专利名称：植物组培中培养基杀菌到接种工序间降低污染率的方法
技术领域：
本发明涉及植物组培，特别是植物组培中培养基杀菌到接种工序间降低污染率的方法。
背景技术：
近30年来，植物组培技术由于自身独特的优势，在无性系快速繁殖、脱毒苗的培育、加快育种进程、优良品种选育和种质资源低温保存等方面都取得了明显的经济效益、社会效益和生态效益，其在科研和生产应用上的作用也越来越重要。但是，由微生物所引起的植物组培污染一直是当前制约植物组培发展的主要障碍。在接种和培养过程中，污染率常常高达10%以上。如何解决这个问题已经引起很多人的重视。
国内许多研究人员开展了这方面的一些研究，但还欠缺更深入的探讨。其中在培养过程中，培养基表面或材料表面有时会出现粘液状物质、菌落或呈混浊的水迹状甚至泡沫发酵状，这些多为细菌污染其中又以芽孢杆菌最为普遍和严重，国外称之为“白魔鬼”一这种菌能耐一定高温、高压。对消毒剂和紫外线也有一定抗性，常因培养基消毒不彻底而大量发生2001年在《组培中如何防止污染》中王晓燕等提出在给培养基消毒时，一定要将高压灭菌锅内的冷气排尽，使灭菌压力读数在O. 01-0. 15MPa之间保持20分钟。灭菌后，抽取样品放在培养室培养2-3天。若培养基表面和内部均无任何细菌痕迹，便可使用了。因为细菌、真菌的繁殖高峰期是在7-10天，但该方法并未对此进行观察。2000年李春燕等在《组织培养中青霉素对细菌污染的抑制作用》提到银白杨组织培养细菌污染利用400或600万u/L的青霉素无菌水溶液处理细菌污染苗，分别浸泡60分钟或40分钟，可有效地控制银白杨组织培养细菌污染制。朱广廉于1995年和1996年分别在《植物组织培养中灭菌和无菌操作的几个问题》和《植物组织培养中污染的控制》中对植物组织培养的外植体灭菌和相关的无菌操作做了系统的研究。1994年林盛等在《组织培养中污染的控制》中利用
4号消毒液处理瓶口能控制污染率在O. 3 %以下。1997年，何云芳等在《金线菊与菊芋在组织培养中细菌污染的影响》中表明在金线莲和菌芋的细菌污染中用自配消毒剂防治污染也起到了很好的效果。植物组培污染来源2007年，张燕在《组培苗污染原因分析》中提出组织培养过程中的污染源主要有以下几种(I)户外风大，菌类进屋机会多。有风就有沙，有沙就有尘，有尘就有菌，菌尘共存，这是菌类进屋的主要原因之一。(2)屋内太潮，菌类繁衍多。需保持室内空气干燥，如使用空调“除湿”功能，也可减少真菌生长繁殖。(3)人员带菌多。在整个操作室内，人员可说是最大的带菌者，不管在毛发或是衣服等地方，都隐藏着数不清的菌类。在进入操作室前，最好能对作业人员进行清洁处理，比如换上干净的白大褂，换上实验室的鞋，衣服鞋每星期洗一次，上超净台前手要用肥皂清洗两遍，接种前手再用酒精擦拭一遍。(4)屋内不干净。紫外线能杀灭或抑制真菌生长，因此应在每次接种前进行20分钟的紫外灯消毒。(5)清理屋内带菌组培苗。在植物病害中，真菌所引起的病害尤其严重，且因会产生孢子，随着空气飘散。一旦落入适当的环境下，一粒小小的孢子便会扩大成一个菌落，污染整个组织培养瓶。因此一旦有真菌污染的组培苗，就要用高压灭菌器彻底消灭，以防扩散。(6)接种不正确。不正确操作也会增加污染机率，如开盖太快，灭菌不够，操作过慢等。接种过程应该轻开盖，快操作。因此在此环境中，未进行抽样观察的其他培养基仍然会有细菌、真菌在大量繁殖、污染。还有对培养基没有进行7-10天的观察也无法预知细菌、真菌的繁殖高峰期，所以未·进行抽样观察的培养基以及未进行7-10天观察的培养基的的污染率结果是未知的。所以培养基灭菌后抽样培养2-3天,若无菌痕迹便认定可用，殊不知未抽样的大部分培养基未过7-10天观察期或在室内受二次污染，因此这种认定方法是错误的。
发明内容
本发明的目的在于克服用抗生素等杀菌剂杀菌，未考虑到培养基经高压灭菌很难百分百灭菌，如果就这样等培养基冷却后直接接种，污染率高，增加了组培成本的技术缺陷，为克服上述缺陷，提供一种植物组培中培养基杀菌到接种工序间降低污染率的方法。本发明的方案是培养基经高压灭菌后，先摆放7-10天进行观察，然后将受污染的培养基扔掉，再进行接种。本发明的优点在于I、不必使用其它药物杀菌方法，操作简单成本低。2、常规方法要接种后才会发现培养基已经受污染了，浪费了前期工作的投入，而该方法在接种前先将受污染的培养基换掉可节约组培苗成本。
具体实施例方式培养基经高压灭菌后，先摆放7-10天，然后将受污染的的培养基扔掉，再进行接种。经实验证明，通过该方法可以降低组培污染率3. 5% (该数值会随季节的变化而稍微波动)。原理组织培养过程中的污染是指培养基和培养材料滋生杂菌。组织培养中污染率的增加将引起组培成本的提高，造成很大的经济损失。植物组培污染主要是霉菌、细菌和酵母菌引起的污染。细菌引起的污染会在培养基表面形成明显的如水污状、油污状、气泡或干缩的红、黄、乳白等颜色的菌落。真菌引起的培养基污染很快就会出现黑、白、黄、绿等孢子。经实验观察，经高压灭菌后，培养基摆放1-4天并未出现污染现象，第5天开始出现真菌、细菌和杂菌的污染现象，到第10天污染率达到最高值6.5%，第11天起，组培污染率依然保持在6.5%。组培污染率统计见表I。所以培养基经高压灭菌后，将其放置7-10天，观察是否有真菌和细菌生长出来。若有则将受污染的培养基拿掉，这样既可以降低组培苗的成本，又可以降低组培污染率。表I组培污染率统计
权利要求
1.植物组培中培养基杀菌到接种工序间降低污染率的方法，培养基经高压灭菌后，先摆放7-10天进行观察，然后将受污染的培养基扔掉，再进行接种。
全文摘要
植物组培中培养基杀菌到接种工序间降低污染率的方法，涉及植物组培，培养基经高压灭菌后，先摆放7-10天进行观察，然后将受污染的培养基扔掉，再进行接种。优点在于1、不必使用其它药物杀菌方法，操作简单成本低。2、常规方法要接种后才会发现培养基已经受污染了，浪费了前期工作的投入，而该方法在接种前先将受污染的培养基换掉可节约组培苗成本。
文档编号A01H4/00GK102870679SQ20121039822
公开日2013年1月16日 申请日期2012年10月15日 优先权日2012年10月15日
发明者黄宇翔, 张晓燕, 宁火根 申请人:清流县鸿翔农庄农业发展有限公司