，浓度为0.0lM?0.05Μ的磷酸盐(PB)缓冲液、
[0046]ρΗ7.2?7.8，浓度为0.0lM?0.04Μ的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液；
[0047]步骤(2)所述封闭液为牛血清白蛋白、脱脂奶粉、赖氨酸或动物血清之中的任一种或其中2-3种的混合物，该封闭液的质量体积浓度(g/ml)为2-5% ;所述动物血清为胎牛血清或马血清，封闭剂配置缓冲溶液为偶联缓冲液；
[0048]所述封闭剂配置缓冲液选自以下缓冲液中的任一种:
[0049]ρΗ7.7?8.0，浓度为0.0lM?0.04Μ的磷酸盐(PB)缓冲液、
[0050]ρΗ7.6 ?8.2，浓度为 0.0lM ?0.05Μ 的 BS 缓冲液、
[0051]ρΗ7.9?8.3，浓度为0.0lM?0.05Μ的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液；
[0052]步骤⑵中采用的清洗缓冲液选自以下缓冲液中的任一种或含0.08-0.15%吐温的该种缓冲液:
[0053]ρΗ7.7?8.0，浓度为0.0lM?0.05Μ的磷酸盐(PB)缓冲液、
[0054]ρΗ7.6 ?8.2，浓度为 0.0lM ?0.05Μ 的 BS 缓冲液、
[0055]ρΗ7.9?8.3，浓度为0.0lM?0.04Μ的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液；
[0056]步骤⑵中采用的保存缓冲液选自以下缓冲液中的任一种:
[0057]ρΗ7.7?8.0，浓度为0.0lM?0.05Μ的磷酸盐(PB)缓冲液、
[0058]ρΗ7.6 ?8.2，浓度为 0.0lM ?0.05Μ 的 BS 缓冲液、
[0059]ρΗ7.9?8.3，浓度为0.0lM?0.04Μ的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液；
[0060]步骤(4)所述清洗缓冲液选自以下缓冲液中的任一种或者含0.02-0.1%吐温的该种缓冲液:
[0061]ρΗ7.7?8.0，浓度为0.0lM?0.05Μ的磷酸盐(PB)缓冲液、
[0062]ρΗ7.6 ?8.2，浓度为 0.0lM ?0.05Μ 的 BS 缓冲液、
[0063]ρΗ7.9?8.2，浓度为0.0lM?0.04Μ的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液；
[0064]所述步骤(1.3)中的清洗缓冲液是含0.05%吐温的该种缓冲液；
[0065]所述步骤(2)中的清洗缓冲液是含0.1 %吐温的该种缓冲液；
[0066]所述步骤(4)中的清洗缓冲液是含0.05%吐温的该种缓冲液。
[0067]步骤(3)采用的酶标二抗是碱性磷酸酶标记或辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠或山羊抗兔。
[0068]步骤(5)中采用的化学发光底物是鲁米诺、异鲁米诺或1，2 —二氧乙烷类衍生物。
[0069]上述1，2 一二氧乙烷类衍生物是AMPPD、CSPD或CDP-STAR。
[0070]本发明具有以下优点:
[0071]本发明以金磁微粒为载体，结合化学发光检测系统，建立了基于金磁微粒的化学发光免疫学检测S10的方法。在本方法中所使用的抗体为单克隆抗体，与抗原之间反应特异性好，有效避免交叉反应，且由于金磁微粒对蛋白质等大分子物质具有的高吸附能力，加之其兼备酶联免疫分析的高特异性、无污染的特点，还保留了化学发光法的高灵敏度，弥补了它在特异性上的不足。
[0072]在制备过程中不同步骤确立了适宜的缓冲溶液和PH值，使得抗体与固相载体之间有效结合，并有效进行位点封闭，避免的了非特异性反应的产生。该方法检测灵敏度高、特异性好、线性范围宽、精密度高、稳定性好、无放射性污染，操作安全，方法简便快速。尤其在检测灵敏度、特异性、准确度及精密度方面均比显色法酶免检测有显著提高。
【附图说明】
[0073]图1是本发明所用的固相载体-金磁微粒的结构示意图；
[0074]图2是本发明的方法中用金磁微粒包被SlOO的操作示意图；
