利用人hsf4基因及其编码产物诊断和治疗晶状体病变的方法

专利名称：利用人hsf4基因及其编码产物诊断和治疗晶状体病变的方法
技术领域：
本发明涉及生物工程和医学领域。更具体地，本发明涉及利用人热休克蛋白转录因子HSF4基因及其编码产物诊断和治疗晶状体病变(尤其是白内障)的方法，以及含有HSF4基因和/或蛋白的药物组合物。
背景技术：
白内障是一种常见的眼科疾病，是人类致盲的主要因素之一，是严重影响人民生活质量的重要疾病。在白内障中，其主要原因是填充于晶状体中的晶体蛋白变性、沉积所致。晶体蛋白主要分为三类α-晶体蛋白，β-晶体蛋白，γ-晶体蛋白，γ-晶体蛋白又分为七类A，B，C，D，E，F，S-晶体蛋白。已有文献报道，一些晶体蛋白的改变可导致晶状体的病变、白内障。然而，迄今为止，尚没有充分揭示白内障的确切原因，也没有人揭示出白内障与某种蛋白存在直接的相关性。
此外，本领域还缺乏早期诊断白内障疾病的有效方法以及非手术治疗白内障的有效手段。
因此，本领域迫切需要开发新的诊断和治疗白内障的有效方法，以及相关的治疗药物，诊断技术和试剂。

发明内容
本发明的一个目的就是提供一种新的诊断(尤其是早期诊断)白内障等晶状体病变的方法及检测试剂盒。
本发明的另一目的是提供一种新的治疗白内障等晶状体病变的方法。
本发明的再一目的是提供一种治疗白内障等晶状体病变的药物组合物。
在本发明的第一方面，提供了一种对个体的白内障易感性进行诊断的方法，它包括步骤
检测该个体的HSF4基因、转录本和/或蛋白，并与正常的HSF4基因、转录本和/或蛋白相比较，存在差异就表明该个体患白内障的可能性高于正常人群。
较佳地，被检测的是HSF4的基因或转录本(包含HSF4a，HSF4b以及其他不同的转录本)，并与正常HSF4核苷酸序列比较差异。更佳地，所述的差异选自下组SEQ ID NO1中第348位T→C；SEQ ID NO2中第115位氨基酸由Leu→Pro。
在本发明的第二方面，提供了一种治疗晶状体病变的方法，它包括步骤给需要所述治疗的病人施用安全有效量的正常HSF4蛋白。较佳地，HSF4蛋白被局部施用于眼部。
在本发明的第三方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的人HSF4蛋白以及药学上可接受的载体。较佳地，它是眼药水或眼药膏。
在本发明的第四方面，提供了一种检测晶状体病变的试剂盒，它包括特异性扩增HSF4基因或转录本的引物。较佳地，它还含有与突变部位结合的探针和/或识别突变位点的酶。
本发明的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。


图1显示了一常染色体显性白内障家系的谱系图。
图2显示了该白内障家系病人的白内障眼部病变。
图3显示了遗传连锁分析结果。
图4显示了HSF4基因中的序列变化，其中正常人序列“…CTACTG…”在白内障家系的病人中两条染色体有一条的核酸序列改变为“…CTACCG…”，这一变化直接导致了其编码产物由亮氨酸(L)变为脯氨酸(P)。
具体实施例方式
热休克蛋白转录因子HSF4是一种已知的蛋白，其基本信息如下英文Homo sapiens for transcript ion factor HSF4(Heat Shocktranscription Factor 4)NCBIContigNT 010478mRNAHomo sapiens heat shock transcription factor 4(HSF4)，mRNAgi|4557650|ref|NM_001538.1|[4557650]HSF4的mRNA序列如SEQ ID NO1所示，ORF位于第5-1393位，编码一个全长463个氨基酸的蛋白质(SEQ ID NO2)。HSF4的其他信息可以从Http//www.ncbi.nlm.nih.gov获得。
本发明人经过多年研究，首次发现和证明了热休克蛋白转录因子(HSF4)与白内障密切相关，而且发现了它的新功能热休克蛋白转录因子的改变将直接导致晶状体的病变、白内障。在此基础上完成了本发明。
通过对一常染色体显性白内障家系进行遗传连锁分析、候选基因筛选以及大规模测序，已证实，热休克蛋白转录因子(HSF4)的突变导致了人类个体表现为晶状体的病变、白内障。我们的研究表明，人HSF4蛋白转录因子不但与热休克蛋白密切相关，而且具有调控晶状体蛋白稳定的作用，它的稳定存在是维持晶状体正常生理状态的关键。
根据蛋白同源性比较，人类的热休克蛋白转录因子(HSF4)比较保守。因此人类的热休克蛋白转录因子(HSF4)的变异是导致白内障等晶状体病变的直接原因之一。根据此基因及其表达产物设计的药物和诊断治疗技术，可用于诊断和治疗人类的晶状体的病变。
本发明的人HSF4核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据HSF4的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。
一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。
