箱内在O °c下干燥。
[0029]通过计时安培电流测试可知:此例所得的传感器对H2O2和葡萄糖的检测灵敏度较高为550 μ A ?mM_1.αιΓ2，检测极限低为0.5 μ Μ。实验后，将修饰电极于4°C下置于pH为7.0的PBS缓冲溶液中一周，其响应信号基本不变；一个月后，其响应信号为初始信号的98% ；三个月后，其响应信号仍为初始信号的92 %，这表明该制备方法可较好地应用于酶生物传感器。
[0030]实施例2
[0031]一种酶生物传感器的制备方法，包括如下制备步骤:
[0032](I)配置10mM七他K 4Fe (CN) 6和FeCl 3，通过化学法等摩尔浓度合成普鲁士蓝，离心速率为10000r/min，离心时间为3min ；
[0033](2)将合成的普鲁士蓝与碳油墨按质量比1:99进行混合，并使其混合均匀，制备出碳油墨/普鲁士蓝混合油墨；
[0034](3)通过丝网印刷技术在支撑体PET上制备出酶生物传感器；
[0035](4)配制浓度为5000U/ml的葡萄糖氧化酶溶液，并在溶液中加入戊二醛，使得戊二醛在葡萄糖氧化酶溶液中所占质量百分浓度为6% ;
[0036](5)移取酶溶液均匀涂于工作电极3上，使之每平方厘米工作电极3上有200 μ I的酶溶液，置于冰箱内在10°C下干燥。
[0037]通过计时安培电流测试可知:此例所得的传感器对H2O2和葡萄糖的检测灵敏度较高为563 μ A ?mM_1.αιΓ2，检测极限低为0.5 μ Μ。实验后，将修饰电极于4°C下置于pH为7.0的PBS缓冲溶液中一周，其响应信号基本不变；一个月后，其响应信号为初始信号的96% ；三个月后，其响应信号仍为初始信号的94%，这表明该制备方法可较好地应用于酶生物传感器。
[0038]实施例3
[0039]一种酶生物传感器的制备方法，包括如下制备步骤:
[0040](I)配置80mM.L—1的K 3Fe (CN) 6和(NH 4) 2Fe (SO4) 2，通过化学法等摩尔浓度合成普鲁士蓝，离心速率为8000r/min,离心时间为15min ；
[0041](2)将合成的普鲁士蓝与碳油墨按质量比2:3进行混合，并使其混合均匀，制备出碳油墨/普鲁士蓝混合油墨；
[0042](3)通过丝网印刷技术在支撑体氧化铝上制备出酶生物传感器；
[0043](4)配制浓度为2500U/ml的葡萄糖氧化酶溶液，并在溶液中加入戊二醛，使得戊二醛在葡萄糖氧化酶溶液中所占质量百分浓度为10% ;
[0044](5)移取酶溶液均匀涂于工作电极3上，使之每平方厘米工作电极3上有120 μ I的酶溶液，置于冰箱内在5°C下干燥。
[0045]通过计时安培电流测试可知:此例所得的传感器对H2O2和葡萄糖的检测灵敏度较高为580 μ A ?mM_1.αιΓ2，检测极限低为0.5 μ Μ。实验后，将修饰电极于4°C下置于pH为7.0的PBS缓冲溶液中一周，其响应信号基本不变；一个月后，其响应信号为初始信号的98% ；三个月后，其响应信号仍为初始信号的95 %，这表明该制备方法可较好地应用于酶生物传感器。
【主权项】
1.一种简易的酶生物传感器的制备方法，其具体制备步骤如下: 1)制备普鲁士蓝浆料:分别配置K4Fe(CN) 6、K3Fe (CN) 6、FeCl3和(NH 4) 2Fe (SO4) 2水溶液；将K4Fe (CN) 6或K 3Fe (CN) 6水溶液中的一种，与FeCl 3或(NH 4) 2Fe (SO4) 2水溶液中的一种等摩尔混合，将所得到的混合溶液再放入离心机中进行离心，过滤，得到泥状的普鲁士蓝； 2)将合成的普鲁士蓝与碳油墨按质量比为1:(I?99)混合均匀，制备出碳油墨-普鲁士蓝混合油墨； 3)通过丝网印刷技术在支撑体上制备出基底电极:将碳油墨通过丝网印到支撑体上形成对电极和连接体，将氯化银浆通过丝网印到支撑体上形成参比电极，将步骤2)中制得的混合油墨通过丝网印到支撑体上形成工作电极； 4)配制葡萄糖氧化酶溶液，在溶液中加入戊二醛，混合均匀得酶溶液；取出酶溶液均匀涂于步骤3)制得的工作电极上，置于冰箱内，在低温下干燥后即得简易的酶生物传感器。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤I)中所述的1(疋6(0的6、K3Fe (CN) 6、FeCl3和(NH 4) 2Fe (SO4) 2水溶液的浓度范围均为 I ?10mM.L'
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤I)的离心速率为3000r/min?10000r/min ;离心时间为 3min ?30min。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤3)的支撑体是PVC、PET、氧化铝、陶瓷、金、银或铂。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤4)中葡萄糖氧化酶溶液的浓度为500?5000U/ml ;其中戊二醛的加入量为控制戊二醛在酶溶液中的质量百分浓度为1%?10%。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤4)中涂覆于工作电极上的酶溶液的量占工作电极体积的比为20 μ l/cm_2?200 μ l/cm_2。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤4)中所述的低温干燥的温度为在10°C以下。
【专利摘要】本发明公开了一种简易的酶生物传感器的制备方法，使用混合法将一定配比的普鲁士蓝油墨与碳油墨混合，然后通过丝网印刷技术制备出基底电极，用戊二醛作为交联剂固定被检测物质对应的生物氧化酶，以实现酶传感器的制备。由于该方法操作简单，成本较低，可批量制备，且装载的酶不易泄露，保证生物酶的高活性。该酶生物传感器有较高灵敏度、稳定性的电信号响应，且能批量化生产，易于产业化实现。所制备的酶生物传感器适用于食品分析、临床医学以及生物工程中过氧化氢或葡萄糖的检测。
【IPC分类】G01N27-26, G01N27-327
【公开号】CN104833713
【申请号】CN201510197310
【发明人】金万勤, 储震宇, 姜丹锋
【申请人】南京工业大学
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年4月23日