专利名称：一种固定化微生物细胞转化神经节苷脂的方法
技术领域：
本发明属于生物制药领域，具体涉及一种固定化微生物细胞转化神经节苷脂制备单唾液酸四己糖神经节苷脂(GMl)的方法。
背景技术：
神经节苷脂(Ganglidosides，GLS)由一类含唾液酸的亲水寡糖通过β _1，1糖苷键与疏水的神经酰胺连接而成的两性大分子。其中含有一个唾液酸的GLS称为单唾液酸四己糖神经节苷脂(Monosialotetrahexosylganglioside, GMl), GMl能够通过血脑屏障，聚集受损脑区嵌入细胞膜，模仿内源性GMl发挥作用，能够促进神经细胞生存、轴突生长和突触生长的神经重构，恢复由于各种原因引起的中枢神经系统损伤的功能，用于治疗颅脑损伤、神经退化、脑水肿、帕金森综合症等脑部疾病。
权利要求
1.一种固定化微生物细胞转化神经节苷脂的方法，包括以下步骤a.培养转化神经节苷脂的菌株，离心收集细胞；b.制备蚕丝素凝胶作为固定化材料将家蚕蚕丝下脚料粉碎后用纯净水浸泡，高温条件下进行脱胶处理，丝素脱胶温度为110°C 130°C，时间为广3小时，用纯净水洗净后加热溶解于氯化钙溶液中，过滤后减压浓缩至浓度为80g/L ^120g/L,即获得家蚕丝素水凝胶；c.用固定化材料固定化细胞固定化方法是包埋和交联相结合，在无菌条件下，将丝素水凝胶加热溶解与菌体混勻后放置在4°C冷却凝结，然后切成小块，将包埋菌体的凝胶块在含有浓度为19Γ1. 5%的戊二醛溶液中交联处理广2小时，用纯净水洗涤干净后再置于KCl 溶液中浸泡硬化，用纯净水洗涤干净后放置4°C保存待用；d.制备转化反应缓冲液缓冲液组成为洲磷酸氢二铵，1.5%磷酸二氢钾，0. 5%硫酸镁，0. 5%醋酸钠，0. 05%硫酸钙，pH值为5. 0 6· 5 ；e.将固定化微生物细胞悬浮于反应缓冲液中填充反应柱装置；f.在3飞mL/min流速、25°C 30°C温度条件下将神经节苷脂逆向流经反应柱，进行生物转化反应，使神经节苷脂转化为单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤a所述转化神经节苷脂的菌株为绿色小单胞菌(Micromonospora viridifaciens, ATCC 31146) ^ILM^Sff^{Brevibacterium casei, ATCC 35513)。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤a所述转化神经节苷脂的菌株为绿色小单胞菌(Micromonospora viridifaciens, ATCC 31146)，培养该菌株时所用培养基成分为多聚乙酰神经氨酸2、g/L，淀粉30g/L，硫酸铵15g/L，磷酸二氢钾lg/L，硫酸镁0. 5g/L， 硫酸锌0. 3g/L。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤b所述脱胶温度为121°C，时间为2小时。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤e所述反应填充柱为二级或多级串联模式。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤f所述转化温度为30°C，流速为5mL/min。
全文摘要
本发明公开了一种固定化微生物细胞转化神经节苷脂的方法，能够专一性转化神经节苷脂生成单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)，解决了酸法水解转化率低、容易产生无活性脱唾液酸神经节苷脂的问题，同时解决了非固定化细胞转化法容易掺入培养基成分或微生物代谢物杂质的问题。本发明用丝素凝胶固定化细胞后填充柱型反应床，在一定反应条件下将待转化神经节苷脂反向流过填充柱，将神经节苷脂转化为GM1。
文档编号C12R1/29GK102154416SQ201010609269
公开日2011年8月17日 申请日期2011年1月18日 优先权日2011年1月18日
发明者董惠钧, 赵志全 申请人:山东新时代药业有限公司