专利名称：一种罗非鱼育种标记方法
技术领域：
本发明属于在水产养殖领域中鱼类标记的技术，是一种在罗非鱼育种中实现识别 群体和检测每一条鱼的技术方法。
背景技术：
罗非鱼具有生长快，适应性强，肉质鲜嫩的特点，是我国主导养殖淡水品种，对我 国出口创汇具有重要意义。近年来，由于过度追求罗非鱼产量，忽视亲本间种质资源保护， 导致亲本不纯，近亲杂交，影响罗非鱼产业快速发展。为培育出优质高效罗非鱼新品种，必 须通过选育解决当前存在问题。在罗非鱼育种过程中，实验池塘的有限性和育种的规模化(尤其是家系选育)影 响育种工作的顺利进行，而通过对罗非鱼进行标记追踪，就可以减少池塘的数量和避免因 环境不同而造成的误差；还可以观察到不同品种或品系罗非鱼混养在一起它们之间遗传 力、群体的变异性和遗传参数区别；并可以比较同一品系罗非鱼在相同养殖环境下，不同个 体之间生长速度、遗传变异，为育种工作提供便利。中国水产科学研究院珠江水产研究所 李胜杰等在鱼类标志技术的研究进展(《现代农业科技》，2008年，第20期，224-226)研究 中，提出始于19世纪20年代的切鳍标记是指将鱼的1个或多个鳍条部分切除，再生的鳍条 在一定程度上会发生扭曲，从而产生标志，该方法对鱼的伤害较小，对鱼体本身生长没有影 响，可以较容易的对比试验前后标记鱼与未标记鱼的性状差别；但也有少数研究者发现经 过一段时间后分不清鳍条是否被切，很难辨认。在实际生产中，我们也发现因为罗非鱼鳍条 再生能力强，过不久又可以长出，剪鳍条确实不能满足罗非鱼育种标记的需要；中国水产科 学研究院淡水渔业研究中心董在杰等申请的专利“一种罗非鱼个体标记的方法”(申请号 200810018667. 9)主要是把PIT标记芯片注射入罗非鱼体内进行个体标记，这种体内标记， 能提高标记的保留率，标记不会脱落，有效识别率高；标记过程对鱼体的损伤程度较小，不 会影响罗非鱼的正常活动，但是只适用于较大规格的鱼；由于PTI标很小，发射的信号弱， 因此，信号的检测范围小，检测器必须离动物15cm左右。此外，这种标及相关的设备较贵， 用于较大规模标志的设备花费近20000美元，用于小规模标志的简易设备花费也需2000美 元。标记本身也较贵，1个标记要花到近10美元；中国科学院水生生物研究所张堂林等在 鱼类标志技术的研究进展(《中国水产科学》，2003年，第3期10卷，246-253)研究中，提出 化学标志法，即在鱼体表面下注射一种特殊的化学物质，这些物质能够被人们识别，主要是 使用荧光色素可见标志。Pierson等的实验表明，罗非鱼经过IlOd的饲养，荧光物质保持率 为78%，荧光组与剪鳍组的标志保持率没有显著差异，而且这2组标志鱼的成活率也没有 显著；但是荧光标志的检测效果差异较大，不能用于个体的识别，只能作为群体标志，其局 限性无疑限制了其使用范围。但是，使用拔罗非鱼背鳍硬鳍鳍条的方法对罗非鱼进行标记， 目前国内外未见报道。
发明内容
本发明的目的是在罗非鱼的育种中，由于罗非鱼各世代之间、子代与亲本之间、 以及杂交系子代与亲本之间，外形特征差异不显著，因此通过采用拔掉背鳍硬鳍条方法来 标记罗非鱼群体和个体，追踪其来源、父母本、系谱、生产表现等情况，同时在进行与经济性 状相关的检测时，对混养的不同个体和家系进行识别，提高遗传参数估计的准确性，同时为 鱼的留种亲本提供身份标记，实现罗非鱼交配可控性，避免近交衰退。本发明所采用的技术方法包括1、标记前的准备；2、鱼体标记方法和标记计划； 3、鱼体的标记。1、标记前的准备练鱼、吊鱼；选取12. 5cm直嘴止血钳、解剖刀片，酒精棉球，同时准 备捞角、毛巾、100L大白桶和气石，并用浓度为75%的酒精对直嘴血钳、解剖刀片进行消毒。2、鱼体标记组合和标记计划①罗非鱼背鳍硬鳍为17 18条，罗非鱼背鳍硬鳍第1、2条不进行标记，采用将罗 非鱼1条或4条背鳍硬鳍鳍条全部拔掉方法标记，至第17条结束标记，其余标记组合如下A 单条背鳍鳍条标记从第3条到第17条，还剩下15条鳍条，15种标记方式；B:两条背鳍鳍条标记从第3条鳍条开始组合，如3-4 ； 3-5 ； 3-6......与第3条鳍条组合的双鳍条标记，共有14种标记方式；与第4条鳍条组合的双鳍条标记，共有13种标记方式；.........以此类推，双鳍条标记共有105种标记方式。