此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。
将HSF4编码序列插入合适的表达载体，再转入宿主细胞，就可以分离出HSF4蛋白。
基于本发明的新发现，HSF4蛋白或多肽有多方面的新用途。这些用途包括(但不限于)直接做为药物治疗HSF4蛋白功能低下或丧失所致的疾病(如白内障)，和用于筛选促进HSF4蛋白功能的物质，如抗体、多肽或其它配体。用表达的重组人HSF4蛋白筛选多肽库可用于寻找有治疗价值的能刺激人HSF4蛋白功能的多肽分子。
另一方面，本发明还包括对人HSF4 DNA或是其片段编码的多肽具有特异性的多克隆抗体和单克隆抗体，尤其是单克隆抗体。这里，“特异性”是指抗体能结合于人HSF4基因产物或片段。较佳地，指那些能与人HSF4基因产物或片段结合但不识别和结合于其它非相关抗原分子的抗体。本发明中抗体包括那些能够结合并抑制人HSF4蛋白的分子，也包括那些并不影响人HSF4蛋白功能的抗体。
本发明不仅包括完整的单克隆或多克隆抗体，而且还包括具有免疫活性的抗体片段，如Fab’或(Fab)2片段；抗体重链；抗体轻链；遗传工程改造的单链Fv分子；或嵌合抗体。
本发明的抗体可以通过本领域内技术人员已知的各种技术进行制备。例如，纯化的人HSF4基因产物或者其具有抗原性的片段，可被施用于动物以诱导多克隆抗体的产生。与之相似的，表达人HSF4蛋白或其具有抗原性的片段的细胞可用来免疫动物来生产抗体。多种佐剂可用于增强免疫反应，包括但不限于弗氏佐剂等。
本发明的抗体也可以是单克隆抗体。此类单克隆抗体可以利用杂交瘤技术来制备。本发明的抗体包括能阻断人HSF4蛋白功能的抗体以及不影响人HSF4蛋白功能的抗体。本发明的各类抗体可以利用人HSF4基因产物的片段或功能区，通过常规免疫技术获得。这些片段或功能区可以利用重组方法制备或利用多肽合成仪合成。与人HSF4基因产物的未修饰形式结合的抗体可以用原核细胞(例如E.Coli)中生产的基因产物来免疫动物而产生；与翻译后修饰形式结合的抗体(如糖基化或磷酸化的蛋白或多肽)，可以用真核细胞(例如酵母或昆虫细胞)中产生的基因产物来免疫动物而获得。
抗人HSF4蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中，检测活检标本中的人HSF4蛋白。一种优选的抗HSF4抗体是不识别正常HSF4但识别突变HSF4(如SEQID NO2中第115位由Leu→Pro的HSF4)的抗体，或者识别正常HSF4但不识别突变HSF4的抗体。利用该抗体对正常和异常HSF4蛋白的特异性差异，可以方便地进行蛋白质水平的白内障易感性检测。
利用本发明HSF4蛋白，通过各种常规筛选方法，可筛选出与HSF4蛋白发生相互作用的物质，如抑制剂、激动剂或拮抗剂等。
本发明HSF4蛋白及其抗体、抑制剂、激动剂、拮抗剂等，当在治疗上进行施用(给药)时，可提供不同的效果。通常，可将这些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中， 其中pH通常约为5-8，较佳地pH约为6-8，尽管pH值可随被配制物质的性质以及待治疗的病症而有所变化。配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药，其中包括(但并不限于)肌内、静脉内、皮下、或局部给药(包括眼球旁注射、眼球后注射、眼球内注射)。较佳地是在眼部局部给药。
正常的HSF4多肽可直接用于疾病治疗，例如，用于白内障等晶状体病变方面的治疗。在使用本发明HSF4蛋白时，还可同时使用其他治疗白内障的药剂。
本发明还提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明HSF4蛋白以及药学上可接受的载体或赋形剂。这类载体包括(但并不限于)盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。本发明的药物组合物可以被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如眼药水或眼药膏、片剂和胶囊之类的药物组合物，可通过常规方法进行制备。药物组合物如眼药水、眼药膏、针剂、溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约0.1微克/千克体重-约10毫克/千克体重。此外，本发明的多肽还可与其他治疗剂一起使用。
使用药物组合物时，是将安全有效量的HSF4蛋白或其拮抗剂、激动剂施用于哺乳动物，其中该安全有效量通常至少约0.1微克/千克体重，而且在大多数情况下不超过约10毫克/千克体重，较佳地该剂量是约0.1微克/千克体重-约100微克/千克体重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
人HSF4蛋白的多聚核苷酸也可用于多种治疗目的。基因治疗技术可用于治疗由于HSF4蛋白的无表达或异常/无活性的HSF4蛋白的表达所致的细胞增殖、发育或代谢异常。构建携带HSF4基因的重组病毒载体的方法可见于已有文献(Sambrook，et al.)。另外重组人HSF4基因可包装到脂质体中，然后再转移至细胞内。
