专利名称：获取巨大芽孢杆菌高活性的发酵工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种获取巨大芽孢杆菌高活性的发酵工艺，属于菌类发酵技术领域。
背景技术：
土壤中磷素以无机和有机态存在，能直接被植物吸收利用的有效态只占全磷量的2％-3％，利用微生物分解难溶性磷化物供作物利用是理想的选择。巨大芽孢杆菌是一种主要的磷细菌，具有很强的分解有机磷能力，同时又能溶解磷酸三钙，所以在生物肥料领域得到广泛的应用。由于生物工程技术的发展，人们已采用液态深层通风方法发酵生产巨大芽孢杆菌，目前常用的发酵工艺为采用原料巨大芽孢杆菌发酵种子液 1份淀粉1份酵母粉 0.5份蛋白胨 0.5份氯化钠 0.2份磷酸氢钾0.1份硫酸铵 0.15份铝酸铵 0.01份水 96.54份发酵工艺为1.投料先把按比例配制的原料放入一个配料桶，搅匀，并调节PH值为7.5，再用浓桨泵泵入发酵罐。
2.消毒传统方法，先用发酵罐夹层进入蒸汽，对发酵料液进行预加热到90℃，随后直接进蒸汽到发酵罐内，使料罐升温到121℃，罐压升到0.11Mpa，维持30分钟。
3.冷却消毒结束，使罐内通入无菌空气，使料液温度自然冷却到100℃时，在夹层进入冷却水进行冷却。
4.种子发酵将种子罐体积的0.5％的巨大芽孢杆菌种子液接入种子罐内发酵，种子培养时间为8-10小时；5.接种按发酵罐定容体积的1％发酵好的种子罐内的种子液接入发酵罐发酵；6.发酵培养接种后的种子在发酵罐通风比1∶0.5，罐压1.0Mpa，温度30±2℃条件下进行培养，发酵罐培养时间为16-20小时，发酵结束发酵罐活菌平板计数为10-15亿个/ml。
这种发酵工艺的缺点1、发酵原料普遍采用化学纯或食品级原料，成本高，配方一般适应化验室使用，固形物浓度低。
2、投料用配料桶预混，操作麻烦。
3、消毒时由夹层预热，消毒时间长，浪费蒸汽，消耗能源。
4、冷却时先自然冷却，延长了降温时间，使料液在高温时维持时间长，其养份损失，组份发生化学变化。
5、发酵周期较长，发酵活性低。
发明内容
本发明的目的是提供一种缩短发酵周期，获得高活性产品，降低生产成本的获取巨大芽孢杆菌高活性的发酵工艺。
为实现以上日的，本发明的技术方案是提供一种获取巨大芽孢杆菌高活性的发酵工艺，其特征在于，由以下重量配比的原料制成巨大芽孢杆菌发酵种子液0.4-1％玉米粉1.5％-4％豆粕粉1.0％-2.0％小麦次粉 0.5％-1.2％鱼粉 0.2％-0.8％碳酸钙0.05％-0.15％无机盐0.01％-0.08％水92-96％
所述的无机盐可以是硫酸镁、氯化钠、磷酸氢钾、磷酸氢钠、氯化钙，可以是单一的也可以是混合的。
本发明的发酵工艺如下一.一级培养(1).投料在种子罐内直接加水定容，预先通入空气，将玉米粉、豆粕粉小麦次粉、鱼粉、碳酸钙、无机盐称好，直接投入罐内搅拌；(2).消毒采用直接进气法消毒，消毒中将料温直接升到121℃，罐压维持在0.11Mpa，保持30分钟；(3).冷却消毒结束直接由夹层进水冷却；(4).种子发酵将种子罐体积的0.5％的巨大芽孢杆菌种子液接入种子罐内发酵，种子培养时间为5小时；二.二级培养(1).投料在发酵罐内直接加水定容，预先通入空气，将玉米粉、豆粕粉小麦次粉、鱼粉、碳酸钙、无机盐称好，直接投入罐内搅拌；(2).消毒采用直接进气法消毒，消毒中将料温直接升到121℃，罐压维持在0.11Mpa，保持30分钟；(3).冷却消毒结束直接由夹层进水冷却；(4).接种按发酵罐定容体积的1％发酵好的种子罐内的种子液接入发酵罐发酵；(5).培养种子发酵培养，风比为1∶1，罐压为0.5Mpa，温度为37±2℃，发酵罐培养时间为8-10小时，发酵结束。
原配方中碳源采用淀粉，氮源采用酵母粉和蛋白胨，这些原料的价格都比较贵，本发明碳源采用玉米粉，氮源采用豆粕粉和鱼粉，这些都是农副产品，价格比原来下降80％-90％，降低了生产成本，小麦次粉含有维生素及生长因子，能促进巨大芽孢杆菌发酵。
本发明投料时采用直接投料，方便了生产操作，消毒冷却时采用发酵罐快速消毒冷却，可减小蒸汽量的使用，而且节省时间，发酵时提高了发酵温度，降低了发酵罐压和提高通风比，这样缩短了发酵周期，提高了发酵单位活性，发酵菌数45-50亿/ml，芽孢形成率90％以上。
