一种独一味离体培养一步成苗培养基及其方法
【专利摘要】本发明公开了一种独一味离体培养一步成苗培养基及其方法，该培养基使独一味试管苗叶片离体培养一步成苗。所述一步成苗培养基以MS培养基为基础培养基，补加不同浓度和组合的6-苄氨基嘌呤（6-BA），萘乙酸（NAA）和2，4-二氯苯氧乙酸（2,4-D），试管苗叶片作为外植体接种后经愈伤组织诱导直接分化不定芽和不定根，一步获得独一味再生植株。本发明无需将初代培养基中诱导获得的愈伤组织转接于分化培养基中再生成苗，与离体培养多步再生成苗相比，其步骤简化，培养周期短，重复性好，成苗率高。
【专利说明】一种独一味离体培养一步成苗培养基及其方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物【技术领域】，具体地，涉及一种独一味离体培养一步成苗培养基，应用该培养基使独一味试管苗叶片一步成苗的方法，相应地，本发明也提供了一种优化该培养基的方法。
【背景技术】
[0002]独一味Lamiophlomis rotata (Benth.)Kudo,为唇形科,独一味属植物，该属仅有独一味一个种。主产西藏，青海，甘肃，四川西部及云南西北部；生于高原或高山上强度风化的碎石滩中或石质高山草甸、河滩地，海拔2700~4500m。具有典型高山植物特征，如植物矮，茎短，根系发达，叶片较大，贴地展开。这些特征与其生长环境为高寒缺氧、干旱风大、辐射强及昼夜温差大等有关。
[0003]独一味属于传统藏药，民间用全草入药，治跌打损伤、筋骨疼痛、气滞闪腰、浮肿后流黄水、关节积黄水、骨松质发炎。此外据青海对大白鼠股动脉、肱动脉、颈动脉横切断止血试验，认为本种有较好的止血效果。随着野生独一味的存储量逐步降低，对独一味的研究也越来越受到重视。对将独一味引种到低海拔地区的研究工作也有部分开展。如金兰等通过将独一味根茎芽从海拔4300m的野生地移栽到海拔2366m和3100m的实验基地后，对移栽地独一味的花粉活力，花粉萌发及自然结束率进行了统计，结果发现独一味移栽到较低海拔后花粉活力低，柱头上无花粉萌发，自然结实率为O。因此，在低海拔地区对独一味的种苗获得，以植物组织培养方式更为可行。但是，通过对培养基成分的研究，采用一次组培成苗的技术，还未见报道。
【发明内容】
[0004]针对上述问题，本发明的主要目的是提供一种优化独一味离体培养一步成苗的培养基和培养方法，通过该优化方法获得的独一味试管苗叶片一步成苗培养基和使其一步成苗的培养方法。应用该独一味一步成苗培养基和该培养方法，独一味试管苗叶片在形成愈伤组织后，不需要转移到分化培养基上，而是直接在原培养基上分化成苗，提高了独一味试管苗叶片愈伤组织的再生效率、缩短了培养时间、简化了操作步骤，为独一味优良种苗复壮快繁和品种改良提供了一条有效途径。
[0005]本发明是通过如下技术方案实现的:
[0006]—种独一味离体培养一步成苗培养基，使独一味试管苗叶片离体培养一步成苗，所述培养基以MS培养基为基础培养基，并在IL MS培养基中，还需补加如下组分，并使各组分的终浓度如下:
[0007]6-BA (6-节氛基嘿呤)1.0 ~2.0mg/L ；
[0008]NAA (蔡乙酸)0.5 ~1.5mg/L ；
[0009]2,4-D (2，4-二氯苯氧乙酸)0~0.111^/1。
[0010]所述的独一味离体培养一步成苗培养基，以MS为基础培养基,加入的激素各组分的终浓度为:
[0011]6-BA 2.0mg/L ；
[0012]NAA 1.0mg/L ο
[0013]一种独一味试管苗叶片离体培养一步成苗的培养方法，包括如下步骤:
[0014](I)按照所述的配方配制独一味离体培养一步成苗培养基，并进行灭菌处理；
[0015](2)选取来源一致的独一味无菌试管苗，无菌条件下，切取顶端完全展开的叶片约0.5cmX0.5cm,以叶片背面贴于步骤I所述的培养基上；
[0016](3)将步骤(2)所得的接种后培养基置于温度为18~20°C条件下，全黑暗培养，7~IOd后，再每天进行光照12~16h，1000~1200Lx，培养30~40d后，愈伤组织形成，培养50~60d后统计愈伤组织逐渐分化出不定芽与不定根，形成试管苗；
[0017](4)将试管苗经常规炼苗技术，进行试管苗移栽，30d后统计移栽存活率。
[0018]本发明的有益效果为:所述的独一味离体培养一步成苗培养基和应用该培养基使独一味试管叶片离体培养一步成苗的方法，叶片外植体在形成愈伤组织后，不需要转移到分化培养基上，而是直接在原培养基上分化成苗，该方法具有再生周期短，繁殖系数和再生频率高，易操作，培养程序简单等优点，为独一味在低海拔地区种苗培育提供了良好的方法。
【具体实施方式】
[0019]以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。
[0020]一种优化独一味离体培养一步成苗培养基的方法，该培养基使独一味试管苗叶片离体培养一步成苗，包括以下步骤:
[0021]以不加任何激素的MS培养基作为对照，采用三因素三水平的L9 (34)正交试验设计，在MS培养基中添加不同浓度和组合的6-BA、NAA和2，4_D，配制成10组不同的独一味一步成苗培养基。各组中，含有的6-BA、NAA和2，4-D的浓度及组合见表1
[0022]表1具有不同激素组合物的独一味一步成苗培养基正交实验设计L9 (34)
【权利要求】
1.一种独一味离体培养一步成苗培养基，使独一味试管苗叶片离体培养一步成苗，其特征在于，所述培养基以MS培养基为基础培养基，并在IL MS培养基中，还需补加如下组分，并使各组分的终浓度如下: 6-BA1.0 ~2.0mg/L ； NAA0.5 ~1.5mg/L ； 2,4-D O ~0.lmg/Lo
2.根据权利要求1所述的独一味离体培养一步成苗培养基，其特征在于，以MS为基础培养基，加入的激素各组分的终浓度为: 6-BA 2.0mg/L ； NAA 1.0mg/Lο
3.—种独一味试管苗叶片离体培养一步成苗的培养方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)按照权利要求1或2所述的配方配制独一味离体培养一步成苗培养基，并进行灭菌处理； (2)选取来源一致的独一味无菌试管苗，无菌条件下，切取顶端完全展开的叶片约.0.5cmX0.5cm,以叶片背面贴于步骤I所述的培养基上； (3)将步骤(2)所得的接种后培养基置于温度为18~20°C条件下，全黑暗培养，7~IOd后，再每天进行光照12~16h，1000~1200Lx。
【文档编号】A01H4/00GK103461138SQ201310437034
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2013年9月23日 优先权日:2013年9月23日
【发明者】杨华, 黄雪丽, 牟兰, 田孟良 申请人:四川农业大学