至40微米；10微米至35 微米;10微米至30微米;10微米至25微米;10微米至20微米;10微米至15微米;15微米至50微 米；15微米至45微米；15微米至40微米；15微米至35微米；15微米至30微米；15微米至25微 米；15微米至20微米;20微米至50微米;20微米至45微米;20微米至40微米;20微米至35微 米;20微米至30微米;20微米至25微米;25微米至50微米;25微米至45微米;25微米至40微 米;25微米至35微米;25微米至30微米;30微米至50微米;30微米至45微米;30微米至40微 米;30微米至35微米;35微米至50微米;35微米至45微米;35微米至40微米;40微米至50微 米;40微米至45微米;和45微米至50微米。在另一个实施方案中，去乳化过程中形成的油珠 的平均粒度选自：至少10微米、至少15微米、至少20微米、至少25微米、至少30微米、至少35 微米、及至少40微米或更大。在另一个实施方案中，去乳化过程中形成的油珠的平均粒度选 自：至少10微米、至少15微米、至少20微米、及至少25微米。在一些实施方案中，平均粒度可 W使用例如Beckman Coulter LS 13 320粒度分析仪(Beckman Coulter,Brea,CA)来测量。 在一些实施方案中，平均粒度可W使用例如Malvern MS2000粒度分析仪（Malvern Instruments Ltd. .Worcestershire,United Kingdom)来测量。
[0121] 在一些实施方案中，所述乳化剂是去污剂。在一些实施方案中，所述乳化剂为表面 活性剂。在一些实施方案中，在裂解之前、过程中，或之后添加乳化剂。在一个实施方案中， 在裂解之后添加乳化剂。在一些实施方案中，将乳化剂添加至裂解细胞组合物。本文中所用 的术语"乳化剂"意指使乳液稳定的物质。乳化剂选自离子性乳化剂、非离子性乳化剂，及其 组合。在一些实施方案中，所述乳化剂是离子性乳化剂。
[0122] 在一些实施方案中，离子性乳化剂选自阴离子乳化剂、阳离子乳化剂，及其组合。 在一些实施方案中，阴离子乳化剂可W是阴离子硫酸盐乳化剂，例如烷基硫酸盐(例如月桂 基硫酸锭、月桂基硫酸钢(SLS)/十二烷基硫酸钢(SDS)，及其组合），烷基酸硫酸盐(例如月 桂醇聚酸（laureth)硫酸钢/月桂基酸硫酸钢、肉豆違醇聚酸硫酸钢，及其组合），及其组合； 阴离子横酸盐乳化剂，例如多库醋盐(docusate)(例如横基班巧酸二辛醋钢、横酸盐氣表面 活性剂(例如全氣辛烧横酸盐和全氣下烧横酸盐）、烷基苯横酸盐，及其组合）；阴离子憐酸 盐乳化剂(例如烷基芳基酸憐酸盐、烷基酸憐酸盐，及其组合）；阴离子簇酸盐乳化剂(例如 烷基簇酸盐（如硬脂酸钢、月桂酷肌氨酸钢（sodium lauro}^ sarcosinate)、簇酸盐氣表面 活性剂(例如全氣壬酸盐、全氣辛酸盐，及其组合）），及其组合）；及其组合。在一些实施方案 中，乳化剂是阴离子乳化剂。在一个实施方案中，阴离子乳化剂选自阴离子硫酸盐乳化剂、 阴离子横酸盐乳化剂、阴离子憐酸盐乳化剂、阴离子簇酸盐乳化剂，及其组合。在另一个实 施方案中，阴离子乳化剂是阴离子硫酸盐乳化剂。在又一个实施方案中，阴离子硫酸盐乳化 剂选自月桂基硫酸锭、十二烷基硫酸钢、月桂醇聚酸硫酸钢、月桂基酸硫酸钢、肉豆違醇聚 酸硫酸钢，及其组合。在又一个实施方案中，阴离子硫酸盐乳化剂是十二烷基硫酸钢。
[0123] 在一些实施方案中，阳离子乳化剂可W是抑依赖性伯胺;抑依赖性仲胺;抑依赖性 叔胺;奥替尼晚二盐酸盐(octenidine dihy化ochloride);永久性带电荷季锭阳离子(例如 烷基Ξ甲基锭盐(例如嫁蜡基Ξ甲基漠化锭(cetyl trimethylammonium bromide)(CTAB)/ 十六烷基Ξ甲基漠化锭化exadecyl trimethyl ammoni皿bromide)、嫁蜡基Ξ甲基氯化锭 (CTAC)，及其组合），嫁蜡基氯化R比晚（py;ridinium)(CPC)、苯扎氯锭（benzalkonium chloride,BAC)、节索氯锭(benzethonium chloride,ΒΖΤ)、5-漠-5-硝基-1,3-二嗯烧、二甲 基双十八烷基氯化锭、双十八烷基二甲基漠化锭(D0DAB)，及其组合）；及其组合。
[0124] 在一些实施方案中，乳化剂的分子量选自500克/摩尔或更低、450克/摩尔或更低、 400克/摩尔或更低、350克/摩尔或更低、和300克/摩尔或更低。在进一步的实施方案中，乳 化剂的分子量选自250克/摩尔至500克/摩尔、250克/摩尔至450克/摩尔、250克/摩尔至400 克/摩尔、250克/摩尔至350克/摩尔、250克/摩尔至300克/摩尔、300克/摩尔至500克/摩尔、 300克/摩尔至450克/摩尔、300克/摩尔至400克/摩尔、300克/摩尔至350克/摩尔、350克/摩 尔至500克/摩尔、350克/摩尔至450克/摩尔、350克/摩尔至400克/摩尔、400克/摩尔至500 克/摩尔、400克/摩尔至450克/摩尔、和450克/摩尔至500克/摩尔。例如，SDS的分子量是288 克/摩尔，而CTAB的分子量是364克/摩尔。在又一个实施方案中，乳化剂的分子量选自250 克/摩尔至450克/摩尔、250克/摩尔至400克/摩尔、250克/摩尔至350克/摩尔，W及250克/ 摩尔至300克/摩尔。
[0125] 在一些实施方案中，乳化剂作为粉末添加。在一些实施方案中，乳化剂在溶液中添 加，所述溶液具有如下量的乳化剂浓度:5 %至50 %、5 %至45 %、5 %至40 %、5%至35%、5% 至 30%、10%至 50%、10%至 45%、10%至 40%、10%至 35%、10%至 30%、15%至 50%、15% 至 45%、15%至40%、15%至35%、15%至30%、20%至50%、20%至45%、20%至40%、20% 至 35%、20%至30%、25%至50%、25%至45%、25%至40%、25%至35%、25%至30%、30% 至 50%、30%至45%、30%至40%、和30%至35%。
[0126] 在一些实施方案中，乳化剂(例如W粉末形式或于溶液中选自如下的量添加： 按重量（或体积）计细胞培养液或含油乳液的0.2%至10%、0.2%至9.5%、0.2%至9 %、 0.2%至8.5%、0.2%至8%、0.2%至7.5%、0.2%至7%、0.2%至6.5%、0.2%至6%、0.2% 至5.5%、0.2%至5%、0.2%至4.5%、0.2%至4%、0.2%至3.5%、0.2%至3%、0.2%至 2.5%、0.2%至2%、0.2%至1.5%、0.2%至1%、0.2%至0.5%、0.5%至10%、0.5%至 9.5%、0.5%至9%、0.5%至8.5%、0.5%至8%、0.5%至7.5%、0.5%至7%、0.5%至 6.5%、0.5%至6%、0.5%至5.5%、0.5%至5%、0.5%至4.5%、0.5%至4%、0.5%至 3.5%、0.5%至3%、0.5%至2.5%、0.5%至2%、0.5%至1.5%、0.5%至1%、1%至10%、 1% 至9.5%、1% 至9%、1% 至8.5%、1% 至8%、1% 至 7.5%、1% 至7 %、1% 至6.5%、1% 至 6%、1%至5.5%、1%至5%、1%至4.5%、1%至4%、1%至3.5%、1%至3%、1%至2.5%、 1 %至2%、1 %至 1.5%、1.5%至 10%、1.5%至 9.5%、1.5% 至 9%、1.5%至 8.5%、1.5% 至 8%、1.5%至 7.5%、1.5%至7 %、1.5%至6.5%、1.5%至6%、1.5%至 5.5%、1.5%至5 %、 1.5%至4.5%、1.5%至4%、1.5%至3.5%、1.5%至3%、1.5%至2.5%、1.5%至2%、2%至 10%、2%至9.5%、2%至9%、2%至8.5%、2%至8%、2%至7.5%、2%至7%、2%至6.5%、 2% 至6 %、2% 至5.5%、2% 至5 %、2% 至4.5%、2% 至4%、2% 至3.5%、2% 至3 %、2% 至 2.5%、2.5% 至 10 %、2.5% 至9.5%、2.5% 至9 %、2.5% 至8.5%、2.5% 至8 %、2.5% 至 7.5%、2.5% 至7 %、2.5% 至6.5%、2.5% 至6 %、2.5% 至5.5%、2.5% 至5 %、2.5% 至 4.5%、2.5%至4%、2.5%至3.5%、2.5%至3%、3%至10%、3%至9.5%、3%至9%、3%至 8.5%、3%至8%、3%至7.5%、3%至7%、3%至6.5%、3%至6%、3%至5.5%、3%至5%、 3%至4.5%、3%至4%、和3%至3.5%。在另一个实施方案中，乳化剂(例如W粉末形式或于 溶液中选自如下的量添加：按重量(或体积)计选自细胞培养液或含油乳液的0.2%至 5%、0.5 %至5%、1 %至5%、1.5%至5%、2% 至5 %、2.5% 至5 %、和3 %至5%。在又一个实 施方案中，乳化剂W如下的量添加:按重量计含油乳液的0.2%至10%。
