专利名称：通过选择性抑制可能存在的交叉反应生物来增强基于噬菌体之诊断测定的方法和装置的制作方法
技术领域：
本发明一般地涉及鉴定活微生物的领域，更特别地涉及使用噬菌体 来鉴定微生物。2. 问题陈述噬菌体是自然进化成使用细菌作为复制自身之手段的病毒。噬菌体 通过将其自身附着于细菌并将其遗传物质注入该细菌中(引发噬菌体复 制)来实现这一点。 一些称为"裂解性噬菌体"的噬菌体使宿主细菌破 裂，将子代噬菌体释放到环境中以找寻其它细菌。取决于噬菌体、宿主 细菌和样品的环境条件，亲代噬菌体感染细菌、噬菌体在细菌中增殖(扩 增)以产生子代噬菌体以及裂解后子代噬菌体释放的总孵育时间可能短 至一小时。已经提出将基于噬菌体的方法作为加快微生物鉴定的方法。参见， 例如1999年11月16日授权的美国专利No. 5,985,596以及10月8日授 权的No. 6，461，833 Bl，其专利权人均为Stuart Mark Wilson; 1989年8 月29日授权的美国专利No. 4,861,709,其专利权人为Ulitzur等；1998 年10月20日授权的美国专利No. 5，824，468,其专利权人为Scherer等； 1997年8月12日授权的美国专利No. 5,656,424，其专利权人为 Jurgensen等；2001年10月9日授权的美国专利No. 6,300,061 Bl,其 专利权人为Jacobs Jr.等；2003年4月29日授权的美国专利No. 6,555,312 Bl，其专利权人为Hiroshi Nakayama; 2003年4月8日授权 的美国专利No. 6,544,729 B2，其专利权人为Sayler等；1999年3月30 日授权的美国专利No. 5,888,725，其专利权人为Michael F. Sanders; 2002年8月20日授权的美国专利No. 6,436,652 Bl，其专利权人为 Cherwonogrodzky等；2002年8月20日授权的美国专利No. 6,436,661Bl,其专利权人为Adams等；1996年3月12日授权的美国专利No. 5,498,525，其专利权人为Rees等；Angelo J. Madonna, Sheila VanCuyk 和 Kent J. Voorhees, "Detection Of Escherichia Coli Using Immunomagnetic Separation And Bacteriophage Amplification Coupled With Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-Of-Flight Mass Spectrometry", Wiley InterScience, DOI:10.1002/rem.900, 2002年12月24日；以及2004年11月11日公 开的美国专利申请^>开号2004/0224359 。在每一种上述方法中，都将可能含有靶标细菌的样品与特异性针对 这些细菌的噬菌体一起孵育。当所述细菌存在时，噬菌体感染细菌并在 其中复制，导致产生高于输入噬菌体水平的可测量信号，这表明存在靶 标细菌。有些方法利用检测从被感染靶标细菌释放的子代噬菌体作为检 测和鉴定的手段。在这种情况下，如果亲代噬菌体未能成功感染靶标细 菌，则不会产生子代噬菌体。还有一些方法依赖于检测噬菌体复制产物， 而非完整的子代噬菌体。例如，当萤光素酶报告噬菌体成功感染靶标细 菌时，其产生萤光素酶。萤光素酶继而发出光，如果检测到这种光，则 表明样品中存在靶标细菌。另一些方法依赖于检测特异性噬菌体成功地 裂解性感染靶标细菌后所释放的细菌碎片。为了准确鉴定靶标细菌，每 一种上述基于噬菌体的诊断方法均要求噬菌体既具有针对靶标细菌的 高灵敏度，还要具有高特异性以避免在非靶标细菌菌林或菌种中复制。 