[0075]图3是本发明的基于金磁微粒双抗体夹心法原理示意图；
[0076]图4是本发明实施例1检测SlOO的定量反应曲线。
[0077]图5是本发明实施例2检测SlOO的定量反应曲线。
【具体实施方式】
[0078]以下实施例对本发明的方案以具体实验操作的形式示例，其中的实验条件和设定参数不应视为对本发明基本技术方案的局限；本领域技术人员应当能够认识到，基于权利要求方案限定的范围内确定具体的实验条件和参数，仍可取得足够满意的效果。
[0079]实施例1:基于金磁微粒的化学发光免疫学定量检测人血清中SlOO的方法
[0080](I)包被
[0081](1.1)预处理:取 10mg/ml 的金磁微粒 100 μ 1，用 pH7.4,0.02Μ Tris-HCl 平衡缓冲液100 μ I清洗2次，平衡磁粒的pH。
[0082](1.2)偶联:将 160 μ g SlOO 抗体溶解于 200 μ I ρΗ7.4,0.02Μ Tris-HCl 偶联缓冲液中，混勾后加入预处理过的金磁微粒中，于37°C，180rpm，摇床中反应35min。反应完毕后取出，磁性分离2min，弃上清。
[0083](1.3)清洗:加入 200 μ I ρΗ7.4，含 0.05%吐温-20 的 0.02Μ Tris-HCl 清洗缓冲液，磁性分离2min，弃上清。
[0084](2)封闭:向金磁微粒中加入Iml含5%牛血清白蛋白，2.5%脱脂奶粉和3%胎牛血清的pH8.0,0.0lM PB缓冲液中，于37°C，180rpm，摇床中反应1.5h，磁性分离2min，弃上清。用Iml pH 8.0，含0.1%吐温-20的0.0lM PB缓冲液清洗3次，磁粒悬于Iml pH8.0的0.02M Tris-HCl的保存缓冲液中，4°C备用。
[0085](3)与待测物结合:取出包被后的金磁微粒，于室温下平衡20min，依次加入包被有 SlOO 抗体的金磁微粒 20 μ 1、待测样本(0ng/ml、0.05ng/ml、0.lng/ml、0.3ng/ml、0.6ng/ml、lng/ml、3ng/ml、6ng/ml、12ng/ml、35ng/ml)各 50 μ 1、ALP 标记羊抗鼠 50 μ 1，置摇床中37°C，180rpm，反应2h，形成双抗体夹心复合物。
[0086](4)清洗:取出离心管置于磁性分离器上，弃上清，用pH 8.0含0.05%吐温-20的0.02M Tris-HCl清洗缓冲液清洗3次，磁性分离2min，弃上清。
[0087](5)检测:将经过步骤(4)处理后形成的双抗体夹心复合物的金磁微粒转入96孔板，并向其加入发光底物AMPro溶液100 μ 1，于加入后的30min内检测各孔的发光强度(RLU)，其发光强度与待测样本浓度关系如图四所示，在0.05ng/ml?35ng/ml范围内线性较好，最低检出限可达0.02ng/mlo
[0088]在实施过程中我们选取了具有合适pH范围且能够适应金磁微粒载体的缓冲溶液，并且在反应条件的合适范围内选取了具有最佳效果的值。偶联时免疫反应的SlOO抗体用量与金磁微粒的最佳比例为1: 0.15。
[0089]实施例2:基于金磁微粒的化学发光免疫学定量检测人血清中SlOO的方法
[0090](I)包被
[0091](1.1)预处理:取 10mg/ml 的金磁微粒 100 μ 1，用 pH7.6,0.02Μ Tris-HCl 平衡缓冲液100 μ I清洗2次，平衡磁粒的pH。
[0092](1.2)偶联:将 150 μ g SlOO 抗体溶解于 200 μ I ρΗ7.6,0.02Μ Tris-HCl 偶联缓冲液中，混匀后加入预处理过的金磁微粒中，于35°C，200rpm，摇床中反应38min。反应完毕后取出，磁性分离2min，弃上清。
[0093](1.3)清洗:加入 200 μ I ρΗ7.6，含 0.07%吐温-20 的 0.02Μ Tris-HCl 清洗缓冲液，磁性分离2min，弃上清。
[0094](2)封闭:向金磁微粒中加入Iml含5%牛血清白蛋白，2.5%脱脂奶粉和3%胎牛血清的ρΗ8.0，0.0lM PB缓冲液中，于38°C，200rpm，摇床中反应1.7h，磁性分离2min，弃上清。用Iml pH 7