一种人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒及其制备方法和包括其的人胰岛素检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒及其制备方法和包括所述人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒的人胰岛素检测试剂盒。本发明的人胰岛素单克隆抗体在与磁微粒交联之前，利用非离子表面活性剂进行了前处理。本发明的人胰岛素检测试剂盒具有检测灵敏度高、特异性强、药物干扰小、结果稳定性好等优点；从而可以大规模适用于糖尿病临床辅助诊断筛查。
【专利说明】一种人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒及其制备方法和包括其的人胰岛素检测试剂盒
【技术领域】
[0001]本发明涉及体外诊断医学检验领域。具体地说，本发明涉及一种人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒及其制备方法和包括其的人胰岛素检测试剂盒。
【背景技术】
[0002]胰岛素是51个氨基酸组成的蛋白激素，它由两条肽链，S卩，A链(含有21个氨基酸)和B链(含有30个氨基酸)通过二硫键连接组成，相对分子量为5808。胰岛素在分子构象上分为三大区域:分子内核，分子表面疏水区和分子表面极性区。分子内核都是由疏水残疾构成，包括大部分支链氨基酸残基和A6、All、A20、B19四个半胱氨酸残基。
[0003]胰岛素分泌后主要有两种用途。一部分是为了维持机体空腹血糖正常而存在的胰岛素，称作基础胰岛素；另一部分是为了降低餐后血糖升高，以及维持餐后血糖正常而存在的胰岛素，称作餐时胰岛素。餐时胰岛素的分泌其作用是抑制肝脏内源性葡萄糖的产生。机体在这种机制下受到保护，血糖在其他时候被控制在空腹状态水平左右，而餐后的血糖被控制在7.0mmol/L以下。
[0004]胰岛素的检测在临床中主要应用于:1型糖尿病和II型糖尿病的诊断、II型糖尿病患者口服糖尿病药物的选择、低血糖综合症诊断及胰岛素自身免疫综合征、胰岛素结构异常、膜岛素受体异常、NIDDM (Non-1nsulin-Dependent Diabetes Mellitus, NIDDM)合并高血压、胰腺炎、多囊卵巢综合征等疾病的诊断。
[0005]目前临床上胰岛素的检测方法主要有放射免疫分析法(RIA)、酶联免疫分析法(ELISA)、时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)、化学发光免疫分析法(CLIA)等。RIA方法由于试剂具有放射性，对操作者具有一定危害性，且操作复杂，试剂有效期短等缺点，早已不推荐作为胰岛素临床诊断；ELISA法的缺点在于无法准确进行定量，且批间差异较大，线性范围有限，无法持续监控患者胰岛素水平；TRFIA虽然测值较为准确，但依然存在反应时间较长，对环境要求较高，容易受空气尘埃影响，且多为96人份/盒，使用稀土标记物等缺点也使得此免疫方法无法大规模使用；CLIA法是一种较为先进的免疫学方法，具有反应时间短、灵敏度高、特异性好、线性范围宽、重复性好等优点，标记物稳定性好，在保证检测速度的前提下，也能达到检测高通量。根据目前胰岛素临床的应用情况，市场应用前景最好且诊断最可靠的方法学为CLIA法。
[0006]虽然目前中国市场上已有注册批准的胰岛素化学发光免疫分析法测定试剂盒，但多为进口试剂，成本较高，且试剂盒的制备方法和相关材料均作为保密资料，未被公开，不利于胰岛素检测在社区基层医院的推广。国产胰岛素试剂盒重复性较差，批间差异难控，且灵敏度较低，交叉反应率较高，临床应用前景较差。
[0007]因此，本领域急需一种具有检测灵敏度高、特异性好、重复性高等优点的人胰岛素检测试剂盒。
【发明内容】
[0008]本发明的目的是提供一种人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒及其制备方法，利用所述人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒检测人胰岛素的灵敏度大幅提高。