[0127]在一些实施方案中，乳化剂降低发酵液或裂解细胞组合物的界面张力（即表面张 力）。如本文所使用的，术语"界面张力"或"表面张力"意指作用于二相之间的界面处一米长 的假想线（imagina巧line one meter in length)上的力。在一些实施方案中，由乳化剂 所形成的乳液的界面张力比由内源性材料所形成的乳液更低。在一些实施方案中，界面张 力可W按达因/厘米(dynes/cm)来测量。
[01%]在一些实施方案中，乳化剂增加发酵液或裂解细胞组合物的ζ电位（zeta potential)绝对值（即提高正C电位或是降低负C电位）。在一些实施方案中，添加阴离子乳 化剂能导致细胞培养液或含油乳液的ζ电位下移（即降低正ζ电位或是提高负ζ电位）。在一 些实施方案中，添加阳离子乳化剂能导致细胞培养液或含油乳液的ζ电位上移（即提高正ζ 电位或是降低负ζ电位）。如本文所用的，术语"ζ电位"意指乳液中粒子之间的电动电位。在 一些实施方案中，ζ电位可W按mV来测量。在一些实施方案中，由乳化剂所形成的乳液的C电 位的绝对值比由内源性材料形成的乳液更高。
[0129] 在一些实施方案中，添加离子性乳化剂产生水包油乳液。在一些实施方案中，水包 油乳液包括但不限于，油、水、W及离子性乳化剂。
[0130] 在一些实施方案中，所述方法还包括提升含油乳液的抑。在一些实施方案中，通过 向含油乳液添加碱来提升抑。可用于将含油乳液去乳化的碱与上文所述的那些相同。在一 些实施方案中，pH选自约7或W上；约8或W上;约9或W上;约10或W上；约11或W上;和约12 或W上。在其他实施方案中，pH选自如下的抑:7至13;7至12;7至11;7至10;7至9;8至13;8至 12;8至11;8至10;8至9;9至12;9至11;9至10;10至12;和10至11。
[0131] 在一些实施方案中，所述方法还包括向裂解细胞组合物添加盐。术语"盐"意指离 子性化合物，其通过用金属(例如，碱金属、碱±金属，及过渡金属)或带正电荷的化合物(例 如NH4+)代替来自酸的氨离子而形成。在一些实施方案中，盐类可W是碱金属盐、碱±金属 盐、硫酸盐，或其组合。盐中存在的带负电荷的离子的种类包括但不限于：面化物、硫酸根、 硫酸氨根、亚硫酸根，憐酸根、憐酸氨根、憐酸二氨根、碳酸根、碳酸氨根，及其组合。在一些 实施方案中，盐选自：氯化钢、硫酸钢、碳酸钢、氯化巧、硫酸钟、硫酸儀、谷氨酸一钢、硫酸 锭、氯化钟、氯化铁、硫酸铁、硫酸侣、乙酸锭，及其组合。在一些实施方案中，盐不包括NaOH。 盐可W作为固体(例如W结晶、无定形的、团状的(pelletized),和/或颗粒形式)和/或含例 如水的溶液(例如稀释溶液、饱和溶液，或过饱和溶液)添加。
[0132] 在一些实施方案中，W如下量添加盐:5g/l至25g/l、5g/l至lOg/1、lOg/1至15g/l、 15g/l 至20g/l、20g/l至25g/l、或lOg/1至20g/l。
[0133] 在其他实施方案中，盐W如下量添加至裂解细胞组合物:按重量(或体积)计是裂 解细胞组合物的20 %或更少，15 %或更少，10 %或更少，7.5 %或更少，5 %或更少，或2 %或 更少。在一些实施方案中，盐W如下量添加至该裂解细胞组合物:按重量(或体积)计细胞培 养液的约0.05 %至约20 %、约0.1 %至约20 %、约0.1 %至约15 %、约0.1 %至约10 %、约 0.5%至约20%、约0.5%至约15%、约0.5%至约10%、约0.5%至约5%、约0.5 %至约4%、 约0.5%至约3%、约0.5%至约2.5%、约0.5%至约2%、约0.5%至约1.5%、约0.5%至约 1 %、约1 %至约20%、约1 %至约15%、约1 %至约10%、约1 %至约5%、约1 %至约4%、1 %至 约3%、约1 %至约2.5%、约1 %至约2%、约1 %至约1.5%、约1.5%至约5%、约1.5%至约 4%、约1.5%至约3%、约1.5%至约2.5%、约1.5%至约2%、约2%至20%、约2%至约15%、 约2%至约10%、约2%至约5%、约2%至约4%、约2%至约3%、约2%至约2.5%、约2.5%至 约5%、约2.5%至约4%、约2.5%至约3%、约3%至约5%、约3%至约4%、约4%至约5%、约 5%至约20%、约5 %至约15%、约5%至约10 %、约10%至约20%、约10%至约15 %、或约 15 %至约20 %。例如，当细胞培养液重量为1，000kg时，W按重量(或体积)计0.5 %至20 %的 量添加的盐需要添加化g至200kg的盐。在一些实施方案中，盐W如下量添加至该裂解细胞 组合物:按重量(或体积)计所述细胞培养液的约0.05%至约20%、按重量(或体积)约0.1% 至约20 %、按重量(或体积)约0.5 %至约15 %，或按重量(或体积)约2 %至约10 %。
[0134] 在一些实施方案中，所述方法包括将所述细胞或裂解细胞组合物加热到至少10 °C、至少20 °C、至少25 °C、至少30 °C、至少35 °C、至少40°C、至少45 °C、至少50°C、至少55 °C、至 少60 °C、至少65°C、至少70 °C、至少75°C、至少80 °C、至少85°C、至少90 °C、至少95°C、或至少 100°C。在其他实施方案中，所述方法包括将所述裂解细胞组合物和/或细胞加热到约10°C 至约 100°C、约 10°C 至约 90°C、约 10°C 至约 80°C、约 10°C 至约 70°C、约 20°C 至约 100°C、约 20°C 至约90°C、约20°C至约80 °C、约20°C 至约70°C、约30 °C至约 100°C、约30°C至约90 °C、约30°C 至约80°C、约30°C至约70 °C、约40°C 至约 100°C、约40°C 至约90°C、约40°C至约80 °C、约50°C 至约 100 °C、约 50 °C 至约 90 °C、约 50 °C 至约 80 °C、约 50 °C 至约 70 °C、约 60 °C 至约 100 °C、约 60 °C 至约 90 °C、约 60 °C 至约 80 °C、约 70 °C 至约 100 °C、约 70 °C 至约 90 °C、约 80 °C 至约 100 °C、约 80 °C 至约90°C、或约90°C至约100°C。在进一步的实施方案中，所述方法包括将所述细胞或裂解 细胞组合物加热到约70 °C至约100 °C，约70 °C至约90 °C，约80 °C至约100°C，约80 °C至约90 °C，或约90°C至约100°C。在更进一步的实施方案中，所述方法包括将所述细胞或裂解细胞 组合物加热到至少至少70°C、至少75 °C、至少80 °C、至少85°C、至少90°C、至少95°C、或至少 10(TC。
[0135] 在一些实施方案中，细胞和/或裂解细胞组合物可W在密闭系统中或具有蒸发器 的系统中进行加热。在一些实施方案中，细胞和/或裂解细胞组合物可W在具有蒸发器的系 统中进行加热，从而通过蒸发来去除该细胞和/或该裂解细胞组合物中存在的一部分水。在 一些实施方案中，方法包括在具有蒸发器的系统中加热细胞和/或裂解细胞组合物，W去除 按重量(或体积)计多至1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%或50%的该 细胞和/或裂解细胞组合物中存在的水。在一些实施方案中，方法包括在具有蒸发器的系统 中加热细胞和/或裂解细胞组合物W去除按重量(或体积)计1%至50%、1%至45%、1%至 40%、1%至35%、1%至30%、1%至25%、1%至20%、1%至15%、1%至10%、1%至5%、5% 至 50%、5%至45%、5% 至40%、5% 至 35%、5% 至 30%、5% 至 25%、5% 至 20%、5% 至 15%、 5%至10%、10% 至 50%、10%至 45 %、10% 至 40%、10%至 35 %、10% 至 30%、10%至 25%、 10%至 20%、10%至 15%、15%至 50%、15%至 45%、15%至 40%、15%至 35%、15%至 30%、 15% 至 25%、15%至20%、20%至50%、20%至45%、20%至40%、20%至35%、20%至30%、 20% 至 25%、25%至50%、25%至45%、25%至40%、25%至35%、25%至30%、30%至50%、 30% 至 45%、30%至40%、30%至35%、35%至50%、35%至45%、35%至40%、40%至50%、 40%至45%、或45%至50%的水。