寻找或开发具有上述特点的噬菌体可能是非常具有挑战性的。具有高水 平灵敏度的噬菌体常常缺乏足够的特异性，即它们与非靶标细菌交叉反 应。因此，仍需要找到使用具有更高水平特异性并保留高水平灵敏度的 噬菌体进行微生物检测的方法。发明内容通过鉴定以某种方式抑制噬菌体在可能发生交叉反应的非靶标细 菌中附着或复制而尽可能少影响靶标细菌中附着或复制的条件，本发明 解决了上述问题以及现有技术中的另 一些问题。这种抑制可以至少三种 方式来实现1)抑制可能发生交叉反应之细菌的生长而允许靶标细菌 生长；2)使用选择性结合剂来选择性除去或封闭可能存在的交叉反应 细菌；以及3)选择性破坏可能发生交叉反应的细菌。本领域技术人员可以想到产生同样结果的其它方法。本发明提供了确定待测试样品中靶标微生物存在与否的方法，该方法包括(a)将样品与能附着于靶标微生物的一定量噬菌体结合，以产 生暴露于噬菌体的样品；(b)向该暴露于噬菌体的样品提供足以允许噬 菌体附着于靶标微生物但抑制噬菌体在可能发生交叉反应的非靶标微 生物中附着或复制的条件；以及(c)测定该暴露于噬菌体的样品以检 测噬菌体标志物存在与否，从而确定靼标微生物存在与否。优选地，该 方法包括允许噬菌体感染靶标微生物并在靶标微生物中增殖而消除或 抑制噬菌体在可能发生交叉反应的微生物中复制的条件。优选地，该方 法还包括带有可检测标签的噬菌体标志物，其中所述测定包括进行靶标 分离过程，所述分离过程能够将暴露于噬菌体的样品分离成包含样品中标记噬菌体的未结合标记噬菌体部分。优选地，所述抑制包括抑制可能 发生交叉反应之细菌的生长而允许靼标细菌的生长。优选地，所述抑制 包括向样品中添加抑制性物质。优选地，所述抑制性物质选自二价阳离 子、抗生素、螯合剂和金属化合物。优选地，所述抑制包括使用附着于 基质的选择性结合试剂来选择性除去可能存在的交叉反应微生物。优选 地，所述选择性除去包括使用选择性针对非耙标细菌的抗体或噬菌体。 优选地，所述基质包括微粒。优选地，所述抑制包括选择性破坏可能发 生交叉反应的微生物或显著减慢其生长。优选地，所述破坏包括将抗生 素与样品选择性结合。优选地，所述破坏包括将样品与选择性结合和/ 或感染一种或多种可能发生交叉反应之非靶标微生物的噬菌体相组合。 优选地，所述测定包括免疫测定。本发明还提供了用于确定待测试样品中靶标微生物存在与否的选 择性生长介质，该介质包含以下成分的组合特异性针对靶标微生物的 一种或多种噬菌体、营养性生长培养基以及抑制噬菌体附着于可能发生 交叉反应的非靶标微生物或在其中复制的抑制性物质。优选地，所述抑 制性物质选自特异性针对所述交叉反应微生物的噬菌体、抗体、抗生素、 抗菌化合物、二价阳离子、螯合剂和金属化合物。此外，本发明提供了用于确定待测试样品中靶标微生物存在与否的 试剂盒，该试剂盒包含选择性生长介质，其含有特异性针对靶标微生物以及抑制性物质。优选地，噬菌 体和抑制性物质可以组合在单个容器中。或者，所述噬菌体和营养性生 长介质可以在一个容器中，而抑制性物质在另一容器中。优选地，该试剂盒还包含快速诊断工具，例如侧向流试纸条(lateral flow strip )。本发明解决了提高基于噬菌体之微生物检测法的特异性而不显著 改变针对靶标微生物之灵敏度的问题。当结合附图阅读以下详述时，本 发明的众多其它特征、目的和优点将显而易见。
