条硝酸纤维素膜上分别包被了肠毒素A、B、C、D、E特异性的单克隆抗体。胶体金分别标记了肠毒素A、B、C、D、E的检测抗体并混合在一起。样品中的肠毒素A、B、C、D、E先与对应的金标检测抗体特异性结合。试纸条插入样品液后，在毛细作用下肠毒素A、B、C、D、E与对应的金标检测抗体偶联物向吸水垫移动并在相应的测试线处被特异性捕获，胶体金颗粒聚集形成红色的线。颜色的深度与对应的肠毒素浓度成正比。同时，多余的胶体金抗体偶联物在质控线处被羊抗鼠IgG 二抗捕获。
[0016]目前检测金黄色葡萄球菌肠毒素的方法有传统的动物感染实验，免疫琼脂扩散法、间接血凝法和反向间接血凝法、免疫萤光法、放射免疫法等血清学方法以及近年来出现的免疫分析方法包括ELISA方法和胶体金试纸条方法。免疫分析方法与传统方法相比，具有检测时间较短，成本低，检测灵敏度好，适合大批量样品的快速筛查的特点。然而，与普通的酶联免疫双抗体夹心ELISA方法相比，该胶体金试纸条检测时间更短(lOmin)，操作更简单不需要专门培训操作人员(试纸条插入样品液即可)，可以实现现场检测(不依赖于烘箱、酶标仪等仪器)。更重要的是，该试纸条可以实现5种主要的金黄色葡萄球菌肠毒素的同时检测，大大提高了金黄色葡萄球菌肠毒素的检测效率，降低了检测成本。
[0017]因此该发明在食品安全快速检测、及医学检验方面均具有广阔的应用前景。
[0018]生物材料样品保藏
1、金黄色葡萄球菌肠毒素A的捕获抗体为JN2011-01，保藏号为CGMCC 8.90001 ;检测抗体为JN2011-02，保藏号为CGMCC 8.90002，在中国专利“一种检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素A的双抗体夹心法” CN103134931A公布，公布日2013年6月17日。
[0019]2、金黄色葡萄球菌肠毒素B的捕获抗体为K3，分类命名为单克隆细胞株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，登记编号为CGMCC N0.10863，保藏日期为2015年5月19日。
[0020]金黄色葡萄球菌肠毒素B的检测抗体为1F6，分类命名为单克隆细胞株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，登记编号为CGMCC N0.10866，保藏日期为2015年5月19日。
[0021]3、金黄色葡萄球菌肠毒素C的捕获抗体为1G7，分类命名为单克隆细胞株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，登记编号为CGMCC N0.10867，保藏日期为2015年5月19日。
[0022]金黄色葡萄球菌肠毒素C的检测抗体为1H8，分类命名为单克隆细胞株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，登记编号为CGMCC N0.10868，保藏日期为2015年5月19日。
[0023]4、金黄色葡萄球菌肠毒素D的捕获抗体为5F2，保藏号为CGMCC N0.7212 ;检测抗体为10F1，保藏号为CGMCC N0.7213，在中国专利“一种检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素D的双抗体夹心法” CN103760351A公布，公布日2014年5月7日。
[0024]5、金黄色葡萄球菌肠毒素E的捕获抗体为1E5，保藏号为CGMCC N0.7214 ;检测抗体为2E3，保藏号为CGMCC N0.7215，在中国专利“一种检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素E的双抗体夹心法” CN103760311A公布，公布日2014年5月7日。
【附图说明】
[0025]图1同时检测5种金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E的胶体金试纸条的结构示意图。1、样品垫，2、金标检测抗体，3、肠毒素E测试线，4、肠毒素D测试线，5、肠毒素C测试线，6、肠毒素B测试线，7、肠毒素A测试线，8、质控线，9、吸附垫，10、硝酸纤维素膜，11、PVC底板。