多聚核苷酸导入组织或细胞内的方法包括将多聚核苷酸直接注入到体内组织中；或在体外通过载体(如病毒、噬菌体或质粒等)先将多聚核苷酸导入细胞中，再将细胞移植到体内等。
本发明还涉及定量和定位检测人HSF4蛋白水平的诊断试验方法。这些试验是本领域所熟知的，且包括FISH测定和放射免疫测定。
一种检测检测样品中是否存在HSF4蛋白的方法是利用HSF4蛋白的特异性抗体进行检测，它包括将样品与HSF4蛋白特异性抗体接触；观察是否形成抗体复合物，形成了抗体复合物就表示样品中存在HSF4蛋白。
HSF4蛋白的多聚核苷酸可用于HSF4蛋白相关疾病的诊断和治疗。在诊断方面，HSF4蛋白的多聚核苷酸可用于检测HSF4蛋白的表达与否或在疾病状态下HSF4蛋白的异常表达。如HSF4 DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断HSF4蛋白的表达异常。杂交技术包括Southern印迹法，Northern印迹法、原位杂交等。这些技术方法都是公开的成熟技术，相关的试剂盒都可从商业途径得到。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(microarray)或DNA芯片(又称为“基因芯片”)上，用于分析组织中基因的差异表达分析和基因诊断。用HSF4蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链反应(RT-PCR)体外扩增也可检测HSF4蛋白的转录产物。
本发明还提供了一种检测人HSF4基因的单核苷酸多态性的方法，它包括步骤(a)确定在人HSF4基因的SEQ ID NO1所示序列的第348位的核苷酸；和(b)检测在所述位置是否存在单核苷酸多态性(SNP)。一种具体SNP是348位处T→C。
检测人类热休克蛋白转录因子(HSF4)基因的突变也可用于诊断白内障。检测可以针对cDNA，也可针对基因组DNA(测序所用引物均是针对基因组DNA，可参见SEQ ID3-8)。HSF4蛋白突变的形式包括与正常野生型HSF4 DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。可用已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外，突变有可能影响蛋白的表达，因此用Northern印迹法、Western印迹法可间接判断基因有无突变。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆实验室手册(New YorkColdSpring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1常染色体显性白内障家系的确定1.1对象一个白内障大家系，其先天性白内障共有5代，65人。其中绕核性白内障患者共有31人(图1)。
1.2临床检查1.2.1视力使用视力表进行裸眼视力和插片校正视力的的检查。
1.2.2扩瞳检查使用裂隙灯或手电筒观察晶体混浊情况，直接眼底镜观察眼底情况。
裂隙灯下见该家系的晶体混浊特点是典型的绕核型改变，即混浊的胎儿核包绕着透明的胚胎核，其外又为透明的晶体结构(见图2)。在调查到的所有患者中，晶体混浊表现除了程度上略有差别外，形态上一致。除了一名10月的患儿表现为环绕胚胎核的一圈位于胎儿核内的白色点状混浊。
该家系发病特点是双眼发病，进展缓慢，视力影响中等，裸眼视力一般在0.1-0.3。伴有低度近视。由于当地医疗及交通条件限制，一般均在上学后7岁左右发现视力较差影响学业，而就诊。
在所有患者中除了有一名6岁的女孩伴有单眼的先天性上睑下垂外，无其它先天性眼部异常。在所有患者中未发现有全身其它疾病。
1.3分离分析分别使用Li-Mantal-Gart法和SEGRAN B法进行分离分析，分析该家系的遗传类型。
1.3.1 Li-Mantal-Gart法由于本家系为完全确认，使用单病例法(Singles method或称Li-Mantal-Gatt法)进行分析，结果如下每户同胞数家庭数同胞总数患病数同胞中仅有一例患者的家庭数16 6 6 624 8 4 431 3 2 042 8 5 073 21 15 0合计 16 46(J) 31(R) 10(J)分离比P＝(R-J)/(T-J)P欲待校正大估计分离比R患儿总数T同胞总数J家庭内同胞中只有一例患者的家庭数方差SP2＝(R-I)(T-R)/(T-J)3标准误SE=SP2]]>95％的可信区间P±1.96SE95％的可信区间45.185％--77.0152％估计的P值包括0.25，可初步认为本病为一常染色体显性遗传病。1.3.2使用软件应用SEGRAN B法进行分离分析结果如下每户同胞数同胞中患病数家庭数1 1 62 1 43 2 14 2 14 3 17 5 3由于本家系为完全确认，故i(确认概率)为1，x(散发概率)为0经检验i＝1 x2＝0.1996＜3.84 x＝o x2＝0.17<3.84验证确认概率i＝1，x＝o有意义SEGRAN B法P＝0.54 经检验P＝4.0000478，P＞3.84有统计学意义。故为常染色体显性遗传。