[0009]本发明还有一目的是提供包括上述人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒的人胰岛素检测试剂盒。
[0010]本发明再有一目的是提供利用本发明的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒或人胰岛素检测试剂盒检测人胰岛素的方法。
[0011]在第一方面，本发明提供一种人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒，所述人胰岛素单克隆抗体在与磁微粒交联之前，利用非离子表面活性剂进行前处理。
[0012]在优选的实施方式中，所述非离子表面活性剂是Plurafacli' LF221 (BASF公司)、或；Pluronicfr F68 (Sigma 公司)、或二者的组合。
[0013]在优选的实施方式中，所述非离子表面活性剂是Plurafac^ LF221 (BASF公司)和Pluronic? F68 (Sigma 公司)的组合。
[0014]在优选的实施方式中，所述人胰岛素单克隆抗体是罗氏公司的单克隆抗体(Roche，克隆号为BMl)。
[0015]在另一优选的实施方式中，所述前处理是将非离子表面活性剂与人胰岛素单克隆抗体进行温育；优选地，在2-8°C，温育30分钟。
[0016]在另一优选的实施方式中，进行前处理时，所述人胰岛素单克隆抗体溶液与非离子表面活性剂Plurafac? LF221溶液和Pluronic? F68溶液的浓度分别为l-3mg/ml、0.8-1.2wt% >0.8-1.2wt%,优选 2mg/ml、1.0wt % > 1.0wt %。
[0017]在另一优选的实施方式中，进行前处理时，人胰岛素抗体溶液与Plurafacli' LF221溶液或Pluronic? F68溶液的体积比为(8-10): (0.8-1.2);优选9:1的比例混合。
[0018]在另一优选的实施方式中，进行前处理时，所述人胰岛素单克隆抗体溶液与非离子表面活性剂Plurafac? LF221溶液和Pluronic? F68溶液的体积比为(6-10): (0.8-1.2): (0.8-1.2);优选 8:1:1。
[0019]在另一优选的实施方式中，所述磁微粒的主要成分是超顺磁性微粒，粒径为800nm~3 μ m,主要的活性功能基团为羧基、氨基或苯甲磺酰基。
[0020]在第二方面，本发明提供一种人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒的制备方法，所述方法包括以下步骤:
[0021]a)用非离子表面活性剂处理人胰岛素单克隆抗体；和
[0022]b)将步骤a)处理的人胰岛素单克隆抗体与磁微粒相交联。
[0023]在优选的实施方式中，步骤a)中的所述非离子表面活性剂是Plurafac?LF221 (BASF 公司)、或Pluronic^ F68 (Sigma)、或二者的组合。
[0024]在优选的实施方式中，所述非离子表面活性剂是Plurafac* LF221 (BASF公司)和Pluroniclf' F68 (Sigma)的组合。
[0025]在优选的实施方式中，所述人胰岛素单克隆抗体是罗氏公司的单克隆抗体(Roche，克隆号为BMl)。[0026]在另一优选的实施方式中，所述前处理是将非离子表面活性剂与人胰岛素单克隆抗体进行温育；优选地，在2-8°C，温育30分钟。
[0027]在另一优选的实施方式中，进行前处理时,人胰岛素抗体溶液与Plurafac* LF221溶液或Pluronic* F68溶液的体积比为(8-10): (0.8-1.2);优选9:1的比例混合。
[0028]在另一优选的实施方式中，进行前处理中，所述人胰岛素单克隆抗体溶液与非离子表面活性剂Plurafac? LF221溶液和Pluronic? F68溶液的浓度分别为l-3mg/ml、
0.8-1.2wt% >0.8-1.2wt%,优选 2mg/ml、1.0wt % > 1.0wt %。
[0029]在另一优选的实施方式中，进行前处理时，所述人胰岛素单克隆抗体溶液与非离子表面活性剂Plurafac? LF221溶液和Pluronic? F68溶液的体积比为(6-10): (0.8-1.2): (0.8-1.2);优选 8:1:1。
