% )Ξ氯 乙酸、巧樣酸、辛烧横酸钢（色谱纯）、甲醇水氯乙酸（1%)、氨化甲醇巧％)、流 动相（离子对试剂缓冲液：乙腊=90:10) 聚氯胺标准品（2ug/ml)、S聚氯胺标准储备 液（lOOOug/ml)、阳离子交换固相萃取柱化0mg/3ml)、定性滤纸、海砂、微孔滤膜、氮气。
[0027] 1. 2仪器和设备：高效液相色谱0PLC)仪、分子天平、高速离屯、机、超声波清洗机、 固相萃取装置、氮气干燥系统、振荡器、具塞塑料离屯、管、研鉢。
[002引 2、样品前处理
[0029] 2. 1称取2g试样于50ml具塞塑料离屯、管中，加入15mlΞ氯乙酸溶液和5ml乙腊， 超声提取lOmin，再振荡提取lOmin;
[0030] 2. 2对上步骤的提取液W不低于4000;r/min离屯、lOmin，取上清液；
[0031] 2. 2上清液经Ξ氯乙酸溶液湿润的滤纸过滤至25ml容量瓶后，用Ξ氯乙酸定容至 容量瓶刻度；
[0032] 2. 3将定容好的滤液倒入离屯、管再次W不低于4000r/min的速度离屯、lOmin;
[0033]2. 4移取2. 3离屯、后的上清液5ml，加入5ml水混匀后作待净化液；
[0034] 2. 5 (预先）将固相萃取小柱进行活化及平衡：依次用3ml甲醇、3ml水活化；
[0035] 2. 6净化：将2. 4步骤混合好的待净化液10ml转移至固相萃取柱中；依次用3ml 水、3ml甲醇淋洗，固相萃取小柱抽干至近干后，用6ml氨化甲醇溶液洗脱。整个固相萃取过 程流速不超过Iml/min;洗脱液于50°C下用氮气吹干，干燥残留物用1ml流动相定容，縱满 混合Imin，过0. 2um的有机相微孔滤膜，上机检测。
[0036] 3、高效液相色谱测定参考条件
[0037]色谱柱：C18柱，250mmX4. 6mm，5um，
[003引流动相：（离子对试剂缓冲液：乙腊=90:10)，
[0039]流速：1.Oml/min，
[0040]柱溫：40C,
[0041]波长：240nm，
[0042]进样量：20ul。
[004引 二、回收率计算
[0044] 回收率=(加标浓度的实际检测结果-空白结果）/理论加标浓度*100,其中，
[0045] 理论加标浓度指，样品未处理前外加至该待测样品的Ξ聚氯胺的含量，
[0046] 加标浓度的实际检测结果指，外加至该待测样品的Ξ聚氯胺的含量经样品处理和 色谱检测后的结果，
[0047] 空白结果为，未外加Ξ聚氯胺的该待测样品中的Ξ聚氯胺的含量的检测结果。
[004引 S、结果
[0049] 发明人利用国标方法步骤设置、W及W上试样处理和色谱检测方法，分别对牛乳 (本底）、外加Ξ聚氯胺浓度为化pm的该牛乳（回2)、外加Ξ聚氯胺浓度为4卵m的该牛乳 (回4)进行Ξ聚氯胺浓度检测，计算该牛乳的Ξ聚氯胺检测回收率。对比结果如表1所示。
[0050]表1
[0051]
[0053] 发明人同样利用国标方法步骤设置、W及W上试样处理和色谱检测方法，分别对 酸奶、外加Ξ聚氯胺浓度为化pm的同样酸奶、外加Ξ聚氯胺浓度为4ppm的同样酸奶进行Ξ聚氯胺浓度检测，计算该酸奶的Ξ聚氯胺检测回收率。对比结果（未显示）类似W上表1。
[0054] 从W上示例可看出，化及对比国标法操作步骤、用时，发明人提供的运一方法能够 缩短检验员在做样过程中的时间，提高工作效率。例如，利用国标法，称取2g试样于50ml具 塞塑料离屯、管中，加入15mlΞ氯乙酸溶液和5ml乙腊，超声提取lOmin，再振荡提取lOmin 后，W不低于4000r/min离屯、lOmin，离屯、后提取液浑浊，提取液（10ml)在固相萃取柱容易 堵塞，过滤困难，在过滤提取液（10ml)的时间、淋洗（3ml水、3ml甲醇）、浓缩化ml氨化甲 醇溶液）等步骤大约需要Ih时间，中途还时不时的需要使用洗耳球吹固相萃取柱中的净化 液；而利用发明人改进后的方法，将提取液在4000r/min离屯、lOmin，将离屯、后的上清液经 Ξ氯乙酸溶液湿润的滤纸过滤至25ml容量瓶，用Ξ氯乙酸定容至刻度，将定容好的滤液 倒入离屯、管再次4000r/min离屯、lOmin，过固相萃取柱顺杨，在过滤提取液（10ml)的时间、 淋洗（3ml水、3ml甲醇）、浓缩化ml氨化甲醇溶液）等步骤大约需要30min时间，也不再需 要用洗耳球吹。
[0055] 从W上示例结果可看出，发明人提出的运一方法能够提高检测回收率。例如，利用 国标法，柱过滤困难，需要使用洗耳球吹固相萃取柱中的净化液，在吹的过程中净化液中的 待测组分就会被带出，因为在使用洗耳球吹的过程中不能保证1滴/2s的速度，在此过程中 待测组分的含量有所损失；利用发明人改进后的方法，柱过滤顺杨，不需要使用洗耳球吹固 相萃取柱小柱中的净化液，使提取液自然流出固相萃取小柱，净化液中的待测组分自然也 会吸附在固相萃取小柱内，待测组分中的含量的损失相对减少。