[0136] 术语"揽拌(agisting)"和"揽拌(ag;Uationr意指通过施加力来影响细胞和/或 裂解细胞组合物中的运动的方法。在一些实施方案中，所述方法包括通过揽动、混合、共混、 振荡、振动，或其组合来揽拌细胞和/或裂解细胞组合物。
[0137] 在一些实施方案中，揽拌器是分散型揽拌器，其将碱和/或盐分散于所述细胞和/ 或裂解细胞组成物之中。在一些实施方案中，揽拌器具有加热板。在一些实施方案中，揽拌 器具有供揽动用的外罩。在一些实施方案中，揽拌器具有一个或多个叶轮。如本文使用的， "叶轮"意指运样的装置，其经安排W在旋转时使细胞组合物或裂解细胞组合物运动。适合 供本发明使用的叶轮包括直叶片叶轮、拉什顿叶片叶轮(Rushton blade impeller)、轴向 流式叶轮、径向流式叶轮、凹面叶片盘叶轮、高效叶轮、螺旋奖(propellers)、奖(paddles)、 满轮（turbines)，及其组合。
[0138] 在一些实施方案中，本发明的方法包括W0.1hp/l，000gal至10hp/l，000gal、 0.化p/1，OOOgal 至化p/1，OOOgal、lhp/1，OOOgal 至化p/1，OOOgal、或化p/1，OOOgal 至化p/ 1，000gal的组合物来揽拌细胞和/或裂解细胞组合物。在一些实施方案中，所述方法包括W O.lhp/lOOOgal至lOhp/lOOOgal的组合物来揽拌细胞和/或裂解细胞组合物。
[0139] 在一些实施方案中，本发明包括W如下转速进行揽拌：1化pm或更低、2化pm或更 低、50巧m或更低、100巧m或更低、150巧m或更低、200巧m或更低、250巧m或更低、300rpm或更 低、350rpm 或更低、400巧m 或更低、10巧m 至 400巧m、lOrpm 至 350rpm、lOrpm 至 300rpm、lOrpm 至250巧m、10巧m至200巧m、10巧m至150巧m、10rpm至100rpm、10rpm至50rpm、10rpm至20rpm、 20rpm至400巧m、20巧m至350巧m、20巧m至300巧m、20巧m至250rpm、20rpm至200rpm、20rpm至 150 巧m、20 巧m 至 lOOrpm、20 巧m 至 50rpm、50rpm 至 400巧m、50rpm 至 350巧m、50 巧m 至 300rpm、 50rpm 至 250rpm、50 巧m 至 200巧m、50 巧m至 150 巧m、50 巧m至 100 巧m、1 OOrpm 至400rpm、100 巧m 至350巧m、100巧m至300巧m、lOOrpm至250rpm、100巧m至200巧m、100巧m至150rpm、150rpm至 400;rpm、150rpm 至 350rpm、150rpm 至 300rpm、150;rpm 至 250rpm、150;rpm 至 200rpm、200;rpm 至 400;rpm、200rpm 至 350rpm、200rpm 至 300rpm、200;rpm 至 250rpm、250;rpm 至 400rpm、250;rpm 至 350巧m、250;rpm至 300巧m、300rpm 至400巧m、300;rpm至 350巧m、或 350rpm 至400巧m。在一些实 施方案中，揽拌W350巧m或更低的转速进行。
[0140] 在一些实施方案中，所述方法包括用揽拌器来揽拌细胞和/或裂解细胞组合物，所 述揽拌器具有90英尺/分钟至1，200英尺/分钟、200英尺/分钟至1，000英尺/分钟、300英尺/ 分钟至800英尺/分钟、400英尺/分钟至700英尺/分钟、或500英尺/分钟至600英尺/分钟的 叶轮尖端速率。在一些实施方案中，所述方法包括用揽拌器来揽拌，所述揽拌器具有200英 尺/分钟至1000英尺/分钟的叶轮尖端速率。
[0141] 在一些实施方案中，方法包括使用揽拌器来揽拌细胞和/或裂解细胞组合物，所述 揽拌器具有如下叶轮尖端速率:5厘米/秒至900厘米/秒、5厘米/秒至750厘米/秒、5厘米/秒 至500厘米/秒、5厘米/秒至350厘米/秒、5厘米/秒至300厘米/秒、5厘米/秒至250厘米/秒、5 厘米/秒至200厘米/秒、5厘米/秒至150厘米/秒、5厘米/秒至100厘米/秒、5厘米/秒至50厘 米/秒、5厘米/秒至25厘米/秒、25厘米/秒至900厘米/秒、25厘米/秒至750厘米/秒、25厘米/ 秒至500厘米/秒、25厘米/秒至350厘米/秒、25厘米/秒至300厘米/秒、25厘米/秒至250厘 米/秒、25厘米/秒至200厘米/秒、25厘米/秒至150厘米/秒、25厘米/秒至100厘米/秒、25厘 米/秒至50厘米/秒、50厘米/秒至900厘米/秒、50厘米/秒至750厘米/秒、50厘米/秒至500厘 米/秒、50厘米/秒至350厘米/秒、50厘米/秒至300厘米/秒、50厘米/秒至250厘米/秒、50厘 米/秒至200厘米/秒、50厘米/秒至150厘米/秒、50厘米/秒至100厘米/秒、100厘米/秒至900 厘米/秒、100厘米/秒至750厘米/秒、100厘米/秒至500厘米/秒、100厘米/秒至350厘米/秒、 100厘米/秒至300厘米/秒、100厘米/秒至250厘米/秒、100厘米/秒至200厘米/秒、100厘米/ 秒至150厘米/秒、150厘米/秒至900厘米/秒、150厘米/秒至750厘米/秒、150厘米/秒至500 厘米/秒、150厘米/秒至350厘米/秒、150厘米/秒至300厘米/秒、150厘米/秒至250厘米/秒、 150厘米/秒至200厘米/秒、200厘米/秒至900厘米/秒、200厘米/秒至750厘米/秒、200厘米/ 秒至500厘米/秒、200厘米/秒至350厘米/秒、200厘米/秒至300厘米/秒、200厘米/秒至250 厘米/秒、250厘米/秒至900厘米/秒、250厘米/秒至750厘米/秒、250厘米/秒至500厘米/秒、 250厘米/秒至350厘米/秒、250厘米/秒至300厘米/秒、300厘米/秒至900厘米/秒、300厘米/ 秒至750厘米/秒、300厘米/秒至500厘米/秒、300厘米/秒至350厘米/秒、350厘米/秒至900 厘米/秒、350厘米/秒至850厘米/秒、350厘米/秒至800厘米/秒、350厘米/秒至750厘米/秒、 350厘米/秒至700厘米/秒、350厘米/秒至650厘米/秒、350厘米/秒至600厘米/秒、350厘米/ 秒至550厘米/秒、350厘米/秒至500厘米/秒、350厘米/秒至450厘米/秒、350厘米/秒至400 厘米/秒、400厘米/秒至900厘米/秒、400厘米/秒至850厘米/秒、400厘米/秒至800厘米/秒、 400厘米/秒至750厘米/秒、400厘米/秒至700厘米/秒、400厘米/秒至650厘米/秒、400厘米/ 秒至600厘米/秒、400厘米/秒至550厘米/秒、400厘米/秒至500厘米/秒、400厘米/秒至450 厘米/秒、450厘米/秒至900厘米/秒、450厘米/秒至850厘米/秒、450厘米/秒至800厘米/秒、 450厘米/秒至750厘米/秒、450厘米/秒至700厘米/秒、450厘米/秒至650厘米/秒、450厘米/ 秒至600厘米/秒、450厘米/秒至550厘米/秒、450厘米/秒至500厘米/秒、500厘米/秒至900 厘米/秒、500厘米/秒至850厘米/秒、500厘米/秒至800厘米/秒、500厘米/秒至750厘米/秒、 500厘米/秒至700厘米/秒、500厘米/秒至650厘米/秒、500厘米/秒至600厘米/秒、500厘米/ 秒至550厘米/秒、550厘米/秒至900厘米/秒、550厘米/秒至850厘米/秒、550厘米/秒至800 厘米/秒、550厘米/秒至750厘米/秒、550厘米/秒至700厘米/秒、550厘米/秒至650厘米/秒、 550厘米/秒至600厘米/秒、600厘米/秒至900厘米/秒、600厘米/秒至850厘米/秒、600厘米/ 秒至800厘米/秒、600厘米/秒至750厘米/秒、600厘米/秒至700厘米/秒、600厘米/秒至650 厘米/秒、650厘米/秒至900厘米/秒、650厘米/秒至850厘米/秒、650厘米/秒至800厘米/秒、 650厘米/秒至750厘米/秒、650厘米/秒至700厘米/秒、700厘米/秒至900厘米/秒、700厘米/ 秒至850厘米/秒、700厘米/秒至800厘米/秒、700厘米/秒至750厘米/秒、750厘米/秒至900 厘米/秒、750厘米/秒至850厘米/秒、750厘米/秒至800厘米/秒、800厘米/秒至900厘米/秒、 800厘米/秒至850厘米/秒、或850厘米/秒至900厘米/秒。术语"叶轮尖端速率"，意指当叶轮 环绕其中屯、轴旋转时，其最外部分的速率。