[0030]在第三方面，本发明提供本发明第一方面所述的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒，或本发明第二方面所述的方法制备的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒在检测人胰岛素或制备人胰岛素检测试剂盒中的用途。
[0031]在第三方面，本发明提供一种人胰岛素检测试剂盒，所述试剂盒装有:本发明第一方面所述的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒，或本发明第二方面所述的方法制备的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒。
[0032]在另一优选的实施方式中，所述人胰岛素检测试剂盒还装有:酶标记的人胰岛素单克隆抗体；胰岛素定标品；化学发光底物；和，洗涤液。
[0033]在另一优选的实施方式中，所述酶标记的人胰岛素单克隆抗体中的酶是碱性磷酸酶。
[0034]在另一优选的实施方式中，所述化学发光底物的主要成分为1，2_ 二氧杂环丁烷衍生物，为酶促化学发光底物。
[0035]在另一优选的实施方式中，所述1，2- 二氧杂环丁烷衍生物为AMPH) (3-(2’ -螺旋金刚烧)~4~甲氧基_4_ (3〃-憐酸氧基)苯_1，2- 二氧杂环丁烧)、Q)P_star。
[0036]在另一优选的实施方式中，所述的磁微粒试剂的主要成分是超顺磁性微粒，其粒径为800nm?3 μ m,主要的活性功能基团为羧基、氨基或苯甲磺酰基。
[0037]在第四方面，本发明提供一种检测人胰岛素的方法，所述方法包括利用本发明第一方面所述的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒，或本发明第二方面所述的方法制备的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒，或本发明第三方面所述的人胰岛素检测试剂盒检测样品中的人胰岛素。
[0038]在第五方面，本发明提供制备人胰岛素检测试剂盒的方法，所述的方法包括:
[0039]将根据本发明第二方面所述的方法制备人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒；酶标记的人胰岛素单克隆抗体；胰岛素定标品；化学发光底物；和洗涤液制成人胰岛素检测试剂盒。
[0040]在另一优选的实施方式中，所述的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒的制备，是将活性功能基团为羧基、氨基或苯甲磺酰基的磁微粒通过共价交联的方式与人胰岛素单克隆抗体中的裸露氨基交联反应，并通过含有0.5?2%的BSA溶液洗涤和封闭，最终贮存于含有0.1?1%的BSA溶液中，2?8°C保存备用。[0041]在另一优选的实施方式中，所述的磁微粒试剂稀释液的配方为:10~IOOmMρΗ7.2 ~7.8Tris-HCl、50 ~300mMNaCl、0.5 ~2% BSA,0.05 ~0.2% ProClin-300。
[0042]在另一优选的实施方式中，碱性磷酸酶标记胰岛素单克隆抗体的制备方法为戊二醛偶联法，具体操作为:将碱性磷酸酶溶于终浓度5%戊二醛溶液中，室温静置过夜，生理盐水透析后，加入胰岛素单克隆抗体，50mM pH9.6碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液中透析过夜，加入甘氨酸，室温反应2小时，等体积加入饱和硫酸铵，2~8°C 2小时，4000rpm离心去上清，沉淀溶于50mM pH7.40磷酸缓冲液中，对其透析过夜，加入等体积甘油，置于_20°C保存。
[0043]在另一优选的实施方式中，碱性磷酸酶标记胰岛素单克隆抗体的稀释液的配方为:10 ~IOOmM ρΗ7.2 ~7.8Tris_HCl、50 ~300mM NaCl.0.5 ~2 % BSA,5 ~15 % 甘油、
0.05 ~0.5%吐温-20、0.05 ~0.2% ProClin-300?
