一种同时检测烟草中多种农药残留的方法
【专利摘要】一种同时检测烟草中多种农药残留的方法，其特征在于：是采用ASE加速溶剂萃取仪进行样品前处理以实现萃取和净化一步完成，是在底部放有滤膜的加速溶剂萃取池中，加入混合好的弗罗里硅土和石墨化炭黑（GCB），再加入混合好的样品，该样品为烟末和硅藻土的混合物，然后加入内标，再将萃取池上方空余地方用硅藻土填满；萃取完成之后，将萃取液混合均匀，过0.22μm有机相滤膜后进行液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）检测。本发明将样品的萃取和净化一步完成，大大简化了前处理的过程，是一种自动化程度高、操作简单、灵敏度高、准确性和重复性好的检测方法，能够同时检测烟草中多达92种农药的残留，符合多农残分析方法的要求。
【专利说明】—种同时检测烟草中多种农药残留的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于烟草多农药残留检测【技术领域】，主要涉及烟草中92种农药残留的检测技术。
【背景技术】
[0002]在烟草的种植和储存过程中，不可避免的会产生农药残留。随着人们对食品安全问题的日益关注，烟草作为一种吸食品，其农药残留问题作为吸烟安全的重要组成部分也受到了越来越多的重视。因此，检测烟草中的农药残留就具有十分重要的意义。多农药残留检测方法是农残检测的发展趋势。
[0003]加速溶剂萃取(ASE)是一种在较高的温度和压力下用于固体和半固体样品中目标物提取的方法，具有溶剂用量少、提取时间短、自动化程度高等优点。美国环保署(EPA)采用加压液相萃取的方法作为萃取土壤及其他固体、半固体样品中目标物的标准方法，标准号为US EPA Method 3545A。加速溶剂萃取也已经用于食品、蔬菜、水果等复杂基质的农药残留提取中。Pang G F等人通过加速溶剂萃取的方法提取了谷物中的农药残留，用石墨化炭黑、硅胶键合氨基固相萃取柱等净化了萃取液，然后用GC-MS和LC-MS/MS对目标物进行了检测。但这些方法都是将萃取、净化分两步进行，不仅耗费时间，还容易造成目标物的损失。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种萃取、净化一步完成的加压液相萃取方法，用来萃取烟草样品中的多种农药残留，并用LC-MS/MS进行检测、分析。本方法可将萃取步骤和净化步骤合二为一，大大的简化了前处理过程。
[0005]本发明的目的是通过以下技术方案来实现的:
一种同时检测烟草中多种农药残留的方法，是采用ASE加速溶剂萃取仪进行样品前处理以实现萃取和净化一步完成，是在底部放有滤膜的加速溶剂萃取池中，加入混合好的弗罗里硅土和石墨化炭黑GCB，再加入混合好的样品，该样品为烟末和硅藻土的混合物，然后加入内标，再将萃取池上方空余地方用硅藻土填满；萃取完成之后，将萃取液混合均匀，过
0.22 μπι有机相滤膜后进行液相色谱-串联质谱LC-MS/MS检测。
[0006]ASE加速溶剂萃取仪参数设定如下:萃取剂:乙腈；温度:120°C ;压力，1500 psi ；静态萃取时间，6 min ;静态循环次数:2次；冲洗体积，50%。
[0007]本发明的具体步骤如下:
1)标准溶液配制:分别取适量各农药标准品，用乙腈配制成0.5-100ng/mL浓度范围内9个浓度点的标准工作溶液，配制浓度为10 μ g/mL的内标(磷酸三苯酯，TPP)乙腈溶液；
2)样品前处理条件:将2g烟末和I g硅藻土在100 mL烧杯中混合均匀，在33mL不锈钢萃取池的底部放两片玻璃纤维滤膜，加入混合好的4 g弗罗里硅土和40 mg GCB，再加入混合好的样品,然后加入100 μ L内标工作液(10 μ g/mL)，将萃取池上方空余地方用硅藻土填满(约需4 g),萃取完成之后,将萃取液混合均匀,取I mL过0.22 μ m有机相滤膜；
3)基质匹配标准工作溶液的配制:将空白样品按2)中所述进行前处理，取ImL萃取液，氮吹近干，再分别用不同浓度的I mL标准工作溶液进行复溶；
4)样品分析条件:
液相色谱条件:色谱柱:Atlantis dC18 柱(150 mm X 2.1 mm X 3 μπι,美国 Waters公司);柱温:25。。;流速:0.2 mL/min ;进样量:10 μ L ;流动相A:0.1%甲酸水溶液；流动相B:乙腈；流动相洗脱梯度=B初始体积分数为10% ；0 -1 min, B线性增加至50% ；1 - 5 min,B 保持 50% ；5 - 16 min, B 线性增加至 60% ；16 - 25 min, B 线性增加至 80% ；25 - 30 min, B线性增加至95% ；30 - 40 min, B保持95% ；40 - 40.1 min, B回到初始状态，并保持10 min。
[0008]质谱条件:离子源:ESI ;碰撞气:6 psi ;气帘气:20 psi ;雾化气:50 psi ;辅助加热气:50 psi ;电喷雾电压:5500 V ;离子源温度:500 V ;入口电压:10 V ;出口电压:9 V ；扫描模式:正离子扫描；监测模式:多反应监测模式；驻留时间:20 ms。92种农药及内标的质谱参数见表I。
[0009]
【权利要求】
1.一种同时检测烟草中多种农药残留的方法，其特征在于:是采用ASE加速溶剂萃取仪进行样品前处理以实现萃取和净化一步完成，是在底部放有滤膜的加速溶剂萃取池中，加入混合好的弗罗里硅土和石墨化炭黑GCB，再加入混合好的样品，该样品为烟末和硅藻土的混合物，然后加入内标，再将萃取池上方空余地方用硅藻土填满；萃取完成之后，将萃取液混合均匀，过0.22 μ m有机相滤膜后进行液相色谱-串联质谱LC-MS/MS检测。
2.根据权利要求1所述的同时检测烟草中多种农药残留的方法，其特征在于:ASE加速溶剂萃取仪参数设定如下:萃取剂:乙腈?’温度:120°C ;压力，1500 psi ;静态萃取时间，6min ;静态循环次数:2次；冲洗体积，50%。
3.根据权利要求1所述的同时检测烟草中多种农药残留的方法，其特征在于:具体步骤如下: 1)标准溶液配制:分别取适量各农药标准品，用乙腈配制成0.5-100ng/mL浓度范围内标准工作溶液，配制浓度为10 μ g/mL的内标磷酸三苯酯乙腈溶液； 2)样品前处理条件:将2g烟末和I g硅藻土在100 mL烧杯中混合均匀，在33mL不锈钢萃取池的底部放两片玻璃纤维滤膜，加入混合好的4 g弗罗里硅土和40 mg GCB，再加入混合好的样品，然后加入100 μ L内标工作液，将萃取池上方空余地方用硅藻土填满，萃取完成之后，将萃取液混合均匀，取I mLS0.22 μ m有机相滤膜； 3)基质匹配标准工作溶液配制:将空白样品按2)中所述进行前处理，取ImL萃取液，氮吹近干，再分别用不同浓度 的I mL标准工作溶液进行复溶； 4)样品分析条件: 液相色谱条件:色谱柱=Atlantis dC18柱；柱温:25 °CV流速:0.2 mL/min ;进样量:10μ L ;流动相A:0.1%甲酸水溶液；流动相B:乙腈；流动相洗脱梯度:B初始体积分数为10% ；O -1 min, B 线性增加至 50% ；1- 5 min, B 保持 50% ；5 - 16 min, B 线性增加至 60% ; 16 - 25min, B 线性增加至 80% ；25 - 30 min, B 线性增加至 95% ；30 - 40 min, B 保持 95% ；40 - 40.1min, B回到初始状态，并保持10 min ； 质谱条件:离子源=ESI ;碰撞气:6 psi ;气帘气:20 psi ;雾化气:50 psi ;辅助加热气:50 psi ;电喷雾电压:5500 V ;离子源温度:500 °C ;入口电压:10 V ;出口电压:9 V ;扫描模式:正离子扫描；监测模式:多反应监测模式；驻留时间:20 ms ； 5)基质匹配标准工作曲线的制定及定量分析: 将各基质匹配标准工作溶液在上述液相色谱和质谱条件下进行检测，将得到的各农药的峰面积与内标物峰面积的比值与相应的农药的浓度进行回归分析，计算得出各农药的标准工作曲线及其回归方程； 其次将样品溶液在上述相同条件下进行检测，将得到的各农药的峰面积与内标物峰面积的比值带入相应的回归方程中，得到样品溶液中各农药的浓度，计算得出样品中各农药的残留量。
【文档编号】G01N30/88GK103698462SQ201410004317
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2014年1月6日 优先权日:2014年1月6日
【发明者】胡斌, 艾丹, 刘惠民, 潘立宁, 陈黎, 王冰, 谢复炜 申请人:中国烟草总公司郑州烟草研究院