1.一种通过花药培养获得乌桕再生植株的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)外植体的选择
选取生长至适宜时期的乌桕花序用于后续培养;
(2)外植体的低温预处理
将花序装于自封塑料袋内置于冰箱进行低温预处理;
(3)外植体的表面消毒
将经过低温预处理后的花序经流水冲洗后置于无菌操作台中进行表面消毒;
(4)愈伤组织诱导培养
滤纸吸干步骤(3)中消毒后花序表面的水分,剥取花药,接种于愈伤组织诱导培养基中,再经过3-4周的光照培养,获取愈伤组织;
(5)愈伤组织的增殖培养
将步骤(4)中获得的愈伤组织转接于增殖培养基中进行增殖培养;
(6)愈伤组织的分化
将步骤(5)中增殖后的愈伤组织切成切块,转接于分化培养基中进行愈伤组织的分化培养;
(7)不定芽的伸长
将步骤(6)中已分化出丛生芽的愈伤组织,转接于不定芽伸长培养基中进行不定芽的伸长培养并获取相应乌桕幼苗;
(8)不定芽的生根
将步骤(7)中伸长的乌桕幼苗转接于生根培养基中进行生根培养,最终获得乌桕再生植株。
2.根据权利要求1所述的一种通过花药培养获得乌桕再生植株的方法,其特征在于,所述步骤(1)中生长至适宜时期的乌桕花序为经显微镜镜检,选取小孢子处于单核中期或单核靠边期的乌桕花序。
3.根据权利要求1所述的一种通过花药培养获得乌桕再生植株的方法,其特征在于,所述步骤(2)中低温预处理的方法为:将花序置于3-5℃冰箱处理6-24h。
4.根据权利要求1所述的一种通过花药培养获得乌桕再生植株的方法,其特征在于,所述步骤(3)中外植体的表面消毒的具体方法为:将花序经流水冲洗20-30min后,于无菌操作台中用无菌水冲洗3-5遍;再采用70%-75%的乙醇消毒15-20s,无菌水冲洗3-5遍,重复1次;接着,再用添加有0.5-1.0%(v/v)Tween的0.1%(w/v)的升汞消毒60-120s,最后用无菌水再冲洗5-8遍。
5.根据权利要求1所述的一种通过花药培养获得乌桕再生植株的方法,其特征在于,所述步骤(4)中花药的剥取于无菌操作台中借助尖头镊子进行。
6.根据权利要求1所述的一种通过花药培养获得乌桕再生植株的方法,其特征在于,所述步骤(4)中愈伤组织诱导培养基为添加有0.6-3.0mg/L TDZ和0.6-3.0mg/L IAA的DKW培养基。
7.根据权利要求1所述的一种通过花药培养获得乌桕再生植株的方法,其特征在于,所述步骤(5)中增殖培养基为添加有0.1-0.5mg/L TDZ和1.0-2.0mg/L IAA的DKW培养基。
8.根据权利要求1所述的一种通过花药培养获得乌桕再生植株的方法,其特征在于,所述步骤(6)中分化培养基为添加有0.2-0.5mg/L TDZ和0.1-0.5mg/L ZT的DKW培养基。
9.根据权利要求8所述的一种通过花药培养获得乌桕再生植株的方法,其特征在于,所述步骤(7)中不定芽伸长培养基为添加有0.05-0.2mg/L ZT的1/2DKW培养基。
10.根据权利要求9所述的一种通过花药培养获得乌桕再生植株的方法,其特征在于,所述步骤(8)中生根培养基为添加有0.1-2.0mg/L亚精胺的1/2DKW培养基。