[0142] 在一些实施方案中，揽拌（W及任选的如本文所述的额外步骤)是在含有叶轮的容 器中进行的，其中所述叶轮直径与该容器体积之比是0.1至0.5、0.1至0.4、0.2至0.5、0.2至 0.4、0.3至0.5、或0.3至0.4。
[0143] 在一些实施方案中，揽拌及任选的如本文所述的额外步骤)是在含有叶轮的容 器中进行的，其中所述叶轮直径对该容器内径之比是至少0.25、至少0.34、至少0.65、0.25 至 0.65、0.25至0.33、0.3至0.6、0.3至0.5、0.3至0.4、0.：34至0.65、0.34至0.6、0.：34至0.55、 0.37至0.55、0.4至0.65、0.4至0.6、0.4至0.5、或0.42至0.55。
[0144] 在一些实施方案中，揽拌包括将细胞和/或裂解细胞组合物混合从而使该细胞和/ 或裂解细胞组合物处于由如下雷诺数(Reynolds)描述的流动条件下：10至10,000、1，000至 10,000、1，500至10,000、或2,000至10,000。在一些实施方案中，揽拌过程中裂解的细胞乳 液具有2,000或更多、3,000或更多、或5,000或更多、或2,000至10,000、3,000至10,000、或 5,000至10,000的雷诺数。
[0145] 在一些实施方案中，揽拌器皿可W具有2个叶轮。在一些实施方案中，所述叶轮是 拉什顿叶片叶轮。在一些实施方案中，所述叶轮是W至少与最小的叶轮直径相等的距离彼 此分离。在一些实施方案中，所述叶轮尖端至尖端为30英寸至40英寸、33英寸至37英寸、33 英寸、34英寸、35英寸、36英寸或37英寸。在一些实施方案中，所述揽拌器皿具有至少10,000 升、至少20，000升、至少30，000升、至少40，000升或至少50，000升的容积。在一些实施方案 中，所述揽拌器皿具有90英寸至110英寸、95英寸至105英寸、98英寸、99英寸、100英寸、101 英寸、或102英寸的内径。在一些实施方案中，第一叶轮位于距揽拌器皿底部15英寸至20英 寸、16英寸至19英寸、或17英寸至18英寸，而第二叶轮位于第一个叶轮之上60英寸至80英 寸、65英寸至75英寸、68英寸、69英寸、70英寸、71英寸、72英寸、73英寸、74英寸、或75英寸。 在一些实施方案中，W至少50巧m、至少60巧m、或至少70巧m揽拌裂解细胞组合物。在一些实 施方案中，W50巧m至70巧m、50巧m至60巧m、或60巧m至70巧m揽拌裂解细胞组合物。
[0146] 在一些实施方案中，所述方法还包括揽拌所述细胞或裂解细胞组合物。
[0147] 在一些实施方案中，所述方法包括将含油乳液去乳化然后从所述乳液分离所述 油。
[0148] 在可供选择的实施方案中，所述裂解细胞组合物的洗涂次数可W减少1次、2次、3 次或更多次。在一些实施方案中，洗涂不超过1次、2次，或3次。
[0149] 在一些实施方案中，所述方法可W在单一器皿中进行。在一些实施方案中，所述单 一器皿包括发酵器皿。在一些实施方案中，所述发酵器皿可具有20,000升、至少50,000升、 至少100,000升、至少120,000升、至少150,000升、至少200,000升、或至少220,000升的容 积。在一些实施方案中，所述发酵器皿可具有20,000升至220,000升、20,000升至100,000 升、20,000升至 50,000升、50,000 升至 220,000升、50,000 升至 150,000升、50,000 升至 100， 000升、100,000 升至 220,000 升、100,000 升至 150,000 升、100,000升至 120,000升、150,000 升至220，000升、150，000升至200，000升、或200，000升至220，000升的容积。
[0150] 在一些实施方案中，可将在器皿中形成的一定量的细胞和/或裂解细胞组合物转 移至一个或多个揽拌器皿中。在一些实施方案中，所述揽拌器皿可具有至少20,000升、至少 30，000升、至少40，000升或至少50，000升的容积。在一些实施方案中，所述揽拌器皿可具有 20,000升至 50,000 升、20,000 升至 40,000升、20,000升至 30,000 升、30,000升至 50,000升、 30，000升至40，000升或40，000升至50，000升的容积。
[0151] -般而言，本文所述的方法不利用有机溶剂来从微生物细胞获得、分离，或者W其 他方式回收微生物油。在一些实施方案中，从微生物细胞获得微生物油时不使用有机溶剂。 在另一个实施方案中，在本文所述方法的过程中，不将有机溶剂W足W获得微生物油的量 或浓度的添加至细胞、裂解细胞组合物，和/或油。有机溶剂包括极性溶剂、非极性溶剂、水 混溶溶剂、水不混溶溶剂，及其组合。
[0152] 在一些实施方案中，所述方法还包括从裂解细胞组合物分离含油乳液。在一些实 施方案中，所述方法还包括通过加热裂解细胞组合物W从所述裂解细胞组合物分离含油乳 液。在一些实施方案中，通过离屯、裂解细胞组合物W从去乳化的裂解细胞组合物分离油。在 一些实施方案中，所述分离包括于l〇°C至100°C的溫度离屯、。在一些实施方案中，通过如下 从裂解细胞组合物中分离含油乳液:首先提升pH(例如通过添加上文所述的碱)然后将所述 含油乳液和裂解细胞组合物离屯、W获得含油乳液。
[0153] 在一些实施方案中，所述方法包括通过在至少10°C、至少20°C、至少25°C、至少30 °C、至少35 °C、至少40 °C、至少45 °C、至少50 °C、至少55°C、至少60 °C、至少65°C、至少70 °C、至 少75°C、至少80°C、至少85°C、至少90°C、至少95°C、或至少100°C的溫度离屯、含油乳液和裂 解细胞组合物而从裂解细胞组合物分离含油乳液。在一些实施方案中，所述方法包括通过 在 10 °C 至 100 °C、10 °C 至90 °C、10 °C 至80 °C、20 °C 至 100 °C、20 °C 至90 °C、20 °C 至80 °C、25 °C 至 100°(：、25°(：至90°(：、25°(：至80°(：、25°(：至75°(：、30°(：至100°(：、30°(：至90°(：、30°(：至80°(：、401： 至 100°C、40°C 至 90°C、40°C 至 80°C、50°C 至 100°C、50°C 至 90°C、50°C 至 80°C、50°C 至 70°C、60 °(：至100°(：、60°(：至90°(：、60°(：至80°(：、60°(：至70°(：、70°(：至100°(：、70°(：至90°(：、70°(：至80°(：、 80°C至100°C、80°C至90°C、或90°C至100°C的溫度离屯、含油乳液和裂解细胞组合物而从裂 解细胞组合物分离含油乳液。
[0154] 在一些实施方案中，离屯、是千克每分钟（kg/min)至500kg/分钟、1kg/分钟至 400kg/分钟、1kg/分钟至300kg/分钟、1kg/分钟至200kg/分钟、1kg/分钟至100kg/分钟、 1kg/分钟至75kg/分钟、1kg/分钟至50kg/分钟、1kg/分钟至40kg/分钟、1kg/分钟至30kg/分 钟、1kg/分钟至25kg/分钟、1kg/分钟至10kg/分钟、10kg/分钟至500kg/分钟、10kg/分钟至 400kg/分钟、10kg/分钟至300kg/分钟、10kg/分钟至200kg/分钟、10kg/分钟至100kg/分钟、 10kg/分钟至75kg/分钟、10kg/分钟至50kg/分钟、10kg/分钟至40kg/分钟、10kg/分钟至 30kg/分钟、20kg/分钟至500kg/分钟、20kg/分钟至400kg/分钟、20kg/分钟至300kg/分钟、 20kg/分钟至200kg/分钟、20kg/分钟至100kg/分钟、20kg/分钟至75kg/分钟、20kg/分钟至 50kg/分钟、20kg/分钟至40kg/分钟、2化g/分钟至500kg/分钟、2化g/分钟至400kg/分钟、 2化g/分钟至300kg/分钟、2化g/分钟至200kg/分钟、2化g/分钟至100kg/分钟、2化g/分钟至 7化g/分钟、2化g/分钟至50kg/分钟、30kg/分钟至60kg/分钟、30kg/分钟至50kg/分钟、 30kg/分钟至40kg/分钟、50kg/分钟至500kg/分钟、100kg/分钟至500kg/分钟、或200kg/分 钟至500kg/分钟的(裂解细胞组合物进入离屯、机的)进料速率进行的。