图1示意噬菌体扩增过程；图2示意本发明用于确定微生物存在与否的方法和装置的若干示例 性实施方案；以及图3示意本发明的检测试剂盒。优选实施方案详述本发明提供了增强使用噬菌体进行的微生物检测的方法和装置。本 领域已知，噬菌体通常特异性针对特定微生物，然而它们常表现出针对 密切相关之生物的低水平交叉反应性。 一般地，通过与特异性针对靶标 微生物的噬菌体结合来使用噬菌体检测样品中靶标微生物的存在。然 后，通过提供足以允许噬菌体附着于所述靶标微生物或在其中复制的条 件来孵育暴露于噬菌体的样品。孵育后，测定该暴露于噬菌体的样品以 检测噬菌体标志物存在与否，从而确定所述耙标微生物存在与否。噬菌 体在样品中成功附着或复制表明样品中存在靶标微生物。本发明提出如 下事实，噬菌体可能不完全特异性针对特定微生物。与噬菌体相互作用 的相关的非靶标微生物一般称为"交叉反应"生物。本领域已开发出一些方法用于确定噬菌体是否附着于微生物或在 其中复制。 一般地，它们包括检测附着于噬菌体的标签(flag),检测噬 菌体本身，检测噬菌体的一部分(例如主要衣壳蛋白)，检测噬菌体复 制的酶或其它副产物(特别是使用经修饰的报告噬菌体，例如萤光素酶 报告噬菌体)，或者检测噬菌体成功复制和微生物裂解后释放的细菌碎片。针对本发明的目的，检测任何这些噬菌体相关信号包括检测噬菌体 标志物。基于对噬菌体复制的一些细节的了解，可以更容易地理解本发明。图1中示意了复制过程。该图右侧显示出典型的噬菌体70(此处为MS2-大肠杆菌)从细菌152中产生。在结构上，噬菌体70包含蛋白外壳或 衣壳72(有时称为"头部")，其包裹住病毒核酸74(即DNA和/或RNA)。 噬菌体还可包含构成衣壳的蛋白质或DNA/RNA、颈部76、尾鞘77、 尾丝78、终板(end plate) 79和尾钉(pin) 80。衣壳72由重复拷贝 的一种或多种蛋白质构建而成。在该图的左侧，当噬菌体150感染细菌 152 (此处为交叉反应细菌)时，其自身附着于细菌细胞壁或膜151的 特定位点上，并将其核酸154注入该细菌中，引发该噬菌体复制几十至 数千个拷贝。图1中显示该过程的示意图。所述DNA发展成早期mRNA 155和早期蛋白156,其中一些沿着线157成为膜组分，而另一些利用 来自宿主染色体159的细菌核酸酶沿着线164成为DNA前体。另一些 则沿着170的方向迁移，成为沿着线166掺入DNA的头部前体。所述 膜组分沿着路径160发展形成鞘、终板和尾钉。另一些蛋白质沿着路径 172发展形成尾丝。在形成时，头部从膜151释放，并沿着路径174与 尾鞘连接，然后尾鞘和头部在176处与尾丝组装从而形成噬菌体70。 一 些噬菌体(称为裂解性噬菌体)使宿主细菌破裂(示于180处)，将子 代噬菌体释放到环境中并找寻环境中的其它细菌。选择性干扰交叉反应 细菌152中的附着或复制过程的任何过程或物质均被视为构成本发明的 一部分。这包括直接抑制噬菌体附着或复制的任何过程或物质以及影响 细菌152本身并因此间接抑制噬菌体附着或复制的任何过程或物质。本发明鉴定了以某种方式抑制噬菌体附着于可能发生交叉反应的 非靶标细菌和/或在其中复制的条件，并使用该抑制提高基于噬菌体之 诊断方法的特异性。所述抑制可包括添加抑制性物质或者使用抑制性方 法。本文描述了抑制性方法的三个实施方案l)抑制可能发生交叉反 应之细菌的生长，而允许靶标细菌生长；2)使用选择性结合试剂来选 择性除去或封闭可能存在的交叉反应细菌；以及3)选择性破坏可能发 生交叉反应的细菌。这些实施方案旨在举例说明，但本发明并不限于这 些实施方案。本领域技术人员可以想到产生同样结果的其它方法。可使用微生物检测中常见的方法来实现对可能发生交叉反应之细 菌的抑制。例如，盐例如氯化钠(高浓度)、二价阳离子、抗生素(如多粘菌素B或E)、防腐剂(如吖啶黄素)、金属化合物(如亚碲酸钾) 以及铁螯合剂(如去铁敏(desferoxamine))抑制某些凝固酶阴性葡萄 球菌(coagulase negative Staphylococcus, CNS )生长，但允许金黄色葡 萄球菌(5te/;/^/o^ccMs flw^MS)生长。这些化合物还可显著抑制或阻 滞噬菌体在CNS中的复制，而尽可能少地影响金黄色葡萄球菌中的复 制。使用选择性介质来差异性地影响噬菌体复制的效率和时机是提高基 于噬菌体之细菌诊断方法特异性的新方法。