[0056] 从W上示例结果可看出，发明人提出的运一方法能够减少检测回收率的次数。例 如，改进前每样检测回收率的次数一般都要2-3次才能达到回收率的规定范围；而利用发 明人改进后的方法每样只需要检测一次就能达标。
[0057] 在本说明书的描述中，参考术语"一个实施例"、"一些实施例"、"示例"、"具体示 例"、或"一些示例"等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、材料或者特点包含 于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指 的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、材料或者特点可W在任何的一个或多个 实施例或示例中W合。
【主权项】
1. 一种检测乳制品中三聚氰胺的方法，其特征在于，包括： 提取试样中的三聚氰胺，获得提取液，其中包括， 利用三氯乙酸-乙腈超声提取所述试样中的三聚氰胺，获得第一提取液， 对所述第一提取液进行第一离心，获得第一上清液，所述第一离心的离心速度不小于 4000r/min, 对所述第一上清液进行过滤，获得滤液， 对所述滤液进行第二离心，获得第二上清液，所述第二离心的离心速度不小于4000r/ min； 对所述提取液进行净化，获得净化液，所述净化利用固相萃取柱； 利用高效液相色谱检测所述净化液以测定所述乳制品中的三聚氰胺。2. 权利1所述的方法，其特征在于，所述利用三氯乙酸-乙腈超声提取所述试样中的三 聚氰胺，获得第一提取液，包括： 称取m克试样于离心管中，加入vl毫升三氯乙酸和v2毫升乙腈，超声提取以获得所述 第一提取液，其中，vl/m为6~9,v2/m为2~3。3. 权利要求1的方法，其特征在于，所述第一离心的离心时间为lOmin。4. 权利要求2的方法，其特征在于，所述利用三氯乙酸-乙腈超声提取所述试样中的三 聚氰胺，获得第一提取液，包括： 称取2g试样于塑料离心管中，加入15ml三氯乙酸和5ml乙腈，超声提取lOmin后振荡 提取lOmin，以获得所述第一提取液； 任选的，对所述滤液进行第二离心，获得第二上清液之前，包括： 利用三氯乙酸定容所述滤液至25mL。5. 权利要求1的方法，其特征在于，所述第一离心和所述第二离心的离心速度相同。6. 权利要求1的方法，其特征在于，所述第二离心的离心速度为8000r/min。7. -种提高乳制品中三聚氰胺检测回收率的方法，其特征在于，包括： 利用权利要求1-6任一方法检测所述乳制品中的三聚氰胺，获得第一三聚氰胺含量； 利用相同方法检测外加有预定量三聚氰胺的所述乳制品中的三聚氰胺，获得第二三聚 氰胺含量； 利用所述第一三聚氰胺含量和所述第二三聚氰胺含量确定所述回收率。8. 权利要求7的方法，其特征在于，所述回收率=(第二三聚氰胺含量-第一三聚氰胺 含量）/外加的预定量三聚氰胺的含量*100。9. 一种提高乳制品中三聚氰胺检测回收率的方法，其特征在于，包括： 利用权利要求1-6任一方法检测外加有预定量三聚氰胺的所述乳制品中的三聚氰胺， 获得第三三聚氰胺含量； 利用相同方法检测所述乳制品中的三聚氰胺，获得第四三聚氰胺含量； 利用所述第三三聚氰胺含量和所述第四三聚氰胺含量确定所述回收率。10. 权利要求9的方法，其特征在于，所述回收率=(第三三聚氰胺含量-第四三聚氰 胺含量）/外加的预定量三聚氰胺的含量*100。
【专利摘要】本发明公开了一种检测乳制品中三聚氰胺的方法，包括：提取试样中的三聚氰胺，获得提取液，其中包括，利用三氯乙酸-乙腈超声提取所述试样中的三聚氰胺，获得第一提取液，对第一提取液进行第一离心，获得第一上清液，对第一上清液进行过滤，获得滤液，对滤液进行第二离心，获得第二上清液，所称第一和第二离心的离心速度均不小于4000r/min；对提取液进行净化，获得净化液，所述净化利用固相萃取柱；利用高效液相色谱检测净化液以测定该乳制品中的三聚氰胺。还公开一种提高三聚氰胺检测回收率的方法。利用该方法能够方便地获得达到国家标准的检测回收率。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105403636
【申请号】CN201510855934
【发明人】焦颖佳, 韩丽娜
【申请人】内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2015年11月26日