[01巧]在一些实施方案中，所述方法包括Wl，000g至25,000旨、1，000旨至20,000旨、1，000邑 至10,000邑、2,000邑至25,000邑、2,000邑至20,000邑、2,000邑至15,000邑、3,000邑至25,000邑、3， OOOg 至 20,000邑、5,000邑至25,000邑、5,000邑至20,000邑、5,000邑至15,000邑、5,000邑至10， 000邑、5,000旨至8,000旨、10,000旨至25,000旨、15,000旨至25,000旨、或至少1，000旨、至少2,000、 g、至少4,000g、至少 5,000g、至少 7,000g、至少8,000g、至少 10,000g、至少 15,000g、至少 20， OOOg、或至少25，000g的离屯、力对裂解细胞组合物进行离屯、。如本文所用的，V意指标准重 力或约9.8m/s2。在一些实施方案中，所述方法包括W4,000rpm至14,000巧111、4,000巧1]1至 10,000巧111、6,000巧1]1至14,000巧111、6,000巧1]1至12,000巧111、8,000至14,000巧111、8,000巧1]1至 12,000巧111、或8,000巧111至10,000巧111离屯、去乳化的裂解细胞组合物。
[0156] 在一些实施方案中，可W通过例如倾析、撇除（skimming)、真空处理、累送、吸取 (sucking off )、抽取（化awing off )、虹吸（siphoning)，或W其他方式从分离的组合物表 面回收微生物油来回收所述微生物油。
[0157] 在一些实施方案中，所述方法包括将回收的油进行干燥W从该油去除水。在一些 实施方案中，干燥该油可包括但不限于加热该油W蒸发水。在一些实施方案中，干燥后所述 油具有按油的重量（或体积）百分比计为低于3%、低于2.5%、低于2%、低于1.5%、低于 1 %、低于0.5%、低于0.1 %、或0%的水含量。在一些实施方案中，干燥后所述油具有按油的 重量(或体积）百分比计为0%至3%、0%至2.5%、0%至2%、0%至1.5%、0%至！％、0%至 0.5%、0.1%至3%、0.1%至2.5%、0.1%至2%、0.1%至1.5%、0.1%至1%、0.1%至 0.5%、0.5%至3%、0.5% 至2.5%、0.5%至2%、0.5%至1.5%、0.5% 至1%、1%至3%、1% 至2.5%、1 %至2%、1 %至1.5%、1.5%至3%、1.5%至2.5%、1.5%至2%、2%至3%、2%至 2.5%、或2.5%至3%的水含量。
[0158] 本发明公开了可W通过本文所述任一种方法从微生物细胞获得的微生物油。在一 些实施方案中，所述油包含按重量(或体积)计至少30%的花生四締酸。在一些实施方案中， 所述油包含按重量(或体积)计至少30%的二十二碳六締酸。
[0159] 茵香胺值(AV)根据A0CS官方方法Cd 18-90来确定。在一个实施方案中，本文所述 的油具有低于约50;低于约40;低于约30;低于约20;低于约15;或低于约10的AV。在一些实 施方案中，所述油具有低于约50的AV。术语茵香胺值意指次级反应产物(例如油的氧化过程 中产生的醒和酬）的测量值。
[0160] 过氧化物值(PV)根据A0CS官方方法Cd 8-53来确定。在一个实施方案中，本文所述 的油具有低于约20meq/kg;低于约lOmeq/kg;或低于约5meq/kg的PV。在一些实施方案中，所 述油具有低于5meq/kg的PV。术语过氧化物值意指初级反应产物(例如油的氧化过程中产生 的过氧化物和氨过氧化物)的测量值。如本文所用，过氧化物值Wmeq/kg测量。
[0161] 在一些实施方案中，所述油具有lOOppm或更低、95ppm或更低、90ppm或更低、85ppm 或更低、SOppm或更低、75ppm或更低、70ppm或更低、65ppm或更低、60ppm或更低、55ppm或更 低、50ppm或更低、45ppm或更低、40ppm或更低、35ppm或更低、30ppm或更低、25ppm或更低、 20ppm或更低、15ppm或更低、lOppm或更低、9ppm或更低、8ppm或更低、7ppm或更低、6ppm或更 低、5ppm或更低、4ppm或更低、化pm或更低、化pm或更低、或Ippm或更低的憐含量。在一些实 施方案中，所述油具有约8ppm或更低的憐含量。
[0162] 在一些实施方案中，所述油包含一种或多种PUFA。在一些实施方案中，所述油包含 至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少 50 %、至少60 %、至少70 %或至少80 %的PUFA(按PUFA重量计）。在一些实施方案中，所述油 包含至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、 至少50 %、至少60 %、至少70 %或至少80 %的DHA(按DHA重量计），和/或至少10 %、至少 15%、或至少20%的0?4 11-6(按0?4 11-6重量计），和/或至少10%、至少15%、或至少20%的 EPA(按EPA重量计），和/或至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、 至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、或至 少80 %的ARA(按ARA重量计）。在一些实施方案中，所述油包含低于50 %、低于40 %、低于 30%、低于20%、低于15%、低于10%、或低于5%的EPA(按EPA重量计）。在一些实施方案中， 所述油包含低于50 %、低于40 %、低于30 %、低于20 %、低于15 %、低于10 %、或低于5 %的 DHA(按DHA重量计）。在一些实施方案中，油包含按重量(或体积)计低于10%、低于5%、低于 2%、低于1 %、或低于0.5%的固醇类。
[0163] 在一些实施方案中，油包含按重量(或体积)计至少50%、至少60%、至少70%、至 少 80%、至少90%、至少95%、或50%至95%、50%至90%、50%至85%、50%至80%、50%至 75%、60%至95%、60%至90%、60%至85%、70%至95%、70%至90%、70%至85%、75%至 95%、75%至90%、或75%至85%的甘油Ξ醋。
[0164] 在一些实施方案中，所述甘油Ξ醋包含按重量(或体积)计至少10%、至少20%、至 少30 %、至少35%、至少40 %、至少50%、至少60 %、至少70%或至少80 %的DHA。在一些实施 方案中，所述甘油Ξ醋包含按重量(或体积)计至少10%、至少20%、至少30%、至少35%、至 少40 %、至少45 %、至少50 %、至少55 %、至少60 %、至少65 %、至少70 %、至少75 %、或至少 80%的ARA。在一些实施方案中，所述甘油Ξ醋包含按重量(或体积)计至少50%、至少40%、 至少30%、至少20%、至少15%、至少10%、或至少5%的EPA。
[0165] 在一些实施方案中，通过本文所述方法的任一种获得和/或回收的微生物油是粗 制油。在另一个实施方案中，本文所述的油是精制油。"粗制油"是从微生物细胞获得的、未 经进一步加工的油。"精制油"是通过用精制、漂白，和/或脱臭的标准流程处理粗制油所获 得的油。参见例如，美国专利No. 5，130，242。在一些实施方案中，精制包括但不限于:碱精制 (base ref ining)、脱胶、酸处理、碱处理、冷却、加热、漂白、脱臭、脱酸，及其组合。
[0166] 在一些实施方案中，所述方法包括浓缩包含微生物细胞的发酵液。在一些实施方 案中，该方法包括浓缩裂解细胞组合物。如本文使用的，"浓缩"意指从组合物去除水。浓缩 可W包括但不限于，蒸发、化学干燥、离屯、等等，及其组合。在一些实施方案中，将细胞组合 物或裂解细胞组合物浓缩W提供按重量(或体积)计所述组合物的至少4%，至少5%，至少 10%，至少15%，至少20%，至少25%，或至少30%的油浓度。在一些实施方案中，将细胞组 合物或裂解细胞组合物浓缩W提供按重量（或体积）计所述组合物的4%至40%、4%至 30%、4%至20%、4%至15%、5%至40%、5%至30%、5%至20%、10%至40%、10%至30%、 10 % 至20 %、15 % 至 40 %、15 % 至 30 %、20 % 至 40 %、20 % 至30 %、25 % 至 40 %、或30 % 至 40%的油浓度。
