一种基于金纳米簇模拟酶试剂盒及其制备方法及应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种基于金纳米簇模拟酶试剂盒及其制备方法及应用。本发明基于金纳米簇模拟酶试剂盒包括如下物质：96孔聚苯乙烯微孔板、T3甲状腺激素抗体或者乳腺癌抗体、金纳米簇标记的T3甲状腺激素抗体或者金纳米簇标记的乳腺癌抗体、样品稀释液、PBS缓冲溶液、终止缓冲溶液、显色底物。通过本发明方法，能得到不同颜色的金纳米颗粒溶液，这种纳米颗粒的颜色变化可根据双氧水的浓度进行调控，通过颜色以及吸光度值的变化达到了对T3甲状腺激素以及乳腺癌抗原的超痕量检测，并且具有非常高的灵敏度，本发明方法简单，成本较低，灵敏度高，能够实现快速准确的检测。
【专利说明】一种基于金纳米簇模拟酶试剂盒及其制备方法及应用
【技术领域】
[0001]本发明属于纳米生物传感以及生物检测【技术领域】，具体涉及一种基于金纳米簇模拟酶试剂盒的制备以及应用于T3甲状腺激素及乳腺癌抗原的快速检测方法。
【背景技术】
[0002]目前，乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，发病率占全身各种恶性肿瘤的7-10%，已成为威胁妇女健康的主要病因。由于癌症早期症状不明显，很难被及早发现，并且严重危害妇女健康，因而癌症的早期诊断和治疗仍是亟待解决的最重要的医学问题之一。T3甲状腺激素是维持机体正常代谢，促进生长发育所必需的重要激素。甲状腺激素主要是促进蛋白质合成，特别是使骨、骨骼肌、肝等蛋白质合成明显增加，这对幼年时的生长、发育具有重要意义。而甲状腺激素的过多或过少都会直接危害人体健康，促使疾病的产生。
[0003]金纳米簇由于具有荧光强度高、强抗光漂白的能力、良好生物兼容性、低毒性和好的荧光稳定性等优点而得到广泛关注。研宄表明金纳米簇具有一定的催化能力，在金纳米簇的存在下，H2O2能快速氧化3，3’，5，5’ -四甲基联苯胺(TMB)使其变蓝，基于此，我们建立一种双模检测的新方法，既可利用颜色变化对双氧水进行可视化半定量检测，又可以通过吸光度的大小对双氧水的准确含量进行定量检测。同样，金纳米颗粒由于制备简单方便、性质较稳定、生物相容性好等优点被广泛用于生命分析化学中。由氯金酸通过还原法可以方便地制备出各种不同粒径的纳米金颗粒，其颜色依直径大小而呈红色至蓝色。同时，金纳米颗粒随直径的变化呈现出不同的颜色，其紫外吸收峰也会相应发生变化。在金纳米颗粒的制备中，双氧水溶液是重要的反应物之一，而金纳米簇能催化金纳米颗粒制备条件中的双氧水使其分解，之后双氧水的浓度发生改变，金纳米颗粒就会呈现出不同的颜色，从红色、紫红色至蓝色。
【发明内容】
[0004]本发明的目的之一在于提供一种基于金纳米簇模拟酶试剂盒，它快速准确的检测T3甲状腺激素以及乳腺癌抗原，使金纳米簇成功取代传统的酶联免疫吸附反应中的生物酶，显著提高检测的灵敏度以及稳定性。
[0005]本发明基于金纳米簇模拟酶试剂盒，它包括如下物质:96孔聚苯乙烯微孔板、T3甲状腺激素抗体或者乳腺癌抗体、金纳米簇标记的T3甲状腺激素抗体或者金纳米簇标记的乳腺癌抗体、样品稀释液、PBS缓冲溶液、终止缓冲溶液、显色底物。
