专利名称：一种具有解钾作用的变栖克雷伯氏菌及其培养方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物菌种技术领域，尤其是具有解钾作用的变栖克雷伯氏菌，及该变栖克雷伯氏菌的培养方法和应用。
背景技术：
烟草属于喜钾作物，钾含量是判断烟叶品质的重要指标之一，钾在烟草中，除了作为重要的营养元素发挥作用外，还能提高烟叶燃烧性从而降低焦油产生量，提高烟制品的安全性。钾在烟株体内几乎能够參与所有代谢进程(何念祖等，1987)，能够极大地影响烟株的能量和物质代谢。我国目前烟叶钾含量偏低，生产上主要以施用化学钾肥为主，通过增施钾肥，提升钾的有效性，能够有效增加烟叶中钾的含量(马朝文，2006 ;李强等，2007)。但是，我国的钾肥资源比较匮乏，并且钾肥成本高、利用率低，会破坏土壤的结构，降低有机质的含量(马光庭，2004)，造成污染，提高成本，而且单纯的增施钾肥并不能增加烟叶中钾的含量(郭合营等，1995 ;宋荣官等，1997)。然而在土壤中，含钾量本来是非常丰富的，只是其中95%以上的钾是存在于硅酸盐矿物中，如以云母和钾长石的形态存在(别运清等，2002)，只有不到2%的钾是能够被作物直接吸收利用的速效性钾。现有的研究报道，硅酸盐细菌又称为钾细菌，能够分解钾长石、云母等硅酸盐类矿物，即把土壌中的固态钾分解、转化成为可以被作物直接吸收的有效钾，同时它还可以分泌一些促进植物生长的活性物质(葛诚，2000;农业部肥政药政管理办公室，2002)。丁原书(2005)发现对硅酸盐细菌剂能够促进甘薯的生长发育，增强其抗旱性。使用硅酸盐菌剂对玉米拌种，能够提高出苗率，増加土壌中速效钾含量，促进植株的生长发育(梁盛年等，2006)。还有研究表明，作物分泌物对根际微生物种类和数量有较大影响，烟草的许多重要物质如烟碱的合成主要在烟草根际完成，对微生物的影响更为明显。只有适应烟草根际独特的微生态环境，微生物才能定殖及发挥效力。目前有关烟草根际解钾细菌的报道较少，能够适应烟草根际生态环境的高效解钾菌种资源鲜见报道。
发明内容
本发明针对现有技术中的不足，提出ー种具有解钾作用的硅酸盐细菌-变栖克雷伯氏菌，作用于烟草根际生态环境，具有很好的解钾能力。为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案ー种具有解钾作用的变栖克雷伯氏菌(Klebsiella variicola)Trb33菌株,2012年3月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路I号院3号，保藏号为CGMCCNO. 5933。ー种如上所述变栖克雷伯氏菌Trb33菌株的培养方法，包括以下步骤(I)从烟草根际取变栖克雷伯氏菌Trb33菌株，接种至现配的斜面培养基活化36 48小时，培养温度为28 30°C ;(2)取步骤(I)活化后的变栖克雷伯氏菌Trb33菌株，接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基，温度为28 30°C，160 200rpm震荡培养24 36小时。优选的，所述斜面培养基的组成为牛肉膏2 4g，蛋白胨4 6g，琼脂18 20g，蒸馏水1L，pH值7.0 7. 2。优选的，所述牛肉膏蛋白胨液体培养基的组成为牛肉膏2 4g，蛋白胨4 6g，蒸懼水1L, pH值自然。如上所述变栖克雷伯氏菌Trb33菌株在解钾方面的应用。优选的，所述应用包括以下步骤①.从烟草根际取变栖克雷伯氏菌的Trb33菌株，接种至现配的斜面培养基活化36 48小时，培养温度为28 30°C;取活化后的变栖克雷伯氏菌Trb33菌株，接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基，温度为28 30°C，160 200rpm震荡培养24 36小时；②.按每250ml的瓶装入50ml含有钾的硅酸盐矿物的解钾细菌液体培养基，灭菌，冷却后接入Iml步骤①变栖克雷伯氏菌的Trb33菌株培养液，26 30°C、130 170rpm振荡培养6 8d。优选的，所述解钾细菌液体培养基组成为
权利要求
1.一种具有解钾作用的变栖克雷伯氏菌(Klebsiella variicola) Trb33菌株，2012年3月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNO. 5933。
2.一种如权利要求1所述变栖克雷伯氏菌Trb33菌株的培养方法，包括以下步骤 (1)从烟草根际取变栖克雷伯氏菌Trb33菌株，接种至现配的斜面培养基活化36 48小时，培养温度为28 30°C ； (2)取步骤(I)活化后的变栖克雷伯氏菌Trb33菌株，接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基，温度为28 30°C，160 200rpm震荡培养24 36小时。
3.如权利要求2所述培养方法，其特征在于所述斜面培养基的组成为牛肉膏2 4g,蛋白胨4 6g,琼脂18 20g,蒸懼水1L, pH值7. O 7. 2。
4.如权利要求2所述培养方法，其特征在于所述牛肉膏蛋白胨液体培养基的组成为牛肉膏2 4g,蛋白胨4 6g,蒸懼水1L, pH值自然。
5.如权利要求1所述变栖克雷伯氏菌Trb33菌株在解钾方面的应用。
6.如权利要求5所述应用，其特征在于包括以下步骤 ①.从烟草根际取变栖克雷伯氏菌的Trb33菌株，接种至现配的斜面培养基活化36 48小时，培养温度为28 30°C ;取活化后的变栖克雷伯氏菌Trb33菌株，接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基，温度为28 30°C，160 200rpm震荡培养24 36小时； ②.按每250ml的瓶装入50ml含有钾的硅酸盐矿物的解钾细菌液体培养基，灭菌，冷却后接入Iml步骤①变栖克雷伯氏菌的Trb33菌株培养液，26 30°C、130 170rpm振荡培养6 8d。
7.如权利要求6所述应用，其特征在于所述解钾细菌液体培养基组成为
8.如权利要求6或7所述应用，其特征在于包括以下步骤 ③.将步骤②培养液倒出并定容至50ml,在400 600rpm下离心10 12min,除去发酵液中的不溶性物质；取IOml的菌液8000 15000rpm离心10 15min，取上清液利用原子吸收光谱仪测定水溶性钾含量。
9.如权利要求6所述应用，其特征在于所述斜面培养基的组成为牛肉膏2 4g，蛋白胨4 6g，琼脂18 20g，蒸馏水1L，pH值7. O 7. 2。
10.如权利要求6所述应用，其特征在于所述牛肉膏蛋白胨液体培养基的组成为牛肉膏2 4g,蛋白胨4 6g,蒸懼水1L, pH值自然。
全文摘要
本发明公开了一株对具有较高解钾活性的变栖克雷伯氏菌(Klebsiella variicola)Trb33菌株及其培养方法和促进烟草生长中的应用。本发明提供的变栖克雷伯氏菌Trb33，可以用于硅酸盐微生物肥料的制备，分解土壤中钾长石和云母等硅酸盐矿物，从中释放出可溶性钾，供烟草吸收利用，减少化学钾肥的施用量，改善土壤微环境，提高烟叶品质。
文档编号C05G3/00GK103031260SQ20121043067
公开日2013年4月10日 申请日期2012年11月2日 优先权日2012年11月2日
发明者张忠锋, 申国明, 祖秉桥, 李青诚, 高林, 张玉芹, 高加明, 张淼, 代光照 申请人:中国农业科学院烟草研究所, 中国烟草总公司湖北省公司, 中国烟草总公司山东省公司