[0167] 供本发明使用的微生物细胞的有效培养条件包括但不限于，允许生产油的有效的 培养基、生物反应器、溫度、pH、W及氧条件。有效的培养基是指任何运样的培养基，其中通 常培养微生物细胞，例如破囊壶菌目微生物细胞。此类培养基通常包含水性基质，其具有可 同化的碳源、氮源、与憐酸盐源，W及适当的盐、矿物质、金属，及其他营养物，如维生素。供 本发明使用的微生物细胞可W培养于常规的发酵生物反应器、摇瓶、试管、微滴定盘，W及 培养皿(petri plate)内。
[0168] 在一些实施方案中，微生物细胞包含按重量(或体积)计至少30%的油，按重量(或 体积)计至少35 %的油，按重量（或体积）计至少40 %的油，按重量（或体积)计至少50 %的 油，按重量(或体积)计至少60%的油，按重量(或体积)计至少70%的油，或按重量(或体积） 计至少80%的油。在一些实施方案中，供本发明使用的微生物细胞能够产生至少0.1克每升 每小时（g/L/h)的畑A，至少0.2g/L/h的DHA，至少0.3g/L/h的DHA，或至少0.4g/L/h的畑A。在 一些实施方案中，供本发明使用的微生物细胞能够产生至少0.01克每升每小时(g/L/h)的 ARA，至少0.05g/L/h的ARA，至少0.1 g/L/h的ARA，至少0.2g/L/h的ARA，至少0.3g/LA的ARA， 或至少0.4g/L/h的ARA。
[0169] 在一些实施方案中，根据本文所述方法的任一种而获得的油、用过的生物质，或其 组合可W直接地用作食品或食品成分，如儿童食品，婴儿配方、饮料、酱汁、基于乳品的食品 (例如奶、酸乳、奶酪与冰洪淋）、油类（例如烹调油（cooking oil)或色拉调味汁（salad dressing) )，W及烘赔食物;营养补充剂(例如W胶囊或片剂形式）；用于任何非人动物的饲 料或饲料补充剂(例如其产物(例如肉、奶、或蛋)供人消耗的那些）；食物补充剂；W及药物 (于直接或附加疗法应用中）中的成分。术语"动物"意指属于动物界化ingdom Animalia)的 任何生物，且包括任何人类动物，和由其得到产品（例如奶、蛋、禽肉、牛肉、猪肉或羊肉）的 非人动物。在一些实施方案中，该油和/或生物质可W用于海产食品中。海产食品来源于，但 不限于鱼、邮与贝类。术语"产物"包括由此类动物得到的任何产品，包括但不限于肉、蛋、奶 或其他产物。当将该油和/或生物质喂予此类动物时，多不饱和油可并入此类动物的肉、奶、 蛋或其它产品中W增加运些油中它们的含量。 实施例
[0170] 如本文所用的，"提取产量/收率"是按重量计含油乳液中脂质的（按重量计的)量， 其W细胞培养液中脂质的（按重量计的）量的百分比来表示。"精制产量/收率"是精制油中 脂质的（按重量计的）量，其W含油乳液中脂质的（按重量计的）量的百分比来表示。"总产 量/收率"是精制油中的脂质的（按重量计的)量，其W细胞培养液中脂质的（按重量计的)量 的百分比表示。
[0171] 实施例1
[0172] 将含有微生物细胞(裂殖壶菌属菌种(ScMzochytrium SP.))的未洗涂的细胞培 养液(75.9kg)于60°C己氏消毒1小时。通过添加6N化0聞尋培养液的抑调整至7.5而裂解细 胞，并W基于细胞培养液的重量0 . 5 %的量添加 Alcal娘e厳'酶（可从Novozymes (Franklinton，NC)得到），W184RPM的速度揽拌，加热至60°C并保持2小时。在揽拌的同时， 通过添加6N NaO聞尋裂解细胞组合物的pH调整至10.5。W按重量计细胞培养液的2%的量添 加化C1并加热至90°C且保持19小时。通过添加6N化細将裂解细胞组合物的抑调整至8.2， W150RPM揽拌，并保持4.5小时。通过添加6N化0聞尋裂解细胞组合物的pH调整至8.3，W 150RPM揽拌，并保持1小时。通过将含油乳液和裂解细胞组合物加热至80°C然后离屯、(Alfa Laval Disc Stack Cenhi化ge,LAPX 404/Clara 20)而从裂解细胞组合物形成和分离含 油乳液。提取收率为87.2%。回收的含油乳液具有12.3的AV并含有1.24%的游离脂肪酸。将 含油乳液置于具有氮气覆盖层(blanketing)的20L蓋中，并加热至50-55°C并W按重量计乳 液的0.2%的量添加50%巧樣酸并保持15分钟。将含油乳液进一步加热至60-65°C并W按游 离脂肪酸组合物的重量和含油乳液的重量计12.5%的量添加化0H，并保持30分钟W精制所 述乳液。通过离屯、从乳液分离所述油。精制收率为86.2%。总收率为75%。精制油具有10的 AVo
[0173]表1:含油乳液和精制油的比较 「01741
[0175] ~实施例2
[0176] 将含有微生物细胞(裂殖壶菌属菌种）的未洗涂的细胞培养液(78.3kg)于60°C己 氏消毒1小时。通过添加6N化0聞尋培养液的抑调整至7.5而裂解细胞，并W基于细胞培养液 的重量0.5%的量添加.Ak:?!la5Je饭酶（可从Novozymes(Rranklinton,NC)得到），Wl84RPM的 速度揽拌，加热至60°C并保持2小时，同时伴随用6N化0聞尋pH控制在7.5。在维持揽拌的同 时，通过添加6N化0聞尋裂解细胞组合物的抑调整至9.7。W按重量计细胞培养液的2%的量 添加化C1并加热至90°C且保持18小时。在维持揽拌的同时，通过添加6N化0聞尋裂解细胞组 合物的抑调整至8.3并维持4.5小时。通过将含油乳液和裂解细胞组合物加热至80°C然后离 屯、（Alfa Laval Disc Stack Centrifuge,LAPX 404/Clara 20)而从裂解细胞组合物形成 和分离含油乳液。提取收率为86.3 %。所述含油乳液具有12.9的AV且含有1.02 %的游离脂 肪酸。将含油乳液置于具有氮气覆盖层的20L蓋中，并加热至50-55°C并W按重量计乳液的 0.2%的量添加50%巧樣酸并保持15分钟。将含油乳液进一步加热至60-65°C并W按游离脂 肪酸组合物的重量和含油乳液的重量计12.5%的量添加化0H，并保持30分钟W精制所述乳 液。通过离屯、从乳液分离所述油。精制收率为98.9%。总收率为85.3%。回收的油具有13.5 的AV并含有0.5 %的游离脂肪酸。
[0177] 实施例3
[0178] 将含有微生物细胞(裂殖壶菌属菌种）的未洗涂的细胞培养液(86.化g))于60°C己 氏消毒1小时。通过添加6N化0聞尋培养液的抑调整至7.5而裂解细胞，并W基于细胞培养液 的重量0.5 %的量添加 Alcal巡故珍酶(可从Novozymes (Frankl inton,NC)得到），W185RPM的 速度揽拌，加热至60°C并保持2小时，同时伴随用6N化0聞尋pH控制在7.5。在维持揽拌的同 时，通过添加6N化0聞尋裂解细胞组合物的抑调整至9.9。W按重量计细胞培养液的2%的量 添加化C1并加热至90°C且保持18小时。在维持揽拌的同时，通过添加6N化0聞尋裂解细胞组 合物的抑调整至8.5并维持4小时。通过将含油乳液和裂解细胞组合物加热至80°C然后离屯、 (Alfa Laval Disc Sl:ack Cen1:;rifuge,LAPX 404/Clara 20)而从裂解细胞组合物形成和 分离含油乳液。提取收率为94.4%。所述含油乳液具有4.5的AV且含有1.88%的游离脂肪 酸。将含油乳液置于具有氮气覆盖层的20L蓋中，并加热至50-55Γ并W按重量计乳液的 0.2%的量添加50%巧樣酸并保持15分钟。将含油乳液进一步加热至60-65°C并W按游离脂 肪酸组合物的重量和含油乳液的重量计12.5%的量添加化0H，并保持30分钟W精制所述乳 液。通过离屯、从乳液分离所述油。精制收率为91.5%。总收率为86.4%。精制油具有13.5的 AV并含有0.5 %的游离脂肪酸。
[0179] 实施例4