[0006]具体的，所述金纳米簇标记的T3甲状腺激素抗体是:使用活化剂EDC和NHS对金纳米簇进行活化之后，将T3甲状腺激素抗体加入到活化后的金纳米簇溶液中，反应2小时，透析处理24小时所得；所述金纳米簇标记的乳腺癌抗体是:使用活化剂EDC和NHS对金纳米簇进行活化之后，将乳腺癌抗体加入到活化后的金纳米簇溶液中，反应2小时，透析处理24小时所得。
[0007]具体的，所述样品稀释液是:将T3甲状腺激素溶液首先用NaOH溶液进行稀释之后，再用pH = 7.2—7.4、浓度为0.0lmol/L的PBS缓冲溶液稀释成浓度为2X10_12至2X 10_16mg/mL的溶液；或者是:将乳腺癌抗原用pH = 7.2—7.4、浓度为0.01mol/L的PBS缓冲溶液稀释成浓度为7.52X 10_9至7.52X10 _14U/mL的溶液。
[0008]具体的，所述显色底物是以浓度为4mmol/L的柠檬酸三钠溶液、浓度为320 ymol/L的双氧水溶液和浓度为2mmol/L的氯金酸溶液所制备的金纳米颗粒溶液，三种溶液的体积比为1:1:1。
[0009]具体的，所述终止缓冲溶液为浓度为lmg/mL的BSA溶液。
[0010]本发明的目的之二在于提供上述基于金纳米簇模拟酶试剂盒的制备方法，它包括如下步骤:
[0011](I)将T3甲状腺激素抗体或者乳腺癌抗体接到96孔聚苯乙烯微孔板上，4°C下反应过夜，三次PBS缓冲溶液冲洗后，加入终止缓冲溶液即浓度为lmg/mL的BSA溶液反应I小时；
[0012](2)三次PBS缓冲溶液冲洗后，再在不同微孔板中加入各种浓度的样品稀释液，即稀释成浓度为2 X 10_12至2 X 1-1WmL的T3甲状腺激素溶液或者稀释成浓度为7.52 X 10_9至7.52X 10_14U/mL的乳腺癌抗原溶液，反应3小时；
[0013](3)三次PBS缓冲溶液冲洗后，再对应加入金纳米簇标记的T3甲状腺激素抗体或者金纳米簇标记的乳腺癌抗体，反应3小时；
[0014](4)再用PBS缓冲溶液冲洗三次，然后加入柠檬酸三钠溶液以及双氧水溶液，反应40分钟后，加入氯金酸溶液；30分钟后，观察不同微孔板中溶液颜色的变化，与对比实验中生成的显色底物金纳米颗粒溶液即柠檬酸三钠溶液、双氧水溶液和氯金酸溶液所制备的金纳米颗粒溶液的颜色进行对比；并用紫外分光光度计在波长450nm-700nm的范围内测其谱图的变化，并记录不同浓度的样品稀释液在波长550nm处的吸光度值，与对照试验中生成的显色底物金纳米颗粒溶液的吸光度值进行对比，即能得到检测结果，实现T3甲状腺激素以及乳腺癌抗原的快速检测。
[0015]具体的，步骤(3)所述金纳米簇标记的T3甲状腺激素抗体是:使用活化剂EDC和NHS对金纳米簇进行活化之后，将T3甲状腺激素抗体加入到活化后的金纳米簇溶液中，反应2小时，透析处理24小时所得；步骤(3)所述金纳米簇标记的乳腺癌抗体是:使用活化剂EDC和NHS对金纳米簇进行活化之后，将乳腺癌抗体加入到活化后的金纳米簇溶液中，反应2小时，透析处理24小时所得。
[0016]具体的，步骤中(4)所述加入柠檬酸三钠溶液、双氧水溶液以及氯金酸溶液中，柠檬酸三钠溶液浓度为4mmol/L，双氧水溶液浓度为320 μ mol/L，氯金酸溶液浓度为2mmol/L，三种溶液的体积比为1:1:1 ;步骤(4)中所述对比实验中生成的显色底物金纳米颗粒溶液是:以浓度为4mmol/L的梓檬酸三钠溶液、浓度为320 ymol/L的双氧水溶液和浓度为2mmol/L的氯金酸溶液所制备的金纳米颗粒溶液，三种溶液的体积比为1:1:1。