可使用选择性针对非靶标细菌的抗体、噬菌体或者选择性结合非靶 标细菌的其它化合物来实现非靶标细菌的除去或封闭。就金黄色葡萄球 菌鉴定测试来说，除去CNS种类可以是有利的。这些化合物与非靶标 细菌的结合可以足以封闭对耙标细菌特异性不强的噬菌体随后结合这 些细菌，从而阻止非靶标细菌中的非特异性感染和复制。或者，这些化 合物可附着于另一些基质如微粒、磁珠或固体基质。当与样品一起孵育 时，可能存在的非靶标细菌将选择性地与所述基质结合。然后，可通过 物理方法将该基质从样品中除去。分离方法包括微粒离心、应用磁场分 离磁珠或其它分离方法。可使用选择性破坏非靶标细菌的抗菌化合物来实现选择性破坏非 靶标细菌，从而使其对噬菌体感染不再敏感，而保持靶标细菌基本未遭 破坏而对噬菌体感染敏感。这样的化合物包括a)选择性抗生素和b) 选择性地结合和/或感染可能发生交叉反应的非靶标细菌的噬菌体。后 者对于用于选择性感染样品中靶标细菌的主要噬菌体来说是补充性噬 菌体。补充性噬菌体可通过成功感染并裂解非靶标细菌而破坏该非靶标 细菌，从而使主要噬菌体的噬菌体感染得以消除或显著降低。还可使用 补充性噬菌体通过称为"自外溶菌作用(lysis from without )，，的方法破 坏非靶标细菌。"自外溶菌作用"是指当成百上千的噬菌体颗粒结合细 胞壁时对细菌的破坏。可通过向样品添加高浓度的补充性噬菌体而在本 发明中利用这一方法，从而使大量的补充性噬菌体迅速地选择性结合可 能发生交叉反应的细菌。在多个噬菌体结合的压力下，交叉反应细菌可 能破碎，使其不再能作为主要噬菌体的噬菌体感染灶。图2示意本发明的示例性方法以及示例性的噬菌体-抑制剂组合。样 品200同时包含乾标细菌204和交叉反应细菌208。添加剂组合220包 含噬菌体224和抑制剂组分228 (标为"I")。优选地，所述组分224和 228在适用于噬菌体224和抑制剂228的介质中提供，例如液体培养基 或其他一些培养基。噬菌体224特异性针对靶标细菌204，但也可附着 和感染交叉反应细菌208。抑制剂228可以是另一种噬菌体、抗体、化 学品、抗生素、抗菌化合物或任何其它可抑制测定噬菌体标志物时交叉 反应之影响的物质。如229处所示，将添加剂组合220加入样品200中。在经暴露的样 品236中，噬菌体224寻找并附着于耙标细菌204和交叉反应细菌208。 为筒单起见，每个细菌仅显示附着有一个噬菌体，但常常附着有许多(几 百)噬菌体。此外，抑制剂组分228也会影响交叉反应细菌，这通过与 其附着(如果抑制剂为噬菌体或抗体)或者通过如234处所示的其它一 些相互作用来实现。不管为何种相互作用，都将对交叉反应细菌产生负 影响。例如，如果抑制剂组分228是特异性针对交叉反应细菌但不针对 靶标细菌的噬菌体时，将可能有上千噬菌体附着于交叉反应细菌，它们 将破坏该细菌，使得噬菌体224不进行复制并且不产生有助于该测定的 噬菌体标志物。或者，如果抑制剂是抗体或噬菌体，可使用该抗体或噬 菌体将交叉反应细菌附着至基质254,以产生基质/抑制剂/交叉反应细 菌的复合体256，该复合体可通过途径148从样品中除去以在250处分 离交叉反应细菌。在这种情形中，靶标细菌将经由途径246前进至240， 其中基本上只有靶标细菌/噬菌体复合体238将保留在样品中，并且该 噬菌体将在样品260中产生噬菌体标志物，例如264,这将大大提高该 测定的特异性，因为交叉反应细菌不再参与标志物测定。或者，如果抑 制剂是特异性针对交叉反应细菌的抗生素或化学品，则该交叉反应细菌 将会死亡，附着于该交叉反应细菌的噬菌体224将不能复制。因此，结 果是同样的，尽管是经由稍有不同的途径257:样品260基本上仅含有 来自乾标细菌的标志物264，且只有它们参与标志物测定。在260中， 标志物显示为子代噬菌体，然而还可以有多种其它类型的噬菌体标志 物。