[0180] 将含有微生物细胞(裂殖壶菌属菌种）的未洗涂的细胞培养液(82.化g))于60°C己 氏消毒1小时。通过添加6N化ο聞尋培养液的抑调整至7.5而裂解细胞，并w基于细胞培养液 的重量0.5 % 的量添加 Alc'alase⑥酶(可从Novozymes(Rranklinton,NC)得到），W185RPM的 速度揽拌，加热至60°C并保持2小时，同时伴随用6N化0聞尋pH控制在7.5。在维持揽拌的同 时，通过添加6N化0聞尋裂解细胞组合物的pH调整至10.2。W按重量计细胞培养液的2%的 量添加化C1并加热至90°C且保持4小时。在维持揽拌的同时，通过添加6N化0聞尋裂解细胞 组合物的pH调整至8.3并维持11小时。在维持揽拌的同时，通过添加6N化0聞尋裂解细胞组 合物的抑调整至7.8并维持7小时。通过将含油乳液和裂解细胞组合物加热至80°C然后离屯、 (Alfa Laval Disc Sl:ack Cen1:;rifuge,LAPX 404/Clara 20)而从裂解细胞组合物形成和 分离含油乳液。提取收率为99.3%。所述含油乳液具有4.的AV且含有0.67 %的游离脂肪酸。 将含油乳液置于具有氮气覆盖层的20L蓋中，并加热至50-55°C并W按重量计乳液的0.2% 的量添加50%巧樣酸并保持15分钟。将含油乳液进一步加热至60-65°C并W按游离脂肪酸 组合物的重量和含油乳液的重量计12.5%的量添加化0H，并保持30分钟W精制所述乳液。 通过离屯、从乳液分离所述油。精制收率为92.7%。总收率为92.3%。精制油具有2.8的AV并 含有0.54%的游离脂肪酸。
[0181] 实施例5
[0182] 将含有微生物细胞(裂殖壶菌属菌种）的未洗涂的细胞培养液(88.化g))于60°C己 氏消毒1小时。通过添加6N化0聞尋培养液的抑调整至7.5而裂解细胞，并W基于细胞培养液 的重量0.5% 的量添加 Alcalase忠酶（可从Novoz;ymes(Franklinton,NC)得到），W183RPM的 速度揽拌，加热至60°C并保持2小时，同时伴随用6N化0聞尋pH控制在7.5。在维持揽拌的同 时，通过添加6N化0聞尋裂解细胞组合物的pH调整至10.2。W按重量计细胞培养液的2%的 量添加 NaCl并加热至90°C且保持22小时。通过将含油乳液和裂解细胞组合物加热至80°C然 后离屯、（Alfa Laval Disc Stack Cen1:;rifuge,LAPX 404/Clara 20)而从裂解细胞组合物 形成和分离含油乳液。提取收率为94%。所述含油乳液含有2.1%的游离脂肪酸。将含油乳 液置于具有氮气覆盖层的20L蓋中，并加热至50-55Γ并W按重量计乳液的0.2%的量添加 50%巧樣酸并保持15分钟。将含油乳液进一步加热至60-65°C并W按游离脂肪酸组合物的 重量和含油乳液的重量计12.5%的量添加化0H，并保持30分钟W精制所述乳液。通过离屯、 从乳液分离所述油。精制收率为94.3%。总收率为87%。精制油含有0.62%的游离脂肪酸。
[0183] 实施例6
[0184] 将含有微生物细胞(裂殖壶菌属菌种）的未洗涂的细胞培养液(84.9kg))于60°C己 氏消毒1小时。通过添加6N化0聞尋培养液的抑调整至7.5而裂解细胞，并W基于细胞培养液 的重量0.5% 的量添加 A.Icalase敏酶(可从Novozymes(Rranklinton,NC)得到），W184RPM的 速度揽拌，加热至60°C并保持2小时。在维持揽拌的同时，通过添加6N化0聞尋裂解细胞组合 物的抑调整至10.5。W按重量计细胞培养液的2%的量添加化C1并加热至90°C且保持22小 时。通过将含油乳液和裂解细胞组合物加热至80°C然后离屯、（Alfa Laval Disc Stack Cen化i化ge，LAPX 404/Clara 20)而从裂解细胞组合物形成和分离含油乳液。提取收率为 93.9 %。所述含油乳液含有1.5 %的游离脂肪酸。将含油乳液置于具有氮气覆盖层的20L蓋 中，并加热至50-55°C并W按重量计乳液的0.2%的量添加50%巧樣酸并保持15分钟。将含 油乳液进一步加热至60-65°C并W按游离脂肪酸组合物的重量和含油乳液的重量计12.5% 的量添加化0H，并保持30分钟W精制所述乳液。通过离屯、从乳液分离所述油。精制收率为 89.8%。总收率为84.3%。
[0185] 表2:含油乳液和精制油的比较
[0186]
[0187] 实施例7
[0188] 将含有微生物细胞(裂殖壶菌属菌种）的未洗涂的细胞培养液(77.化g))于60°C己 氏消毒1小时。将细胞机械裂解。添加6N化0H至裂解细胞组合物W将所述组合物的抑调整 至9.5，^按重量计细胞培养液的2%的量添加化(：1，^1841?^揽拌，加热至90°(：并保持25小 时。通过将含油乳液和裂解细胞组合物加热至80°C然后离屯、（Alfa Laval Disc Stack Cen化i化ge，LAPX 404/Clara 20)而从裂解细胞组合物形成和分离含油乳液。提取收率为 91.1 %。所述含油乳液含有1.7%的游离脂肪酸。将含油乳液加热至50-55°C并保持8小时15 分钟。通过离屯、从乳液分离所述油。精制收率为83.7%。总收率为76.2%。
[0189] 实施例8
[0190] 将含有微生物细胞(裂殖壶菌属菌种）的未洗涂的细胞培养液(74.8kg))于60°C己 氏消毒1小时。通过添加6N化0聞尋培养液的抑调整至7.5而裂解细胞，并W基于细胞培养液 的重量0.5 % 的量添加 Alcalase饭酶（可从Novozymes(Rranklinton,NC)得到），W184RPM的 速度揽拌，加热至60°C并保持2小时。在维持揽拌的同时，通过添加6N化0聞尋裂解细胞组合 物的抑调整至10.5。W按重量计细胞培养液的2%的量添加化C1并加热至90°C且保持23小 时。通过将含油乳液和裂解细胞组合物加热至80°C然后离屯、（Alfa Laval Disc Stack Cen化i化ge，LAPX 404/Clara 20)而从裂解细胞组合物形成和分离含油乳液。提取收率为 82.8%。所述含油乳液含有1.1 %的游离脂肪酸。将含油乳液置于具有氮气覆盖层的20L蓋 中，并加热至50-55°C并W按重量计乳液的0.2%的量添加50%巧樣酸并保持15分钟。将含 油乳液进一步加热至60-65°C并W按游离脂肪酸组合物的重量和含油乳液的重量计12.5% 的量添加化0H，并保持30分钟W精制所述乳液。通过离屯、从乳液分离所述油。精制收率为 94.9%。总收率为78.5%。
[0191] 实施例9
[0192] 将含有微生物细胞(裂殖壶菌属菌种）的未洗涂的细胞培养液(83.化g))于60°C己 氏消毒1小时。通过添加6N化0聞尋培养液的抑调整至7.5而裂解细胞，并W基于细胞培养液 的重量0.5%的量添加 Alcalase?酶（可从Novoz;ymes(Franklinton,NC)得到），W184RPM的 速度揽拌，加热至60°C并保持2小时。在维持揽拌的同时，通过添加6N化0聞尋裂解细胞组合 物的抑调整至10.5。W按重量计细胞培养液的2%的量添加化C1并加热至90°C且保持22小 时。通过将含油乳液和裂解细胞组合物加热至80°C然后离屯、（Alfa Laval Disc Stack Cen化i化ge，LAPX 404/Clara 20)而从裂解细胞组合物形成和分离含油乳液。提取收率为 90.9%。所述含油乳液含有1.7 %的游离脂肪酸。将含油乳液置于具有氮气覆盖层的20L蓋 中，并加热至50-55°C并W按重量计乳液的0.3%的量添加50%巧樣酸并保持15分钟。将含 油乳液进一步加热至60-65°C并W按游离脂肪酸组合物的重量和含油乳液的重量计12.5% 的量添加化0H，并保持30分钟W精制所述乳液。通过离屯、从乳液分离所述油。精制收率为 78.2%。总收率为78.2%。
[0193] 实施例10
[0194] 将含有微生物细胞(裂殖壶菌属菌种）的未洗涂的细胞培养液(86.3kg))于60°C己 氏消毒1小时。通过添加6N化0聞尋培养液的抑调整至7.5而裂解细胞，并W基于细胞培养液 的重量0.5%的量添加 Alc:al:ase您酶(可从Novoz;ymes(Rranklinton,NC)得到），W185RPM的 速度揽拌，加热至60°C并保持2小时，同时伴随用6N化0聞尋pH控制在7.5。在维持揽拌的同 时，通过添加6N化0聞尋裂解细胞组合物的pH调整至10.5。W按重量计细胞培养液的2%的 量添加化C1并加热至90°C且保持2小时。通过将含油乳液和裂解细胞组合物加热至80°C然 后离屯、（Alfa Laval Disc Stack Cen1:;rifuge,LAPX 404/Clara 20)而从裂解细胞组合物 形成和分离含油乳液。提取收率为96.9 %。所述含油乳液具有1.5的AV，<0.1 meg/kg的PV并 含有0.87%的游离脂肪酸。将含油乳液置于具有氮气覆盖层的20L蓋中，并加热至50-55Γ 并W按重量计乳液的0.3%的量添加50%巧樣酸并保持15分钟。将含油乳液进一步加热至 60-65°C并W按游离脂肪酸组合物的重量和含油乳液的重量计12.5 %的量添加化0H，并保 持30分钟W精制所述乳液。通过离屯、从乳液分离所述油。总收率为92.1%。精制油具有5.2 的AV，0.52meg/kg的PV并含有0.24 %的游离脂肪酸。
[01M]表3:含油乳液和精制油的比较 「Π 10Α?