[0017]本发明的目的之三在于提供上述基于金纳米簇模拟酶试剂盒的制备方法的应用，即应用于人体血清中的T3甲状腺激素含量检测或者人体血清中的乳腺癌抗原含量检测。
[0018]具体的，对T3甲状腺激素含量的检测限值为2X 10_15mg/mL ;对乳腺癌抗原的检测限值为 7.52Xl(T13U/mL。
[0019]本发明利用金纳米簇催化并分解双氧水的特性，把金纳米簇与金纳米颗粒这两种纳米材料有机的结合起来，利用金纳米簇取代酶联免疫吸附反应中的生物酶，再加上抗体与抗原的特异性结合，形成了“三明治”的夹层结构，成功制备出检测T3甲状腺激素以及乳腺癌抗原的模拟酶试剂盒，且现象明显，操作简便，灵敏度高，能有效准确的测定出人血清中T3甲状腺激素的含量以及乳腺癌抗原的浓度。
[0020]通过本发明的方法处理，能得到不同颜色的金纳米颗粒溶液，这种纳米颗粒的颜色变化可根据双氧水的浓度进行调控，通过颜色以及吸光度值的变化达到了对T3甲状腺激素以及乳腺癌抗原的超痕量检测，并且具有非常高的灵敏度，与现有技术相比，本发明方法简单，成本较低，灵敏度高，能够实现快速准确的检测，并且对于其它生物大分子以及疾病的检测都具有十分重要的参考价值，具有很广阔的应用前景。
【专利附图】
【附图说明】
[0021]图1为本发明实施例1制备的在不同浓度的双氧水条件下的金纳米颗粒的紫外光谱图。其中，随着双氧水浓度的增大，金纳米颗粒的吸光度值逐渐变大。
[0022]图2为本发明实施例1制备的在不同浓度的双氧水条件下的金纳米颗粒在550nm处的吸光度值变化曲线图。在双氧水的浓度小于320 ymol/L时，吸光度值随着双氧水浓度的增大而逐渐升高，但当双氧水的浓度大于320 ymol/L时，其吸光度值不再发生明显的变化。因此我们选取双氧水的浓度为320 μ mol/L时作为制备试剂盒时的最佳检测浓度。
[0023]图3为本发明实施例1制备的在不同浓度的双氧水条件下的金纳米颗粒的颜色变化对照图片。在双氧水的浓度小于320 ymol/L时，制备的金纳米颗粒为蓝色，此时金纳米簇颗粒已经发生了团聚，但当双氧水的浓度大于320 μ mol/L时，制备的金纳米颗粒为红色，此时所得为分散均匀的金纳米颗粒溶液；图3中，从左至右，左边4个溶液的颜色从无色逐渐变为蓝色，从第5个之后变为红色，并且颜色逐渐加深。
[0024]图4为本发明实施例1制备的在双氧水的浓度大于320 ymol/L时制备的红色溶液的金纳米颗粒的透射电镜图。从图4中可以看出，制备的金纳米颗粒分散均匀。
[0025]图5为本发明实施例1制备的在双氧水的浓度小于320 ymol/L时制备的蓝色溶液的金纳米颗粒的透射电镜图。从图5中可以看出，制备的金纳米颗粒已发生了明显的团聚现象。
[0026]图6为本发明实施例4中对T3甲状腺激素标准溶液的检测时的显色底物以及对比实验的显色底物在550nm处的吸光度值柱状图。图6中，每组柱状中左边黑色柱状图表示对比实验的显色底物在550nm处的吸光度值大小。
[0027]图7为本发明实施例4中对T3甲状腺激素标准溶液的检测时的显色底物以及对比实验显色底物的颜色变化对照图片。图7中，上一排的溶液为对比实验显色底物。
[0028]图8为本发明实施例4中对T3甲状腺激素标准溶液的检测时的显色底物以及对比实验的显色底物在550nm处吸光度值变化的标准曲线图。
[0029]图9为本发明实施例5中将基于金纳米簇模拟酶试剂盒应用于10个不同人血清中T3甲状腺激素含量检测时显色底物以及对比实验显色底物的颜色变化对照图片。图9中，上一排的溶液为对比实验显色底物。