所述检测测定可使用免疫测定法，其利用抗体结合事件来产生可检 测信号，例如ELISA、放射免疫测定、侧向流免疫层析(lateral flow immunochromatography, LFI)和流过领'J定(flow-through assay )技术。检测测定还可使用流式细胞术、western印迹、基于适配体的测定、免 疫荧光、基质辅助激光解吸/电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS )(本 文称作Af^LZ)/)以及其它检测方法。图3显示用于检测活的微生物的示例性测试试剂盒354。测试试剂 盒354优选包括含有交叉反应微生物抑制剂溶液358的容器356、反应 容器360、封入保护性罩363中的一个或多个检测元件366、 4吏用该试 剂盒的说明书370以及用于容纳上述测试试剂盒各部分的收纳器372。 保护罩363还可包含参比检测元件376，其指示不存在细菌时的预期结 果367。例如，如果该检测元件是免疫测定测试装置例如侧向流试纸条 或流过装置，则参比检测元件可以是已施加了不存在细菌的噬菌体参比 样品的相同免疫测定装置。反应容器360包含容器主体367和容器封闭 物364。优选地，反应容器主体为瓶367，反应容器封闭物为瓶盖364。 反应容器360包含噬菌体368并任选地包含生长培养基369。噬菌体368 优选地包含附着于反应容器主体367内壁369的预定量噬菌体。盖364 优选为具有内部螺紋362的螺口盖，所述螺紋与瓶367顶部螺紋相匹配。 盖364优选包含分配器365，其优选为设计用于释放预定大小液滴的滴 管头。在该实施方案中，检测元件366包含抗体，更具体地为侧流试纸 条366,但也可以是流过装置或其它任何检测装置。优选地，收纳器372 包括塑料袋372，其用于容纳测试试剂盒各部分以及提供测试完成后方 便的一次性容器的双重目的。任选地，测试试剂盒354可如下进行筒化 将交叉反应微生物抑制剂溶液358添加至反应容器360，从而去除容器 356。本发明方法的开发是用于将具有高灵敏度但特异性不够理想的噬 菌体用于基于噬菌体鉴定细菌的方法中。它使得密切相关的细菌菌林与 靶标菌林得以区分。这使得对在与靶标物种密切相关的细菌物种中难以 实现的高特异性要求降至最低。自从二十世纪50年代以来，科学文献中已公开了使用选择性化合 物来抑制某些细菌物种。然而，这些文献中均未考虑到使用抑制来阻碍 噬菌体的附着或复制。本领域技术人员会明白，本公开内容使得可以使 用现有技术中用于抑制细菌的任何抑制方法来抑制噬菌体复制。本发明的方法和装置可以增强其它许多用于鉴定微生物和/或确定抗生素抗性或抗生素敏感性的基于噬菌体的方法和装置。例如，本发明可增强噬菌体扩增方法，例如描述于美国专利申请公开No. 2005/0003346、题为"Apparatus And Method For Detecting Microscopic Living Organisms Using Bacteriophage" 中的方法；或者，还可增强附 着于微生物的方法，例如PCT ;利申请No. PCT/US06/12371、题为 "Apparatus And Methods For Detecting Microorganisms Using Flagged Bacteriophage" 中所述的。还可使用任何其它基于噬菌体的鉴定方法。