一种肿瘤相关抗体定量检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，尤其是涉及一种肿瘤相关抗体定量检测试剂盒。
【背景技术】
[0002] 由于癌症目前不能进行早期检测，而肿瘤抗原的确定对肿瘤免疫治疗具有重要意 义，已有报道发现不同种属的同类基因表现为一定的同源性，生物亲缘关系越远，其免疫性 越强。据此，人们便期望能发现一类异种同源的肿瘤抗原性物质，并利用它检测人体内肿瘤 抗体，实现癌症早期诊断的目的。
[0003] 目前国内外的肿瘤检测方法是查肿瘤标志物的抗原的存在与否，这种相关抗原也 就是肿瘤组织产生的，并且是存在于肿瘤组织本身并分泌到血液中去的。这种技术是用分 泌到血液中的肿瘤抗原蛋白免疫小鼠产生两个配对的单抗，一个单抗包被到板上，另一个 单抗标记酶来检测分泌到血液中的肿瘤抗原蛋白，该方法最适合癌症晚期的检测，而肿瘤 的早发现早治疗对于减少癌症的死亡率和改善患者的生活质量非常关键。
[0004] 肿瘤发生的早期机体就有针对肿瘤抗原的抗体，如果能检测这种抗体的存在，对 于肿瘤的早发现早治疗意义重大，且肿瘤相关抗体在肿瘤发生的晚期的量已经很少或者没 有，所以检测肿瘤相关抗体是真正意义上的对肿瘤的早期诊断。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种人体内肿瘤相关抗体检测试剂盒。该试剂盒可直接应用 于全自动生化分析仪上，结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。
[0006] 不同于国内外利用双抗体夹心法对患者体内特异性肿瘤抗原（肿瘤标志物，TM) 的检测，本研宄将一种肿瘤抗原性的植物蛋白作为抗原包被在96孔板中，以不同受试者血 清中的肿瘤抗体作为一抗，标记辣根过氧化酶的羊抗人抗体作为二抗，采用间接免疫发光 学技术来检测受试者血清中肿瘤抗体。
[0007] 本发明所述植物蛋白为从地衣植物中提取得到的蛋白，通过免疫印迹法（Westen Blotting)证实了该种蛋白具有肿瘤抗原性，可以作为早期肿瘤诊断的标记物。
[0008] 本发明的技术方案是：一种肿瘤相关抗体定量检测试剂盒，包括：
[0009] 抗原包被板，酶结合物，样品稀释液，校准品，浓缩洗液，发光底物液；
[0010] 所述抗原包被板，用PH9. 6的0. 05M的碳酸盐缓冲液作为包被缓冲液，将植物蛋白 稀释后，按IOOul/孔加入微孔板中，保证每孔中的植物蛋白含量为0. 2ug ;4°C包被过夜，次 日，弃去包被液，按200ul/孔加入1 % BSA的封闭液，37°C静置2小时，洗涤甩干，室温干燥 后装入包装袋，加入干燥剂，真空保存；
[0011] 所述酶结合物，为辣根过氧化酶标记的羊抗人IgG抗体或羊抗人IgM抗体或者两 种抗体的组合，其中为羊抗人IgG抗体与羊抗人IgM抗体的组合时，其比例与人体内产生 IgG与IgM的抗体的比例一致；
[0012] 所述样品稀释液，样品稀释液按如下配方配制：
[0013] 磷酸氢二钠 14. 5g; 磷酸二氢钠 1.48g; 氯化纳 9g; 硫柳汞钠 0. 2g; 小牛血清 500ml; 加纯化水到1000ml;
[0014] 所述校准品，所述校准品为植物蛋白的血清混合物；
[0015] 校准品设定浓度为：0U/ml，lU/ml，5U/ml，20U/ml，50U/ml，100U/ml，各点校准品配 制方法如下：
[0016]
【主权项】
1. 一种肿瘤相关抗体定量检测试剂盒，其特征在于：包括，抗原包被板，酶结合物，样 品稀释液，校准品，浓缩洗液，发光底物液； 所述抗原包被板，用p!19. 6的0. 05M的碳酸盐缓冲液作为包被缓冲液，将植物蛋白稀释 后，按100ul/孔加入微孔板中，保证每孔中的植物蛋白含量为0. 2ug;4°C包被过夜，次日， 弃去包被液，按200ul/孔加入1 %BSA的封闭液，37°C静置2小时，洗涤甩干，室温干燥后装 入包装袋，加入干燥剂，真空保存； 所述酶结合物，为辣根过氧化酶标记的羊抗人IgG抗体或羊抗人IgM抗体或者两种抗 体的组合； 所述样品稀释液，样品稀释液按如下配方配制：
所述校准品，所述校准品为植物蛋白的血清混合物； 所述浓缩洗液，其包括Tris缓冲液200mmol/L;吐温-20 5mmol/L;叠氮钠3mmol/L;乙 二胺四乙酸钠5mmol/L。 所述发光物底液包括A液和B液： 发光物底液A液：四硼酸钠3. 05g，硼酸0. 49g，鲁米诺0.lg，对咪唑基苯酚0. 05g，加纯 化水至1000ml; 发光物底液B液：磷酸氢二钠5. 8g，磷酸二氢钠0. 5g，过氧化脲0. 4g，加纯化水至 1000ml〇
2. 根据权利要求1所述的一种肿瘤相关抗体定量检测试剂盒，其特征在于：所述校准 品设定6个浓度， 校准品设定浓度为：〇U/ml，lU/ml，5U/ml，20U/ml，50U/ml，100U/ml，各点校准品配制方 法如下： 100U/ml:90ml样品稀释液加入10ml植物蛋白校准品（浓度1000U/ml)后充分混匀； 50U/ml:95ml样品稀释液加入5ml植物蛋白校准品（浓度1000U/ml)后充分混匀； 20U/ml:98ml样品稀释液加入2ml植物蛋白校准品（浓度1000U/ml)后充分混匀； 5U/ml:99. 5ml样品稀释液加入0. 5ml植物蛋白校准品（浓度1000U/ml)后充分混匀； lU/ml:100ml样品稀释液加入0.lml植物蛋白校准品（浓度1000U/ml)后充分混匀； 0U/ml:100mlZPP校准品稀释液。
3. 根据权利要求1所述的一种肿瘤相关抗体定量检测试剂盒，其特征在于：所述酶结 合物为羊抗人IgG抗体与羊抗人IgM抗体的组合时，其比例与人体内产生IgG与IgM的抗 体的比例一致。
【专利摘要】本发明提供一种肿瘤相关抗体定量检测试剂盒，包括：抗原包被板，酶结合物，样品稀释液，校准品，浓缩洗液，发光底物液；本发明的有益效果是一种人体内肿瘤相关抗体检测试剂盒。该试剂盒可直接应用于全自动生化分析仪上，结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。
【IPC分类】G01N33-68
【公开号】CN104777310
【申请号】CN201510038319
【发明人】郑振海, 郑新文
【申请人】郑振海, 郑新文
【公开日】2015年7月15日
【申请日】2015年1月23日