[0030]图10为本发明实施例6中对乳腺癌抗原标准溶液检测时的显色底物以及对比实验的显色底物在550nm处的吸光度值柱状图。图10中，每组柱状中左边黑色柱状图表示对比实验的显色底物在550nm处的吸光度值大小。
[0031]图11为本发明实施例6中对乳腺癌抗原标准溶液的检测时的显色底物以及对比实验显色底物的颜色变化对照图片。图11中，上一排的溶液为对比实验显色底物。
[0032]图12为本发明实施例6中对乳腺癌抗原标准溶液的检测时的显色底物以及对比实验的显色底物在550nm处吸光度值变化的标准曲线图。
[0033]图13为本发明实施例7中将基于金纳米簇模拟酶试剂盒应用于5个不同人血清中乳腺癌抗原含量检测时显色底物以及对比实验显色底物的颜色变化对照图片。上一排的溶液为对比实验显色底物。
【具体实施方式】
[0034]下面结合具体实施例和附图对本发明作进一步详细的描述。
[0035]实施例1:
[0036]取9支离心管，分别向其中加入100 μ L柠檬酸三钠溶液作为稳定剂，之后分别加入 100 μ L 不同浓度的双氧水溶液(浓度为 120、160、200、240、280、320、360、400、440 μ mo I/L)、100 μ L氯金酸溶液(浓度为2mmol/L)。加入的梓檬酸三钠溶液、氯金酸溶液、双氧水溶液的体积比为1:1:1。置于室温下反应，15分钟后，观察溶液颜色变化，此时所制得溶液即为金纳米颗粒溶液，所制得的金纳米颗粒在波长550nm左右有明显的吸收峰。用紫外分光光度计在波长450nm-700nm的范围内检测其紫外光谱图的变化，并记录在不同浓度的双氧水的条件下550nm波长处的吸光度值。图1、图2、图3、图4、图5为本实施例制备的在不同浓度下的金纳米颗粒的实验特性图。
[0037]从图中可得出，当双氧水的浓度小于320 ymol/L，随着双氧水浓度的增大，生成的金纳米颗粒的吸光度值逐渐增大，此时溶液为蓝色，已经发生了明显的团聚，当其浓度到320 μ mol/L时随着双氧水浓度的增大，其吸光度值不再发生明显的变化，此时溶液为红色，所得溶液为分散均匀的金纳米颗粒。
[0038]实施例2:
[0039]取5只离心管，分别向其中加入浓度为10mmol/L、8mmol/L、4mmol/L、2mmol/L、lmmol/L的梓檬酸三钠溶液，之后再加入浓度为320 μ mol/L的双氧水溶液和浓度为2mmol/L的氯金酸溶液。加入的柠檬酸三钠溶液、氯金酸溶液、双氧水溶液的体积比为1:1 do 15分钟后，观察溶液颜色变化。随着柠檬酸三钠溶液浓度的变化，制备的金纳米颗粒颜色也不相同。当柠檬酸三钠溶液的浓度为2mmol/L时，溶液为无色，为4mmol/L时，溶液为红色，因此可以说，当朽1檬酸三钠的浓度为4mmol/L时，为最佳浓度。
[0040]实施例3:
[0041]取5只离心管，分别向其中加入浓度为0.004mol/L的梓檬酸三钠溶液和浓度为320 μ mol/L的双氧水溶液，之后再分别向其中加入浓度为lmmol/L、l.5mmol/L、2mmol/L、
2.5mmol/L、3.0mmoI/L的氯金酸溶液。加入的柠檬酸三钠溶液、氯金酸溶液、双氧水溶液的体积比为1:1:1。15分钟后，观察溶液颜色变化。当氯金酸溶液的浓度小于2mmol/L时，溶液的颜色为紫红色，当氯金酸溶液的浓度大于2mmol/L时，溶液变为蓝色，因此，当氯金酸溶液的浓度为2mmol/L时，为最佳浓度。