这些方法的实例公开于 以下公开出版物中美国专利1978年8月1日授权的4,104,126，其专利权人为David M. Young 1月10日授权的4,797,363,其专利权人为Teodorescu等 8月29日授权的4,861,709，其专利权人为Ulitzur等 2月4日授权的5,085,982，其专利权人为Douglas H. Keith 12月1日授权的5,168,037，其专利权人为Entis等 3月12日授权的5，498，525，其专利权人为Rees等 8月12日授权的5,656,424，其专利权人为Jurgensen等 10月21日授权的5,679,510，其专利权人为Ray等 3月3日授权的5,723,330，其专利权人为Rees等 10月20日授权的5,824,468，其专利权人为Scherer等1989年 1989年 1992年 1992年 1996年 1997年 1997年 1998年 1998年 1999年 1999年 1999年 1999年月30日授权的5,888,725，其专利权人为Michael F. Sanders月22日授权的5,914,240，其专利权人为Michael F. Sanders月28日授权的5,958,675，其专利权人为Wicks等11月16日授权的5,985,596,其专利权人为Stuart Mark Wilson2000年7月18日授权的6,090,541，其专利权人为Wicks等2001年7月24日授权的6，265，169 Bl，其专利权人为Cortese等2001年10月9日授权的6,300,061 Bl,其专利权人为Jacobs, Jr.等2002年3月12日授权的6,355,445 B2，其专利权人为Cherwonogrodzky 等2002年8月6日授权的6,428,976 Bl,其专利权人为Chang等2002年8月20日授权的6,436,652 Bl，其专利权人为Cherwonogrodzky 等2002年8月20日授权的6,436,661 Bl,其专利权人为Adams等2002年10月8日授权的6,461,833 Bl，其专利权人为Stuart Mark Wilson2003年2月25日授权的6,524,809 Bl，其专利权人为Stuart Mark Wilson2003年4月8日授权的6,544,729 B2,其专利权人为Sayler等2003年4月29日授权的6,555,312 Bl,其专利权人为Hiroshi Nakayama 等美国公开申请2002年9月12日公开的2002/0127547 Al,由Stefan Miller提交 2004年6月24日公开的2004/0121403 Al，由Stefan Miller提交 2004年7月15日7〉开的2004/0137430 Al,由Anderson等提交 2005年1月6日公开的2005/0003346 Al，由Voorhees等提交 外国专利公开1991年7月31日公开的EPO 0 439 354 A3,由Bittner等提交1994年3月31日公开的WO 94/06931，由Michael Frederick Sanders 提交2003年4月9日公开的EPO 1 300 082 A2,由Michael John Gasson提 交2003年10月23日公开的WO 03/087772 A2，由Madonna等提交 其它公开出版物:Favrin等，"Development and Optimization of a Novel Immunomagnetic Separation-Bacteriophage Assay for Detection of 5W附o"e〃" Serovar Enteritidis in Broth", Applied and Environmental Microbiology; 2001年1月，217-224页，第67巻，第1期。还可以使用任何其它基于噬菌体的方法。已描述了微生物检测方法，其对于所选生物是特异的、灵敏的、简单 的、迅速的和/或经济的，并具有许多新特点。应当理解，本说明书中公开 的具体实施方案用于举例的目的，而不应视为对以下权利要求书中所述的本发明进行限制。另外，很明显，在不背离本发明构思的前提下，本领域 技术人员可以对所述具体实施方案进行多种应用和修改。等同的结构和方 法可替换所述各种结构和方法；在某些情形下，本发明方法的子方法可以 不同的次序来进行；或者，可以使用多种不同的材料和元件。