1.4病理检查在对该家系中两名患者进行ECCE+IOL植入术中，取出其晶体，用眼球固定液固定，嗜伊红染色，光镜下观察。并取相同年龄行眼摘后透明晶体，采用同样的方法进行病理观察，作为对照。
光镜下嗜伊红染色显示在胎儿核区可见散在蓝色圆点状嗜硷颗粒，而在中央胚胎核区及其外皮质区未见该结构。在相同年龄透明晶体中亦未见此改变。
2.1遗传连锁分析利用微卫星标记进行该家系的连锁分析。共利用384对微卫星引物(RESEARCH GENETICS)对整个基因组进行扫描，将该家系白内障基因定位于人的第16号染色体上。进一步合成引物将致病基因定位到微卫星标记D16S3095与D16S3129之间的5.11(cM)厘摩的遗传距离内，如图1和3所示。此物理距离大约有7百万个碱基对，130多个基因。
2.2候选基因对候选基因，设计PCR引物，PCR扩增出候选基因，然后进行测序。经过9对引物对候选基因热休克蛋白转录因子(HSF4)的测序，发现热休克蛋白转录因子(HSF4)与该家系的白内障密切相关。
对下列两对引物扩增出的PCR产物(第一对和第二对引物的扩增产物分别为483和556bp)进行测序，均发现该白内障家系中热休克蛋白转录因子(HSF4)的mRNA(NM 001538)的348T变为C(即SEQ ID NO1中)，其编码产物由亮氨酸(L)变为脯氨酸(P)见图4。
名称 序列(5’→3’) 长度 编号第一对 HSF4_Ex23_Fwd AGCGCAGGACTGGCCGTGAG 20SEQ ID NO3HSF4_Ex23_Rev GGGACTGGGTCGCAGGAGCA 20SEQ ID NO4第二对 HSF4_Ex34_Fwd AGTGCTGCCCCAGTATTTCAAG 22SEQ ID NO5HSF4_Ex34_Rev GCCAGTTATGGTCTCATCCCG21SEQ ID NO6通过结构预测，表明改变了HSF4该区域的蛋白结构。经过与其他物种同源比较，突变处的氨基酸十分保守，并位于HSF4蛋白与DNA相结合的关键区域。
此外，再经过两百个随机挑选的正常人比较，均未发现有此变化。因此表明了热休克蛋白转录因子(HSF4)与人类的白内障的发生密切相关，此基因及其编码产物可对人类的白内障起重要作用。
实施例3白内障检测试剂盒的制备如图4所示，正常人序列″…CTACTG…″在白内障家系的病人中两条染色体有一条的核酸序列改变为″…CTACCG…″，这一变化直接导致了其编码产物由亮氨酸(L)变为脯氨酸(P)，导致了病人表现为白内障。因此，可基于这一突变设计引物在以病人的DNA为模板进行扩增进行检测，例如SEQ ID NO3和4，以及SEQ ID NO5和6。
此外，正常人的核酸序列“ACTGG”可被限制性内切酶BsrS I所识别，而第348位发生T→C突变后，酶切位点就发生改变。
制备一试剂盒(100人次)，它含有名称序列(5’→3’)编号 数量正向引物5’-agtgctgccccagtatttcaag-3’SEQ ID NO7 100pmol反向引物5’-gggactgggtcgcaggagca-3’ SEQ ID NO8 100pmolBsrS I酶10UPCR缓冲液 若干酶切缓冲液 若干以病人血液DNA为模板，用该试剂盒扩增HSF4检测白内障时，扩增出的产物为356bp。正常人经BsrS I酶酶切后，扩增产物可以酶解成252bp、87bp、10bp、7bp的四个片段(酶切位点为10、262、349)。
病人的染色体因“T”变为“C”，将不被限制性内切酶BsrS I所识别，这样此356bp的PCR产物就可被限制性内切酶BsrS I酶解成339bp、10bp、7bp的三个片段(酶切位点为10、和349)。通过电泳可以轻易地区分。
实施例4药物组合物的制备可以通过构建含有人类正常热休克蛋白转录因子(HSF4)基因转录本的表达载体进行表达或通过液相色谱从人和动物天然蛋白中分离而来的正常HSF4蛋白制成针剂，对病人眼下进行肌肉注射，补充正常人类正常热休克蛋白转录因子(HSF4)蛋白使病人的白内障得以改善甚至治愈。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
序列表<110>中国科学院上海生物工程研究中心<120>利用人HSF4基因及其编码产物诊断和治疗晶状体病变的方法<130>020717<160>8<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>1555<212>DNA<213>智人(Homo sapiens)<220><221>CDS<222>(5)..