[0044]在另一优选的实施方式中，所述的胰岛素定标品的浓度分别为5~20 μ IU/mL和50 ~150 μ IU/mL。
[0045]在另一优选的实施方式中，所述的胰岛素定标品的稀释液配方为:10~IOOmMρΗ7.2 ~7.8Tri s-HCl，50 ~300mMNaCl，10 ~50% 牛血清，0.05 ~0.2% ProCl in-300。
[0046]在另一优选的实施方式中，所述的洗涤液配方为:10~IOOmM pH7.2~7.8Tris-HCl，50 ~300mM NaCl, 0.1 ~1% 曲拉通 Χ_100，0.05 ~0.2% ProClin-300。
[0047]应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
【专利附图】
【附图说明】
[0048]图1显示了用或不用非离子表面活性剂前处理人胰岛素抗体，对于检测人胰岛素的灵敏度的影响。
【具体实施方式】
[0049]发明人经过广泛而深入的研究，出乎意料地发现在人胰岛素单克隆抗体与磁微粒交联之前，利用非离子表面活性剂对人胰岛素单克隆抗体前处理能够显著提高最终所得人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒在检测人胰岛素时的灵敏度。在此基础上完成了本发明。
[0050]本发明的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒及其制备方法
[0051]基于以上出乎意料的发现，本发明首先提供一种人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒，所述人胰岛素单克隆抗体，例如罗氏公司的单克隆抗体(Roche，克隆号为BMl)在与磁微粒交联之前，利用非离子表面活性剂进行前处理。
[0052]相应地，本发明还提供了上文所述人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒的制备方法，所述方法包括以下步骤:
[0053]a)用非离子表面活性剂处理人胰岛素单克隆抗体；和
[0054]b)将步骤a)处理的人胰岛素单克隆抗体与磁微粒相交联。
[0055]本发明的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒可以用于检测人胰岛素或制备人胰岛素检测试剂盒，从而显著提高检测人胰岛素时的灵敏度。
[0056]本文所用的术语“非离子表面活性剂”具有与本领域普通技术人员通常理解的含义，即，在水溶液中不产生离子的表面活性剂。非离子表面活性剂溶于水时不发生解离，其分子中的亲油基团与离子型表面活性剂的亲油基团大致相同，其亲水基团主要是由具有一定数量的含氧基团(如羟基和聚氧乙烯链)构成。
[0057]在具体的实施方式中，本发明所用的非离子表面活性剂是Plurafac* LF221 (BASF公司)、或Pluronic? F68 (Sigma公司)、或二者的组合。在优选的实施方式中，本发明所用的非离子表面活性剂是Plurafac50 LF221 (BASF公司)和Pluronic? F68 (Sigma公司)的组合。
[0058]在本发明中，所述前处理是将非离子表面活性剂与人胰岛素单克隆抗体进行温育。在优选的实施方式中，在2-8°C，将非离子表面活性剂与人胰岛素单克隆抗体温育30分钟。
[0059]鉴于本发明的教导和现有技术，本领域普通技术人员可以合理确定上述前处理中，人胰岛素单克隆抗体溶液与非离子表面活性剂各自合适的浓度以及相互的比例。
[0060]例如，在具体的实施方式中，前处理中所述人胰岛素单克隆抗体溶液与非离子表面活性剂Plurafac? LF221溶液和Pluronic? F68溶液的浓度分别为l-3mg/ml、
0.8-1.2wt%,0.8-1.2wt%。在优选的实施方式中，所述人胰岛素单克隆抗体溶液与非离子表面活性剂Plurafac? LF221溶液和Pluronic? F68溶液的浓度分别为12mg/ml、l.0wt%、
1.0wt % ο
[0061]在一优选例中，进行前处理时，人胰岛素抗体溶液与Plurafac'K' LF221溶液或Pluronic、F68溶液的体积比为(8-10): (0.8-1.2);优选9:1的比例混合。
[0062]在另一具体的实施方式中，前处理中所述人胰岛素单克隆抗体溶液与非离子表面活性剂Plurafac? LF221溶液和Pluronic? F68溶液的体积比为(6-10): (0.8-1.2): (0.8-1.2)。在优选的实施方式中，所述人胰岛素单克隆抗体溶液与非离子表面活性剂Plurafac? LF221溶液和Pluronic? F68溶液的体积比为8:1:1。
[0063]同样，鉴于本发明的教导和现有技术，本领域普通技术人员可以合理确定所用的磁微粒。例如,在具体的实施方式中,磁微粒的主要成分是超顺磁性微粒,粒径为800nm?3 μ m，主要的活性功能基团为羧基、氨基或苯甲磺酰基。
