一种纳米探针诱导酶聚合放大电化学核酸适体传感器检测癌胚抗原的方法与流程

文档序号:12155919阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种纳米探针诱导酶聚合放大的电化学核酸适体传感器检测癌胚抗原的方法,其特征在于,包括如下步骤:

步骤一、纳米探针的制备:在金纳米粒子溶液中缓慢加入5’末端巯基标记癌胚抗原核酸适体信号探针溶液,反应后陈化,然后离心、洗涤、离心、重悬;

步骤二、电化学传感器的制备:(a)金电极的清洗:以NaBH4溶液浸泡后打磨,然后超声清洗;(b)自清洁表面的制备:室温下在金电极表面自组装3’末端标记巯基的癌胚抗原核酸适体捕获探针溶液,然后用HS-(CH2)11-EG2-OH室温下浸泡封闭,得到自清洁表面;(c)纳米探针的修饰:在自清洁表面滴加癌胚抗原溶液反应不少于1小时,滴加纳米探针溶液反应不少于1小时;(d)末端延伸:在末端脱氧核糖核酸转移酶的作用下,在步骤(c)修饰到金电极表面的5’端巯基标记癌胚抗原核酸适体信号探针的3’端延伸生物素标记的核酸长链,加入亲和素标记的辣根过氧化物酶反应不少于15min,通过生物素-亲和素相互作用,在电极表面修饰辣根过氧化物酶,制得电化学传感器;

步骤三、电化学信号检测:将制备完成的电化学传感器放在三电极体系中以循环伏安法和时间电流曲线法进行检测,得到电化学信号。

2.如权利要求1所述的纳米探针诱导酶聚合放大的电化学核酸适体传感器检测癌胚抗原的方法,其特征在于,步骤一中,采用的重悬溶剂为含有1wt%吐温的PBS溶液,其中金纳米粒子的粒径为30nm,其溶液浓度为1nmol/L;5’末端巯基标记癌胚抗原核酸适体信号探针的溶液浓度为0.5-15μmol/L。

3.如权利要求1所述的纳米探针诱导酶聚合放大的电化学核酸适体传感器检测癌胚抗原的方法,其特征在于,步骤二(b)中,3’端巯基标记癌胚抗原捕获探针的浓度为0.5-5μmol/L,自组装时间不小于4小时;HS-(CH2)11-EG2-OH的浓度为0.5-2.5mmol/L,浸泡时间不小于4小时。

4.如权利要求1所述的纳米探针诱导酶聚合放大的电化学核酸适体传感器检测癌胚抗原的方法,其特征在于,步骤二(d)中,末端脱氧核糖核酸转移酶的浓度为1U,生物素标记的核苷酸为生物素标记的腺嘌呤脱氧核糖核苷酸,浓度为5.7μmol/L,延伸时间不小于1小时。

5.如权利要求1所述的纳米探针诱导酶聚合放大的电化学核酸适体传感器检测癌胚抗原的方法,其特征在于,步骤三中,电化学检测体系为三电极体系,工作电极为金电极,参比电极为Ag/AgCl电极,对电极为铂丝电极,其中,电解液为3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液,循环伏安法扫描高电位为0.7V,低电位为0V,扫描速度为0.1V/s;时间电流曲线法的扫描电位为0.1V,扫描时间为100s。

6.如权利要求1所述的纳米探针诱导酶聚合放大的电化学核酸适体传感器检测癌胚抗原的方法,其特征在于,步骤一和二中,所述核酸适体序列如下:所述的5’末端巯基标记癌胚抗原核酸适体信号探针序列为:5’-SH-TTT TTT TTT TCC CAT AGG GAA GTG GGG GA-3’;所述的3’末端巯基标记癌胚抗原核酸适体捕获探针序列为:5’-TTA ACT TAT TCG ACC ATA TTT TTT TTT T-SH-3’。

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