(1393)<223><400>1ccgg atg gtg cag gaa gcg cca gct gcg ctg ccc acg gag cca ggc ccc 49Met Val Gln Glu Ala Pro Ala Ala Leu Pro Thr Glu Pro Gly Pro1 5 10 15agc ccc gtg cct gcc ttc ctc ggc aag cta tgg gcg ctg gtg ggg gac 97Ser Pro Val Pro Ala Phe Leu Gly Lys Leu Trp Ala Leu Val Gly Asp20 25 30cca ggc aca gac cac ctg atc cgc tgg agc ccg agc ggg acc agt ttc 145Pro Gly Thr Asp His Leu Ile Arg Trp Ser Pro Ser Gly Thr Ser Phe35 40 45ctc gta agc gac cag agc cgt ttc gcc aag gaa gtg ctg ccc cag tat 193Leu Val Ser Asp Gln Ser Arg Phe Ala Lys Glu Val Leu Pro Gln Tyr50 55 60ttc aag cat agc aac atg gcg agc ttc gtg cgc caa ctc aac atg tac 241Phe Lys His Ser Asn Met Ala Ser Phe Val Arg Gln Leu Asn Met Tyr65 70 75ggt ttt cgg aag gtg gtg agc atc gag cag ggc ggc ctg ctt agg ccg 289Gly Phe Arg Lys Val Val Ser Ile Glu Gln Gly Gly Leu Leu Arg Pro80 85 90 95gag cgc gac cac gtc gag ttc cag cac ccg agc ttc gtg cgc ggc cgc 337Glu Arg Asp His Val Glu Phe Gln His Pro Ser Phe Val Arg Gly Arg100 105 110gag cag cta ctg gag cgc gtg cgg cgc aag gtg ccc gcg ctg cgc ggc 385Glu Gln Leu Leu Glu Arg Val Arg Arg Lys Val Pro Ala Leu Arg Gly115 120 125gac gac ggc cgc tgg cgc ccg gag gac ctg ggt cga cta ctg ggc gag 433Asp Asp Gly Arg Trp Arg Pro Glu Asp Leu Gly Arg Leu Leu Gly Glu130 135 140gtg cag gct ttg cgg gga gtg cag gag agc acc gag gcg cgg ctg cgg 481Val Gln Ala Leu Arg Gly Val Gln Glu Ser Thr Glu Ala Arg Leu Arg145 150 155gag ctc agg cag cag aac gag atc ttg tgg cgg gag gtg gtg aca ctt 529Glu Leu Arg Gln Gln Asn Glu Ile Leu Trp Arg Glu Val Val Thr Leu160 165 170 175cgg cag agc cac ggt cag cag cac cgg gtc att ggc aag ctg atc cag 577Arg Gln Ser His Gly Gln Gln His Arg Val Ile Gly Lys Leu Ile Gln180 185 190tgt ctc ttt ggg cca ctt cag gcg ggg ccg agc aat gca gga ggc aag 625Cys Leu Phe Gly Pro Leu Gln Ala Gly Pro Ser Asn Ala Gly Gly Lys195 200 205aga aag ctg tcc ctg atg ctg gat gag ggg agc tca tgc cca aca cct 673Arg Lys Leu Ser Leu Met Leu Asp Glu Gly Ser Ser Cys Pro Thr Pro210 215 220gcc aag ttc aac acc tgc cct cta cct ggt gcc ctt ctg cag gac ccc 721Ala Lys Phe Asn Thr Cys Pro Leu Pro Gly Ala Leu Leu Gln Asp Pro225 230 235tac ttc atc cag tcg cct tct act tac agc ctc tcc cag aga caa att 769Tyr Phe Ile Gln Ser Pro Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Gln Arg Gln Ile240 245 250 255tgg gcc tta gcc ctc aca ggg cca ggg gcc cca tca tct ctg aca tcc 817Trp Ala Leu Ala Leu Thr Gly Pro Gly Ala Pro Ser Ser Leu Thr Ser260 265 270cag aag act ctc cat ccc ctg agg gga cca ggc ttt ctc cct