[0042]实施例4:
[0043]参见图6、图7、图8，用于T3甲状腺激素的检测。首先在96孔聚苯乙烯微孔板中加入T3甲状腺激素抗体，40C反应过夜后，用PBS缓冲溶液冲洗三次，加入BSA溶液反应I小时后，用PBS缓冲溶液冲洗三次，再加入不同浓度的T3甲状腺激素(2 X 10_12?2 X 10 _16mg/mL)反应3小时，再次PBS缓冲溶液冲洗三次之后，加入已经连接上金纳米簇的T3甲状腺激素抗体反应3小时，同样用PBS缓冲溶液冲洗三次，加入100 μ L浓度为4mM的柠檬酸三钠溶液和100 μ L浓度为320 μ mol/L的双氧水溶液反应40分钟，再加入100 μ L浓度为2mmol/L的氯金酸溶液。30分钟后，其紫外吸收谱图以及颜色变化对照图如图6、图7所示。当T3甲状腺激素的浓度为O时，微孔板中金纳米颗粒的颜色为红色，此时在微孔板中并没有形成三明治的夹心结构，即没有连接上有催化作用的金纳米簇对双氧水进行分解，生成了红色溶液，而在不同浓度的T3甲状腺激素的条件下，由于T3甲状腺激素抗体与抗原的特异性结合作用，在微孔板中形成了夹心结构，在生成金纳米颗粒时，金纳米簇对双氧水溶液起到了分解的作用，因此形成了蓝色溶液。当T3甲状腺激素的浓度为2X10_16mg/mL时，此时T3甲状腺激素的浓度已经很小，所连接上的金纳米簇的量已经很少，无法分解双氧水，达到了对T3甲状腺激素的检测限，其检测限为2 X 10_15mg/mL。
[0044]实施例5:
[0045]用于人血清中T3甲状腺激素含量的检测。首先在96孔聚苯乙烯微孔板中加入T3甲状腺激素抗体，4°C反应过夜后，用PBS缓冲溶液冲洗三次，加入BSA溶液反应I小时后，用PBS缓冲溶液冲洗三次再加入稀释16倍的人血清。反应3小时，再次PBS缓冲溶液冲洗三次之后，加入已经连接上金纳米簇的T3甲状腺激素抗体反应3小时，同样用PBS缓冲溶液冲洗三次，加入100 μ L浓度为4mM的柠檬酸三钠溶液和100 μ L浓度为320 μ mol/L的双氧水溶液反应40分钟，再加入100 μ L浓度为2mmol/L的氯金酸溶液。30分钟后，其颜色变化如图9所示，当T3甲状腺激素的浓度为O时，微孔板中金纳米颗粒的颜色为红色，而在加入不同人血清之后的微孔板中，溶液颜色变化不同，即不同人血清中的T3甲状腺激素含量不同。通过实验检测得到的10个不同人血清中甲状腺激素的含量为3.06X10_7mg/mL、7.47 X 10 6mg/mL、1.8X10 7mg/mL、1.47 X 10 6mg/mL、2.32 X 10 6mg/mL、1.59 X 10 6mg/mL、5.12 X 10 7mg/mL、4.87 X 10 7mg/mL、2.55 X 10 7mg/mL、7.44 X 10 7mg/mL。
[0046]实施例6:
[0047]参见图10、图11、图12，用于乳腺癌抗原的检测。首先在96孔聚苯乙烯微孔板中加入乳腺癌抗体，4°C反应过夜后，用PBS缓冲溶液冲洗三次，加入BSA溶液反应I小时后，用PBS缓冲溶液冲洗三次再加入不同浓度的乳腺癌抗原(7.52X 10_9—7.52 X 10_14U/mL)反应3小时，再次PBS缓冲溶液冲洗三次之后，加入已经连接上金纳米簇的乳腺癌抗体反应3小时，同样用PBS缓冲溶液冲洗三次，加入100 μ L浓度为4mM的柠檬酸三钠溶液和100 μ L浓度为320 μ mol/L的双氧水溶液反应40分钟，再加入100 μ L浓度为2mmol/L的氯金酸溶液。