权利要求
1.确定待测样品中靶标微生物存在与否的方法，所述方法包括(a)将所述样品与一定量的能附着于所述靶标微生物的噬菌体相组合，以产生暴露于噬菌体的样品；(b)向所述暴露于噬菌体的样品提供足以允许所述噬菌体附着于所述靶标微生物而抑制噬菌体在可能发生交叉反应的非靶标微生物中附着或复制的条件；以及(c)测定所述暴露于噬菌体的样品以检测噬菌体标志物存在与否，从而确定所述靶标微生物存在与否。
2. 权利要求l的方法，其中所述微生物是细菌，所述测定包括检 测所述噬菌体标志物来作为所述样品中存在所述耙标细菌的指示。
3. 权利要求l的方法，其中所述提供包括提供允许所述噬菌体感 染所述靶标微生物并在所述靶标微生物中复制的条件。
4. 权利要求l的方法，其中所述抑制包括抑制可能发生交叉反应 的细菌生长，而允许耙标细菌生长。
5. 权利要求4的方法，其中所述抑制包括向所述样品中添加抑制 性物质。
6. 权利要求5的方法，其中所述抑制性物质选自氯化钠、二价阳 离子、铁螯合剂、抗生素和金属化合物。
7. 权利要求l的方法，其中所述抑制包括使用附着于基质的选择 性结合剂来从所述样品中选择性除去可能存在的交叉反应微生物。
8. 权利要求7的方法，其中所述选择性除去包括使用选择性针对 非乾标细菌的抗体或嗟菌体。
9. 权利要求7的方法，其中所述基质包括微粒。
10. 权利要求l的方法，其中所述抑制包括选择性破坏可能发生交 叉反应的微生物。
11. 权利要求10的方法，其中所述破坏包括将选择性抗生素与所 述样品相组合。
12. 权利要求10的方法，其中所述破坏包括将所述样品与选择性 结合和/或感染一种或多种可能发生交叉反应之非靶标微生物的噬菌体 组合。
13. 权利要求l的方法，其中所述测定包括免疫测定。
14. 用于确定待测样品中靶标微生物存在与否的介质(220)，所述 介质包含特异性针对所述靶标微生物的噬菌体(224)，以及抑制噬菌体附着于可能发生交叉反应之非靶标微生物或在其中复制的抑制性物质(228 )。
15. 权利要求14的介质，其中所述抑制性物质选自特异性针对所 述交叉反应微生物的噬菌体、抗体、抗生素、抗菌化合物和化学品。
16. 权利要求15的培养基，其中所述化学品选自氯化钠和金属化 合物。
17. 用于确定待测试样品中靶标微生物存在与否的试剂盒(354)， 所述试剂盒包含能够附着或感染所述靶标微生物的噬菌体(368)，以及 能够抑制噬菌体附着于可能发生交叉反应之非靶标微生物或在其中复 制的抑制性物质(358)。
18. 权利要求17的试剂盒，其中所述噬菌体在一个容器(360)中， 所述抑制性物质在另一容器(356)中。
19. 权利要求17的试剂盒，其中所述噬菌体和抑制性物质在单个 容器中。
20. 权利要求17的试剂盒，其还包含免疫测定测试装置。
全文摘要
将待测试靶标微生物是否存在的样品暴露于噬菌体，并提供抑制噬菌体附着于可能发生交叉反应的非靶标微生物或在其中复制的条件。孵育该样品并进行测定以检测噬菌体标志物存在与否，从而确定靶标微生物存在与否。所述抑制可包括添加抑制性物质或者使用抑制方法。其可包括抑制可能发生交叉反应细菌生长而同时允许靶标细菌生长；使用选择性结合试剂来选择性除去或封闭可能存在的交叉反应细菌；或者选择性破坏可能发生交叉反应的细菌。
文档编号G01N33/50GK101595229SQ200780040281
公开日2009年12月2日 申请日期2007年10月31日 优先权日2006年10月31日
发明者布雷安娜·克里斯蒂娜·史密斯 申请人:小噬菌体公司