[0064]在具体的实施方式中，所述的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒的制备，是将活性功能基团为羧基、氨基或苯甲磺酰基的磁微粒通过共价交联的方式与人胰岛素单克隆抗体中的裸露氨基交联反应，并通过含有0.5?2%的BSA溶液洗涤和封闭，最终贮存于含有
0.1?1%的BSA溶液中，2?8°C保存备用。
[0065]本发明的人胰岛素检测试剂盒
[0066]基于本发明的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒，本发明进一步提供了一种人胰岛素检测试剂盒，所述试剂盒装有本发明的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒。
[0067]鉴于本发明的教导和现有技术，本领域普通技术人员可以确定所述人胰岛素检测试剂盒中的其它组分，例如，在具体的实施方式中，本发明的人胰岛素检测试剂盒还可装有:酶标记的人胰岛素单克隆抗体；胰岛素定标品；化学发光底物；和洗涤液。
[0068]在优选的实施方式中，所述酶标记的人胰岛素单克隆抗体中的酶是碱性磷酸酶。
[0069]相应地，本发明的人胰岛素检测试剂盒中的所述化学发光底物的主要成分可以为1，2-二氧杂环丁烷衍生物，为酶促化学发光底物。在优选的实施方式中，所述1，2_ 二氧杂环丁烷衍生物为AMPH) (3-(2’-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3〃-磷酰氧基)苯_1，2_ 二氧杂环丁烷)、CDP-star。而本发明的人胰岛素检测试剂盒中的磁微粒试剂的主要成分可以是超顺磁性微粒，其粒径为800nm?3μ m,主要的活性功能基团为羧基、氨基或苯甲磺酰基。
[0070]本发明的人胰岛素检测试剂盒可如下所示进行制备，包括:
[0071]将本发明的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒；酶标记的人胰岛素单克隆抗体；胰岛素定标品；化学发光底物；和洗涤液制成人胰岛素检测试剂盒。
[0072]在具体的实施方式中，所述的磁微粒试剂稀释液的配方为:10?IOOmM pH7.2?
7.8Tris-HCl、50 ?300mM NaCl.0.5 ?2% BSA,0.05 ?0.2% ProClin-300。
[0073]在具体的实施方式中，碱性磷酸酶标记胰岛素单克隆抗体的制备方法为戊二醛偶联法，具体为:将碱性磷酸酶溶于终浓度5%戊二醛溶液中，室温静置过夜，生理盐水透析后，加入胰岛素单克隆抗体，50mM pH9.6碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液中透析过夜，加入甘氨酸，室温反应2小时，等体积加入饱和硫酸铵，2?8°C 2小时，4000rpm离心去上清，沉淀溶于50mM pH7.40磷酸缓冲液中，对其透析过夜，加入等体积甘油，置于_20°C保存。
[0074]在具体的实施方式中，碱性磷酸酶标记胰岛素单克隆抗体的稀释液的配方为:10 ?IOOmM ρΗ7.2 ?7.8Tris_HCl、50 ?300mM NaCl.0.5 ?2 % BSA,5 ?15 % 甘油、
0.05?0.5%吐温-20、0.05?0.2% ProClin-300 ;所述的胰岛素定标品的浓度分别为5?20 μ IU/mL和50?150 μ IU/mL ;所述的胰岛素定标品的稀释液配方为:10?IOOmMρΗ7.2 ?7.8Tris-HCl，50 ?300mMNaCl, 10 ?50%牛血清，0.05 ?0.2% ProClin-300 ;所述的洗涤液配方为:10?IOOmM pH7.2?7.8Tris-HCl, 50?300mM NaCl，(λ I?1%曲拉通Χ-100,0.05 ?0.2% ProClin-300。
[0075]本发明的人胰岛素的检测方法
[0076]在本发明的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒以及包含其的人胰岛素检测试剂盒的基础上，本发明还提供一种检测人胰岛素的方法，所述方法利用本发明的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒，或本发明的人胰岛素检测试剂盒检测样品中的人胰岛素。
[0077]本发明的优点
[0078]I)包含本发明人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒的试剂盒的检测灵敏度高，目前市场上的胰岛素试剂盒的最低检测限一般高于I μ IU/mL，相比之下，包含本发明人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒的试剂盒的最低检测限能达到0.2 μ IU/mL ；
[0079]2)本发明的试剂盒特异性强；胆红素、血红蛋白、乳糜颗粒、类风湿因子(RF)、抗核抗体(ANA)、人抗鼠抗体(HAMA)对胰岛素测定结果均无明显干扰；而人胰岛素原(Proinsulin)、C肽(C-P印tide)、类胰岛素生长因子I (IGF-1)、人生长激素(hGH)和胰高血糖素对胰岛素测定结果均无明显干扰；