[0197] 实施例11
[0198] 将本文所提供的实施例的提取收率和聚并（coalescence)时间与当前的方法(两 个实施例)进行了比较。
[0199] 表4:聚并时间
[0200]
【主权项】
1. 一种用于从一个或多个微生物细胞获得包含一种或多种多不饱和脂肪酸的微生物 油的方法，其中该方法包括： (a) 裂解包含所述微生物油的细胞以形成裂解细胞组合物； (b) 处理所述裂解细胞组合物以形成含油乳液； (c) 从所述裂解细胞组合物分离所述含油乳液； (d) 将所述含油乳液去乳化;和 (e) 回收所述油。2. 权利要求1的方法，其中（a)或(b)中至少一个还包括提升所述细胞或裂解细胞组合 物的pH。3. 权利要求1或2的方法，其中(a)或(b)中至少一个还包括将pH提升至约7或更高。4. 前述任一权利要求的方法，其中（a)或(b)中至少一个还包括将pH提升至约7至约11。5. 前述任一权利要求的方法，其中(a)还包括控制所述细胞的pH。6. 权利要求5的方法，其中控制所述细胞的pH包括添加碱。7. 前述任一权利要求的方法，其中（a)或(b)中至少一个还包括搅拌所述细胞或裂解细 胞组合物。8. 前述任一权利要求的方法，其中（a)或(b)中至少一个还包括将所述细胞或裂解细胞 组合物加热到至少50°C。9. 前述任一权利要求的方法，其中（a)或(b)中至少一个还包括将所述细胞或裂解细胞 组合物加热到约50°C至约100°C。10. 前述任一权利要求的方法，其中（a)还包括以按重量计细胞培养液(ce 11 broth)的 约0.05 %至约20 %的量添加酶。11. 前述任一权利要求的方法，其中（b)还包括以按重量计细胞培养液的约0.05%至约 20%的量添加盐。12. 权利要求11任一项的方法，其中所述盐选自下组:碱金属盐、碱土金属盐、硫酸盐， 及其组合。13. 前述任一权利要求的方法，其中(a)的细胞是未经洗涤的。14. 前述任一权利要求的方法，其中(a)的细胞包含于发酵液中。15. 前述任一权利要求的方法，其中（c)还包括将所述含油乳液和裂解细胞组合物加热 到至少50°C。16. 前述任一权利要求的方法，其中（c)还包括将所述含油乳液和裂解细胞组合物加热 到约50°C至约100°C。17. 前述任一权利要求的方法，其中（c)还包括离心。18. 前述任一权利要求的方法，其中(d)还包括将所述含油乳液加热到至少50°C。19. 前述任一权利要求的方法，其中（d)还包括将所述含油乳液加热到约50°C至约100 Γ。20. 前述任一权利要求的方法，其中(d)还包括添加酸。21. 权利要求20的方法，其中所述酸包括柠檬酸。22. 前述任一权利要求的方法，其中(d)还包括添加碱。23. 权利要求22的方法，其中所述碱包括氢氧化钠。24. 前述任一权利要求的方法，其中所述多不饱和脂肪酸选自ω-3脂肪酸，ω-6脂肪 酸，及其混合物。25. 前述任一权利要求的方法，其中所述多不饱和脂肪酸选自二十二碳六烯酸(DHA)、 二十碳五烯酸(ΕΡΑ)、二十二碳五烯酸(DPA)、花生四烯酸(ARA)、γ -亚麻酸(GLA)、二高-γ -亚麻酸(DGLA)、十八碳四稀酸(stearidonic acid,SDA)，及其混合物。26. 权利要求25的方法，其中其中所述多不饱和脂肪酸是二十二碳六烯酸(DHA)。27. 权利要求25的方法，其中所述多不饱和脂肪酸是花生四烯酸(ARA)。28. 前述任一权利要求的方法，其中所述微生物细胞是藻类、酵母、真菌、原生生物，或 细菌细胞。29. 前述任一权利要求的方法，其中所述微生物细胞来自被孢霉属(Mort i ere 1 la )、隐 甲藻属（Crypthecodinium)，或破囊壶菌目（Thraustochytriales) 〇30. 权利要求29的方法，其中所述所述微生物细胞来自破囊壶菌目。31. 权利要求29的方法，其中所述微生物细胞来自破囊壶菌属(Thraustochytrium)、裂 殖壶菌属（Schizochytrium)，或其混合物。32. 权利要求29的方法，其中所述微生物细胞来自高山被孢霉(Mortierella Alpina)。33. 前述任一权利要求的方法，其中所述裂解细胞组合物包含液体、细胞碎片以及微生 物油。34. 前述任一权利要求的方法，其中不使用有机溶剂而从所述细胞获得所述油。35. 前述任一权利要求的方法，其中（e)还包括离心所述油。36. 前述任一权利要求的方法，其中（e)还包括精制所述油。37. 前述任一权利要求的方法，其中所述油包含按重量计至少30 %的花生四烯酸。38. 前述任一权利要求的方法，其中所述油包含按重量计至少30 %的二十二碳六烯酸。39. 前述任一权利要求的方法，其中所述油具有低于约50的茴香胺值。40. 前述任一权利要求的方法，其中所述油具有约8ppm或更低的磷含量。41. 前述任一权利要求的方法，其中所述油具有低于约5meq/kg的过氧化物值。42. 通过前述任一权利要求的方法获得的油。43. 前述任一权利要求的方法，其中将(a)和(b)组合在一起以形成一步裂解及处理步 骤。44. 一种用于从一个或多个微生物细胞获得包含一种或多种多不饱和脂肪酸的微生物 油的方法，其中所述方法包括： (a) 裂解包含所述微生物油的细胞以形成裂解细胞组合物； (b) 处理所述裂解细胞组合物以形成含油乳液； (c) 从所述裂解细胞组合物分离所述含油乳液;和 (d) 将所述含油乳液去乳化;和 (e) 回收所述油， 其中（a)或(b)中至少一个包括提升所述细胞或裂解细胞组合物的pH，搅拌所述细胞或 裂解细胞组合物，和加热所述细胞或裂解细胞组合物。45. 权利要求44的方法，其中（a)还包括以按重量计所述细胞培养液的约0.05 %至约 20%的量添加酶。46. 权利要求44或权利要求45的方法，其中（b)还包括以按重量计所述细胞培养液的约 0.05 %至约20 %的量添加盐。47. 权利要求44-46任一项的方法，其中（c)还包括将述含油乳液和裂解细胞组合物加 热到至少50°C。48. 权利要求44-47任一项的方法，其中（c)还包括离心。49. 权利要求44-48任一项的方法，其中（d)还包括加热到至少50°C、添加酸、和添加碱 之中至少一个。50. 权利要求44-49任一项的方法，其中（e)还包括离心所述油。51. 权利要求44-50任一项的方法，其中（e)还包括精制所述油。
【文档编号】C07C51/42GK106029623SQ201480075851
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2014年12月19日
【发明人】N·F·莱宁格尔, G·尚克, X·董, J·W·普法伊费尔三世, V·派
【申请人】帝斯曼知识产权资产管理有限公司