30分钟后，其紫外吸收光谱图以及颜色变化对照如图10、图11所示，当乳腺癌抗原的浓度为O时，微孔板中金纳米颗粒的颜色为红色，此时在微孔板中并没有形成三明治的夹心结构，即没有连接上有催化作用的金纳米簇对双氧水进行分解，生成了红色溶液，而在不同浓度的乳腺癌抗原的条件下，由于乳腺癌抗体与抗原的特异性结合作用，在微孔板中形成了夹心结构，在生成金纳米颗粒时，金纳米簇对双氧水溶液起到了分解的作用，因此形成了蓝色溶液。当乳腺癌抗原的浓度为7.52X 10_14U/mL时，此时乳腺癌抗原的浓度已经很小，所连接上的金纳米簇的量已经很少，无法分解双氧水，达到了对乳腺癌抗原的检测限，其检测限为 7.52Xl(T13U/mL。
[0048]实施例7:
[0049]用于人血清乳腺癌抗原含量的检测。首先在5个96孔聚苯乙烯微孔板孔中分别加入乳腺癌抗体，4°C反应过夜后，用PBS缓冲溶液冲洗三次，加入BSA溶液反应I小时后，用PBS缓冲溶液冲洗三次再加入稀释1ltl倍的人血清。反应3小时，再次PBS缓冲溶液冲洗三次之后，加入已经连接上金纳米簇的乳腺癌抗体反应3小时，同样用PBS缓冲溶液冲洗三次，加入100 μ L浓度为4mM的柠檬酸三钠溶液和100 μ L浓度为320 μ mol/L的双氧水溶液反应40分钟，再加入100 μ L浓度为2mmol/L的氯金酸溶液。30分钟后，其颜色变化如图13所示，当乳腺癌抗原的浓度为O时，微孔板中金纳米颗粒的颜色为红色，而在加入不同人血清之后的微孔板中，溶液颜色变化不同，即不同人血清中的乳腺癌抗原含量不同。通过实验检测得到的5个不同人血清中乳腺癌抗原的含量为2.7X 10_1QU/M1、1.08X 10_1QU/mL、
3.79X 10_lclU/mL、3.24X 10_lclU/mL、5.19 X 10_lclU/mL。
【权利要求】
1.一种基于金纳米簇模拟酶试剂盒，其特征在于包括如下物质:96孔聚苯乙烯微孔板、T3甲状腺激素抗体或者乳腺癌抗体、金纳米簇标记的T3甲状腺激素抗体或者金纳米簇标记的乳腺癌抗体、样品稀释液、PBS缓冲溶液、终止缓冲溶液、显色底物。
2.根据权利要求1所述基于金纳米簇模拟酶试剂盒，其特征在于:所述金纳米簇标记的T3甲状腺激素抗体是:使用活化剂EDC和NHS对金纳米簇进行活化之后，将T3甲状腺激素抗体加入到活化后的金纳米簇溶液中，反应2小时，透析处理24小时所得；所述金纳米簇标记的乳腺癌抗体是:使用活化剂EDC和NHS对金纳米簇进行活化之后，将乳腺癌抗体加入到活化后的金纳米簇溶液中，反应2小时，透析处理24小时所得。
3.根据权利要求1所述基于金纳米簇模拟酶试剂盒，其特征在于:所述样品稀释液是:将T3甲状腺激素溶液首先用NaOH溶液进行稀释之后，再用pH = 7.2—7.4、浓度为.0.01mol/L的PBS缓冲溶液稀释成浓度为2 X 10_12至2 X 10 _16mg/mL的溶液；或者是:将乳腺癌抗原用PH = 7.2—7.4、浓度为0.01mol/L的PBS缓冲溶液稀释成浓度为7.52X 10_9至.7.52Xl(T14U/mL 的溶液。
4.根据权利要求1所述基于金纳米簇模拟酶试剂盒，其特征在于:所述显色底物是以浓度为4mmol/L的柠檬酸三钠溶液、浓度为320 μ mo I/L的双氧水溶液和浓度为2mmol/L的氯金酸溶液所制备的金纳米颗粒溶液，三种溶液的体积比为1:1:1。