[0026]图2同时检测5种金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E的胶体金试纸条灵敏度(0.01M磷酸盐缓冲液，含0.2%的吐温20)。C线(质控线)，T线(测试线)。金黄色葡萄球菌肠毒素的加标浓度:1，SEA、SEB、SEC 为 100ng/mL，SED 为 50ng/mL，SEE 为 250ng/mL。2，SEA、SEB、SEC 为 50ng/mL，SED 为 25ng/mL，SEE 为 100ng/mL。3，SEA、SEB、SEC 为 25ng/mL，SED为 10ng/mL，SEE 为 50ng/mL。4，SEA、SEB、SEC 为 10ng/mL，SED 为 5ng/mL，SEE 为 25ng/mL。5，SEA、SEB、SEC 为 5ng/mL，SED 为 2.5ng/mL，SEE 为 10ng/mL。6，SEA、SEB、SEC 为 2.5ng/mL, SED 为 1 ng /mL, SEE 为 5ng/mL。7，SEA、SEB、SEC 为 Ing/mL，SED 为(λ 5ng/mL，SEE 为2.5ng/mL0
[0027]图3同时检测纯牛奶中5种金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E的胶体金试纸条灵敏度。C线(质控线)，T线(测试线)。金黄色葡萄球菌肠毒素的加标浓度:1，SEA、SEB、SEC、SED、SEE 为 250ng/mLo 2，SEA、SEB、SEC、SED、SEE 为 100ng/mL。3，SEA、SEB、SEC、SED、SEE为 50ng/mL。4，SEA、SEB、SEC、SED、SEE 为 25ng/mL。5，SEA、SEB、SEC、SED、SEE 为 10ng/ mL。6，SEA、SEB、SEC、SED、SEE 为 5ng/mL。7，SEA、SEB、SEC、SED、SEE 为 2.5ng/mL。
【具体实施方式】
[0028]实施例1.金黄色葡萄球菌肠毒素单克隆抗体的制备
1)实验动物:选5只、7周龄的BALB/c小鼠进行免疫。2)抗原配置:将免疫原用生理盐水稀释，配成lmg/mL的溶液。3)免疫:第一周进行首免，15 μ g /只，弗氏完全佐剂乳化后皮下多点注射；第四周进行二免，15 μ g /只，弗氏不完全佐剂乳化后皮下多点注射；第六周进行三免，7.5yg /只，弗氏不完全佐剂乳化后皮下多点注射。4)第3次免疫后用间接竞争法测定效价，效价达到要求后，进行冲刺免疫，冲免3天后眼眶采血后进行融合。5)融合、筛选:采用杂交瘤技术进行融合，采用间接Elisa筛选阳性细胞孔，采用有限稀释法对阳性孔进行亚克隆。6)抗体的纯化和保存:采用辛酸-饱和硫酸铵法纯化腹水，透析后得到单克隆抗体，采用微量紫外方法测定其浓度后分装后放入_20°C保存。
[0029]实施例2.金黄色葡萄球菌肠毒素双抗体夹心法测定步骤:
a、包被:用6μ g/mL的JN2011-01包被酶标板，100 μ L/孔，4°C过夜；
b、洗涤:用PBST洗涤反应板三次，每次3min，200μ L/孔，然后甩干反应板；
c、封闭:含0.2%明胶的CBS, 200 μ L/孔，37°C封闭2h ；
d、洗涤:同b;
e、样品:用PBS将SEA母液稀释成0.125，0.25，0.5，1，2，4，8ng/mL系列浓度，另设一个PBS空白对照；每孔加入100 μ L样品，于37°C孵育lh ;
f、洗涤:同b;
g、加酶标抗体(JN2011-02-HRP，4μ g/mL), 100 μ L / 孔，37 °C孵育 lh ；
h、洗涤:同b;
1、显色:加底物TMB10(^17孔，显色1511^11; j、终止:加终止液2M H2S04 50 μ L/孔;
k、测定:用酶标仪检测0D45Qnni。
[0030]实施例3.同时检测5种金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C、D、E的胶体金试纸条的制备方法:
a、胶体金的合成:
采用柠檬酸还原法