本发明的优点是缩短发酵周期，获得高活性产品，降低生产成本。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细说明获取巨大芽孢杆菌高活性的发酵工艺，由以下重量配比的原料制成巨大芽孢杆菌发酵种子液1份玉米粉3.8份豆粕粉1.2份小麦次粉 0.5份鱼粉 0.2份碳酸钙0.1份氯化钠0.05份水93.65份获取巨大芽孢杆菌高活性的发酵工艺如下一.一级培养(1).投料在种子罐内直接加93.65份水定容，预先通入空气，将玉米粉、豆粕粉、小麦次粉、鱼粉、碳酸钙、氯化钠称好，直接投入罐内搅拌；(2).消毒采用直接进气法消毒，消毒中将料温直接升到121℃，罐压维持在0.11Mpa，保持30分钟；(3).冷却消毒结束直接由夹层进水冷却；(4).种子发酵将0.5份的巨大芽孢杆菌种子液接入种子罐内发酵，种子培养时间为5小时；二.二级培养(1).投料在发酵罐内直接加93.15份水定容，预先通入空气，将玉米粉、豆粕粉、小麦次粉、鱼粉、碳酸钙、氯化钠称好，直接投入罐内搅拌；(2).消毒采用直接进气法消毒，消毒中将料温直接升到121℃，罐压维持在0.11Mpa，保持30分钟；(3).冷却消毒结束直接由夹层进水冷却；(4).接种按一级培养好的1份发酵好的种子罐内的种子液接入发酵罐发酵；
(5).培养种子发酵培养，风比为1∶1，罐压为0.5Mpa，温度为37±2℃，发酵罐培养时间为8-10小时，发酵结束。
权利要求
1.一种获取巨人芽孢杆菌高活性的发酵工艺，其特征在于，由以下重量配比的原料制成巨大芽孢杆菌发酵种子液0.4-1％玉米粉1.5％-4％豆粕粉1.0％-2.0％小麦次粉 0.5％-1.2％鱼粉 0.2％-0.8％碳酸钙0.05％-0.15％无机盐0.01％-0.08％水92-96％
2.根据权利要求1所述的获取巨大芽孢杆菌高活性的发酵工艺，其特征在于，所述的无机盐可以是硫酸镁、氯化钠、磷酸氢钾、磷酸氢钠、氯化钙，可以是单一的也可以是混合的。
3.根据权利要求1所述的获取巨大芽孢杆菌高活性的发酵工艺，其工艺如下一.一级培养(1).投料在种子罐内直接加水定容，预先通入空气，将玉米粉、豆粕粉、小麦次粉、鱼粉、碳酸钙、无机盐称好，直接投入罐内搅拌；(2).消毒采用直接进气法消毒，消毒中将料温直接升到121℃，罐压维持在0.11Mpa，保持30分钟；(3).冷却消毒结束直接由夹层进水冷却；(4).种子发酵将种子罐体积的0.5％的巨大芽孢杆菌种子液接入种子罐内发酵，种子培养时间为5小时；二.二级培养(1).投料在发酵罐内直接加水定容，预先通入空气，将玉米粉、豆粕粉、小麦次粉、鱼粉、碳酸钙、无机盐称好，直接投入罐内搅拌；(2).消毒采用直接进气法消毒，消毒中将料温直接升到121℃，罐压维持在0.11Mpa，保持30分钟；(3).冷却消毒结束直接由夹层进水冷却；(4).接种按发酵罐定容体积的1％发酵好的种子罐内的种子液接入发酵罐发酵；(5).培养种子发酵培养，风比为1∶1，罐压为0.5Mpa，温度为37±2℃，发酵罐培养时间为8-10小时，发酵结束。
全文摘要
本发明涉及一种获取巨大芽孢杆菌高活性的发酵工艺，其特征在于，由以下重量配比的原料制成巨大芽孢杆菌发酵种子液0.4－1％、玉米粉1.5％－4％、豆粕粉1.0％－2.0％、小麦次粉0.5％－1.2％、鱼粉0.2％－0.8％、碳酸钙0.05％－0.15％、无机盐0.01％－0.08％、水92－96％，其发酵工艺为，在发酵罐内直接加水定容，预先通入空气，将各种原料称好，直接投入罐内搅拌；采用直接进气法消毒，消毒中将料温直接升到121℃，罐压维持在0.11Mpa，保持30分钟；消毒结束直接由夹层进水冷却；将0.5份的巨大芽孢杆菌种子液接入种子罐内发酵，种子培养时间为5小时；按发酵罐定容体积的1％发酵好的种子罐内的种子液接入发酵罐发酵；种子罐及发酵罐培养条件风比为1∶1，罐压为0.5Mpa，温度为37±2℃，发酵罐培养时间为8－10小时，发酵结束。本发明的优点是缩短发酵周期，获得高活性产品，降低生产成本。
文档编号C12N1/20GK1539956SQ0311658
公开日2004年10月27日 申请日期2003年4月24日 优先权日2003年4月24日
发明者吴梅丽 申请人:上海久泰生物工程有限公司