C:三条背鳍鳍条标记从3、4 鳍条开始组合，如 3-4-5 ；3-4-6 ；3-4-7......与第3、4条鳍条组合的三鳍条标记，共有13种标记方式；与第3、5条鳍条组合的三鳍条标记，共有12种标记方式；以此类推，三鳍条标记共有455种标记方式。D 四条背鳍鳍条标记从第3、4、5 鳍条开始组合，如 3-4-5-6 ；3-4-6-7 ；3-4-7-8......与第3、4、5条鳍条组合的四鳍条标记，共有78种标记方式；与第3、5、6条鳍条组合的四鳍条标记，共有66种标记方式；.........以此类推，以第3条鳍条为开头四鳍条标记共有364种标记方式；以此类推，以第4条鳍条为开头的四鳍条标记有286种标记方式；以第5条鳍条为开头的四鳍条标记有220种标记方式；以第6条鳍条为开头的四鳍条标记有165种标记方式；以第7条鳍条为开头的四鳍条标记有120种标记方式；以第8条鳍条为开头的四鳍条标记有84种标记方式；以第9条鳍条为开头的四鳍条标记有56种标记方式；以第10条鳍条为开头的四鳍条标记有35种标记方式；
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以第11条鳍条为开头的四鳍条标记有20种标记方式；以第12条鳍条为开头的四鳍条标记有10种标记方式；以第13条鳍条为开头的四鳍条标记有4种标记方式；以第14条鳍条为开头的四鳍条标记有1种标记方式；故四条鳍条标记方式共有364+286+220+165+120+84+56+35+20+10+4+1 = 1365 种总标记数量为15+105+455+1365= 1940 种②标记计划如需要标记鱼的群体，则可以使用单鳍条标记方法；如需要标记鱼 群中不同个体，则先需要计算标记鱼的数量，然后采用上述列出的组合，进行标记。3、鱼体的标记标记时先把鱼平放在桌子上，拿一块毛巾盖住其眼睛，用75%酒 精消毒需要拔鳍条部位；用解剖刀片把与需要拔掉的鳍条相连薄膜分离，一只手轻压罗非 鱼，然后用止血钳夹紧该鳍条，连根部一起拔起，立即用75 %的酒精消毒鳍条根部创口处 30秒；将标记完的鱼放在2%的食盐溶液中进行浸泡消毒。本发明的有益效果1、本发明操作简单，可标记数量多，对鱼体损伤程度较小，标记的保留率98%以 上，有效识别率98%以上，可以将不同标记鱼区分开来，区分效果十分明显，不会影响罗非 鱼的正常活动，能够满足大规模罗非鱼的选育育种标记的需要。2、本发明对鱼幼体和成鱼都可以标记，而且通过对标记与不标记鱼的生长对比发 现，标记对罗非鱼的生长无影响；本发明采用拔背鳍硬鳍鳍条标记不同世代的罗非鱼，同池 混养，可以评价子代共4代罗非鱼的生长性能。3、本发明所用的罗非鱼个体标记成本非常低(包括12. 5cm直嘴止血钳、解剖刀 片)，标记每条鱼的成本为0. 05元人民币，而且检测的鱼只需在幼体期标记一次将终身携 带，既节约了成本，也减少了多次标记对鱼体的伤害。
具体实施例方式本实验是在国家级广西南宁罗非鱼良种场进行的。本发明方法包括1、标记前的准备；2、鱼体标记方法和标记计划；3、鱼体的标记。1、标记前的准备1)、拉网练鱼对将进行做标记的鱼于前一天停喂，进行拉网锻炼，拉网使鱼适应外界应激；同时 鱼在密集过程中分泌黏液和排出粪便，增加耐缺氧适应力。拉网时，将鱼慢慢地赶至网中， 提起网衣，使鱼在半离水状态下，经30分钟后放回原塘中。2)、拉网捕鱼做标记之前，拉网捕鱼，挑选需要做标记的200尾规格相差不大的一个罗非鱼家 系，体重在20克左右，以消除初始规格相差太大造成的影响，其中100尾准备标记。搬至2 个小水池(长3mX宽1.5mX高2m)中暂放，小水池充氧，保证将标记的鱼不缺氧死亡。2、鱼体标记组合和标记计划罗非鱼背鳍硬鳍为15 18条，采用将罗非鱼两条背 鳍硬鳍鳍条全部拔掉方法标记，其中罗非鱼背鳍硬鳍第1、2条不进行标记，标记至第17条 结束，其标记组合如下与第3 条鳍条组合的标记有3-4 ；3-5 ；3-6 ；3-7 ；3-8 ；3-9 ；3-10 ；3-11 ；3-12 ；16 ；3-17 ；共 14 种标记方式。与第4 条鳍条组合的标记有4-5 ；4-6 ；4-7 ；4-8 ；4-9 ；4-10 ；4-11 ；4-12 ；4-13 ；