cca gtg 865Gln Lys Thr Leu His Pro Leu Arg Gly Pro Gly Phe Leu Pro Pro Val275 280 285atg gca gga gcc ccc ccg cca ctg cct gtg gct gtg gtg cag gcc atc 913Met Ala Gly Ala Pro Pro Pro Leu Pro Val Ala Val Val Gln Ala Ile290 295 300ctg gaa ggg aaa ggg agc ttc agc ccc gag ggg ccc agg aat gcc caa 961Leu Glu Gly Lys Gly Ser Phe Ser Pro Glu Gly Pro Arg Asn Ala Gln
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405 410 415Thr Leu Gly Ala Pro Leu Leu Leu Asp Val Gln Ala Ala Leu Gly Gly420 425 430Pro Ala Leu Gly Leu Pro Gly Ala Leu Thr Ile Tyr Ser Thr Pro Glu435 440 445Ser Arg Thr Ala Ser Tyr Leu Gly Pro Glu Ala Ser Pro Ser Pro450 455 460<210>3<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<223>引物<400>3agcgcaggac tggccgtgag20<210>4<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<223>引物<400>4gggactgggt cgcaggagca20<210>5<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<223>引物<400>5agtgctgccc cagtatttca ag 22<210>6<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<223>引物<400>6gccagt tatg gtctcatccc g 21<210>7<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<223>引物<400>7agtgctgccc cagtatttca ag 22<210>8<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><221>misc_feature<223>引物<400>8gggactgggt cgcaggagca20
权利要求
1.一种对个体的白内障易感性进行诊断的方法，其特征在于，它包括步骤检测该个体的HSF4基因、转录本和/或蛋白，并与正常的HSF4基因、转录本和/或蛋白相比较，存在差异就表明该个体患白内障的可能性高于正常人群。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，检测的是HSF4的基因或转录本，并与正常HSF4核苷酸序列比较差异。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的差异选自下组SEQ ID NO1中第348位T→C；SEQ ID NO2中第115位氨基酸由Leu→Pro。
4.一种治疗晶状体病变的方法，其特征在于，包括步骤给需要所述治疗的病人施用安全有效量的正常HSF4蛋白。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的HSF4蛋白被局部施用于眼部。
6.一种药物组合物，其特征在于，它含有安全有效量的HSF4蛋白以及药学上可接受的载体。
7.如权利要求6所述的组合物，其特征在于，它是眼药水或眼药膏。
8.一种检测晶状体病变的试剂盒，其特征在于，它包括特异性扩增HSF4基因或转录本的引物。
9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，它还含有选自下组的试剂(a)与突变部位结合的探针；(b)识别突变位点的限制性内切酶。
10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述的突变选自SEQ ID NO1中第348位T→C。
全文摘要
本发明公开了一种诊断白内障等晶状体病变的方法，它包括检测个体的HSF4基因、转录本和/或蛋白与正常相比是否存在变异，存在变异就表明该个体患白内障等晶状体病变的可能性大于正常人群。本发明还公开了相应的检测试剂盒，以及治疗白内障等晶状体病变的方法和药物组合物。
文档编号C12Q1/68GK1438321SQ0211085
公开日2003年8月27日 申请日期2002年2月10日 优先权日2002年2月10日
发明者孔祥银, 步磊, 褚仁远 申请人:中国科学院上海生物工程研究中心