5.根据权利要求1所述基于金纳米簇模拟酶试剂盒，其特征在于:所述终止缓冲溶液为浓度为lmg/mL的BSA溶液。
6.一种如权利要求1所述基于金纳米簇模拟酶试剂盒的制备方法，其特征在于包括如下步骤: (1)将T3甲状腺激素抗体或者乳腺癌抗体接到96孔聚苯乙烯微孔板上，4°C下反应过夜，三次PBS缓冲溶液冲洗后，加入终止缓冲溶液即浓度为lmg/mL的BSA溶液反应I小时； (2)三次PBS缓冲溶液冲洗后，再在不同微孔板中加入各种浓度的样品稀释液，即稀释成浓度为2 X 10_12至2 X 10 _16mg/mL的T3甲状腺激素溶液或者稀释成浓度为7.52X 10_9至.7.52X 10_14U/mL的乳腺癌抗原溶液，反应3小时； (3)三次PBS缓冲溶液冲洗后，再对应加入金纳米簇标记的T3甲状腺激素抗体或者金纳米簇标记的乳腺癌抗体，反应3小时； (4)再用PBS缓冲溶液冲洗三次，然后加入柠檬酸三钠溶液以及双氧水溶液，反应40分钟后，加入氯金酸溶液；30分钟后，观察不同微孔板中溶液颜色的变化，与对比实验中生成的显色底物金纳米颗粒溶液即柠檬酸三钠溶液、双氧水溶液和氯金酸溶液所制备的金纳米颗粒溶液的颜色进行对比；并用紫外分光光度计在波长450nm-700nm的范围内测其谱图的变化，并记录不同浓度的样品稀释液在波长550nm处的吸光度值，与对比实验中生成的显色底物金纳米颗粒溶液的吸光度值进行对比，即能得到检测结果，实现T3甲状腺激素以及乳腺癌抗原的快速检测。
7.根据权利要求6所述基于金纳米簇模拟酶试剂盒的制备方法，其特征在于:步骤(3)所述金纳米簇标记的T3甲状腺激素抗体是:使用活化剂EDC和NHS对金纳米簇进行活化之后，将T3甲状腺激素抗体加入到活化后的金纳米簇溶液中，反应2小时，透析处理24小时所得；步骤(3)所述金纳米簇标记的乳腺癌抗体是:使用活化剂EDC和NHS对金纳米簇进行活化之后，将乳腺癌抗体加入到活化后的金纳米簇溶液中，反应2小时，透析处理24小时所 得。
8.根据权利要求6所述基于金纳米簇模拟酶试剂盒的制备方法，其特征在于:步骤(4)所述加入柠檬酸三钠溶液、双氧水溶液以及氯金酸溶液中，柠檬酸三钠溶液浓度为4mmol/L，双氧水溶液浓度为320 ymol/L，氯金酸溶液浓度为2mmol/L，三种溶液的体积比为1:1:1 ;步骤(4)中所述对比实验中生成的显色底物金纳米颗粒溶液是:以浓度为4mmol/L的柠檬酸三钠溶液、浓度为320 μ mo I/L的双氧水溶液和浓度为2mmol/L的氯金酸溶液所制备的金纳米颗粒溶液，三种溶液的体积比为1:1:1。
9.一种如权利要求6所述基于金纳米簇模拟酶试剂盒的制备方法的应用，其特征在于:应用于人体血清中的T3甲状腺激素含量检测或者人体血清中的乳腺癌抗原含量检测。
10.根据权利要求9所述基于金纳米簇模拟酶试剂盒的制备方法的应用，其特征在于:对T3甲状腺激素含量的检测限值为2X10-15mg/mL;对乳腺癌抗原的检测限值为.7.52Xl(T13U/mL0
【文档编号】G01N33/78GK104502614SQ201510037912
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2015年1月26日 优先权日:2015年1月26日
【发明者】黄昊文, 赵倩, 陈甚娜, 张凌阳, 周媛, 刘兰芳 申请人:湖南科技大学