4-14；4-15 ；4-16 ；4-17 ；共 13 种标记方式。以此类推，与第5条鳍条组合的标记共12种标记方式；与第6条号鳍条组合的标记共11种标记方式；与第7条鳍条组合的标记共10种标记方式；与第8条鳍条组合的标记共9种标记方式；与第9条鳍条组合的标记共8种标记方式；与第10条鳍条组合的标记共7种标记方式；与第11条鳍条组合的标记共6种标记方式；与第12条鳍条组合的标记共5种标记方式；与第13条鳍条组合的标记共4种标记方式；与第14条鳍条组合的标记有14-15 ；1种标记方式。总标记方式15+14+13+12+11+10+9+8+7+6+5+4+1= 100 种标记方式3、鱼体的标记在同一养殖环境下对鱼类准确的识别，需要鱼体本身具有一种特有的标记。鱼体 识别标记较多，包括剪鳍、荧光色素可见标记，或外部注射进鱼体(如上述提到的PIT标记 芯片等)。本方法在罗非鱼类育种技术中采用了拔掉背鳍硬鳍鳍条的标记方法，独特地识别 大数量需要追踪鱼中的每一尾。具体标记程序是1)、从小水池中捞20尾鱼放至100L大白桶中，放气石充氧；2)、标记时先用捞角把鱼平放在桌子上，拿一块毛巾盖住其眼睛，用75%酒精消毒 需要拔鳍条部位；3)、用解剖刀片把与需要拔掉的鳍条相连薄膜分离；4)、一只手轻压罗非鱼，然后用止血钳夹紧该鳍条，连根部一起拔起，5)、立即用75%的酒精消毒鳍条根部创口处30秒；将标记完的鱼放在2%的食盐 溶液中进行浸泡消毒。在标记后对标记和未标记各100尾鱼测量其体重、体长等生长指标，已标记鱼与 未标记鱼放在同一张小塘中进行培育，30天后统计标记后的各项参数，并测量所有鱼生长 性状指标。在整个标记鱼与未标记鱼培育期间，标记鱼死亡2尾，死亡率2%，标记鱼感染2 尾，感染率2%，标记物丢失的鱼0条，丢失率0。也就是说在标记的100尾后，鱼的成活率 为98%，未感染所占比例为98%，标记的保持率为100%，有效识别率为100%。标记前后 平均体重、平均体长的变化情况见表1。未标记鱼前后变化情况见表2。表1标记鱼与未标记鱼标记前后指标变化情况
6 从上述两表可看出，标记鱼与未标记鱼在平均体重、平均体长等生长性状的变化 几乎无差别，从而通过对标记与不标记鱼的生长对比发现，标记对罗非鱼的生长无影响。
权利要求
一种罗非鱼育种标记方法，其特征在于1)、标记前的准备练鱼、吊鱼；选取直嘴止血钳、解剖刀片，酒精棉球，同时准备捞角、毛巾、大白桶和气石，并消毒；2)、鱼体标记组合和标记计划①罗非鱼背鳍硬鳍为17～18条，其中第1、2条不进行标记，采用将罗非鱼1条或4条背鳍硬鳍鳍条全部拔掉方法标记，至第17条结束标记，其余标记组合如下A单条背鳍鳍条标记方法有15种；B两条背鳍鳍条标记方法有105种；C三条背鳍鳍条标记方法有455种；D四条背鳍鳍条标记方法有1365种；总标记数量为15+105+455+1365＝1940种；②标记计划如需要标记鱼的群体，则可以使用单鳍条标记方法；如需要标记鱼群中不同个体，则先需要计算标记鱼的数量，然后采用上述列出的组合，进行标记；3)、鱼体的标记标记时先把鱼平放在桌子上，盖住其眼睛，用酒精消毒需要拔鳍条部位；用解剖刀片把与需要拔掉的鳍条相连薄膜分离，一只手轻压罗非鱼，然后用止血钳夹紧该鳍条，连根部一起拔起，立即用酒精消毒鳍条根部创口处；将标记完的鱼放在2％的食盐溶液中进行浸泡消毒。
全文摘要
一种罗非鱼育种标记方法，首先计算需要标记鱼的数量，然后根据该数量，选取相应组合准备进行标记。标记时先把鱼平放在桌子上，拿一块毛巾盖住其眼睛，用75％酒精消毒需要拔鳍条部位；用解剖刀片把与需要拔掉的鳍条相连薄膜分离，一只手轻压罗非鱼，然后用止血钳夹紧该鳍条，连根部一起拔起，立即用75％的酒精消毒鳍条根部创口处；将标记完的鱼放在2％的食盐溶液中进行浸泡消毒。本发明操作简单，成本低，对鱼体的损伤程度较小，标记的保留率98％以上，有效识别率100％，不会影响罗非鱼的正常活动，能够满足大规模罗非鱼育种标记需要。
文档编号A01K61/00GK101926296SQ20101023510
公开日2010年12月29日 申请日期2010年7月23日 优先权日2010年7月23日
发明者唐瞻杨, 唐章生, 张永德, 曾兰, 朱佳杰, 李莉萍, 林勇, 甘西, 陈忠 申请人:广西壮族自治区水产研究所