[0080]3)本发明的试剂盒药物干扰小；对于目前市面上最常见的且临床使用最普遍的4种类胰岛素药物，即，诺和锐、优泌乐、来得时、诺和平，目前市场上主流商品化的胰岛素试剂盒都有着不同程度的干扰，交叉反应率达到3.6% -143%，相比之下，本发明的试剂盒检测300mIU/l浓度以下的诺和锐、优泌乐、来得时、诺和平几乎无明显干扰。
[0081]4)本发明的试剂盒测定结果稳定性好；碱性磷酸酶更稳定、测定结果的重复性更好，I, 2- 二氧杂环丁烷衍生物具有较长的发光时间，发光信号可稳定超过20分钟以上；信号强度高，便于光电倍增管检测；抗干扰能力强，不易污染。
[0082]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。
[0083]除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
[0084]实施例
[0085]材料
[0086]本发明实施例中所用的材料和试剂，包括人胰岛素单克隆抗体均是市售可得的。
[0087]本发明实施例中用作校准品的胰岛素购自Sigma公司，由科华公司自行稀释到相应浓度；血清样品来自上海长征医院临床检验科。
[0088]方法
[0089]1.胰岛素磁微粒试剂的制备
[0090]胰岛素磁微粒试剂稀释液配方:
[0091]
【权利要求】
1.一种人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒，其特征在于，所述人胰岛素单克隆抗体在与磁微粒交联之前，利用非离子表面活性剂进行前处理。
2.如权利要求1所述的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒，其特征在于，所述非离子表面活性剂是Plurafac? LF221 (BASF公司)、或Pluronic? F68 (Sigma公司)、或二者的组合。
3.如权利要求2所述的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒，其特征在于，所述非离子表面活性剂是Plurafac? LF221(BASF 公司)和Pluronic? F68 (Sigma 公司)的组合。
4.如权利要求1-3中任一项所述的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒，其特征在于，所述人胰岛素单克隆抗体是罗氏公司的单克隆抗体(Roche，克隆号为BMl)。
5.一种人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤: a)用非离子表面活性剂处理人胰岛素单克隆抗体；和 b)将步骤a)处理的人胰岛素单克隆抗体与磁微粒相交联。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤a)中的所述非离子表面活性剂是Plurafac? LF221 (BASF 公司)、或Pluronic? F68 (Sigma)、或二者的组合。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述非离子表面活性剂是Plurafac^LF221(BASF 公司)和Pluronic* F68 (Sigma)的组合。
8.如权利要求5-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述人胰岛素单克隆抗体是罗氏公司的单克隆抗体(Roche，克隆号为BMl)。
9.权利要求1-4中任一项所述的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒，或权利要求5-8中任一项所述的方法制备的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒在检测人胰岛素或制备人胰岛素检测试剂盒中的用途。
10.一种人胰岛素检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒装有:权利要求1-4中任一项所述的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒，或权利要求5-8中任一项所述的方法制备的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒。
11.一种检测人胰岛素的方法，其特征在于，所述方法包括利用权利要求1-4中任一项所述的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒，或权利要求5-8中任一项所述的方法制备的人胰岛素单克隆抗体交联磁微粒，或权利要求10所述的人胰岛素检测试剂盒检测样品中的人胰岛素。
【文档编号】G01N33/577GK104020288SQ201410273468
【公开日】2014年9月3日 申请日期:2014年6月18日 优先权日:2014年6月18日
【发明者】陈超, 彭波, 孙小禁, 李基
申请人:上海科华生物工程股份有限公司