专利名称：抗污损化合物及其生产方法
技术领域：
本发明涉及一种新的海洋防污损剂(anti-fouling agents)和利用海洋细菌发酵生产海洋防污损剂的生产工艺。
背景技术：
对于海洋产业包括海洋运输业和海水养殖业等，海洋污损生物(biofouling)如海洋细菌、藤壶、软体动物和藻类等的大量附着会带来巨大的经济损失。海洋污损生物易于在水管，发电站进水系统，下水管道，船体外壳，螺旋推进器，热交换器，栅栏，渔网和笼子等物体或建筑物的水下部分附着。海洋污损生物经常堵塞管道或附着在水面下的物体上，从而影响其正常工作。例如，发电站冷却系统有关的温水为水生生物的附着和生长提供了一个理想的环境。污损生物还附着在水中的物体如渔网，浮标，桩，海面平台，木材和混凝土等的表面。当将一个干净的物体置入水环境中，它的表面很快被疏水性有机化合物所粘附，形成有机层(RittschofD.1997 In Fingerman M等(eds)Recent advances in marine biotechnology，vol.3.Science Publishers，Inc.，NH，pp.245-257)。微生物如细菌，藻类，真菌和原生动物又能附着在有机层上并发展成群落，形成了粘附层(Clare等，1992 Invert ReportDev 2267-76)。许多无脊椎污损生物的浮游(自由漂浮的)幼虫被吸引至该层上(Wieczorek等，1997 Mar Ecol Prog Ser 119221-226)，最终形成污损生物群落。具有钙质壳或管的污损生物如蚌类，管虫和藤壶是污损生物中危害最大的。被污损生物附着的船体不仅可增加10％的重量，而且会导致船动力效率下降20％，增加50％的燃油耗费。而且生物污损和生物腐蚀是两种同时存在的现象，生物污损能够加速船壳的腐蚀，缩短一半的船体使用寿命。在海洋水产养殖业方面，生物污损可导致渔箱、扇贝笼的堵塞等，导致所养殖的海洋生物因缺氧和缺泛养料而死亡。海洋生物污损对船舶业，渔业等带来了极大的经济损失，每年由于海洋生物污损导致的直接经济损失达几十亿美元。人们为防止海洋生物污损已经做了很大努力，研究开发了多种方法和物质用于防止海洋生物的附着。采用了一系列方法除去已形成的生物污损群落，例如发电站系统利用周期性停电，进入发电系统利用人工来除去生物体和残渣。另外，还经常通过水处理系统泵入大量的氯或其它药物来杀死已形成群落的污损生物。但是这些方法不仅作用慢，而且对排水道下游的局部生态系统造成不利影响。另外，因为这些药物与大量的水混合来处理物体表面，所以这种化学方法处理效率低。化学处理方法的另一个缺点是必须保持长时间的相对较大的有毒物质的剂量以有效清除污损生物(Rittschof D.1997 In Fingerman M，Nagabhushanam R，Thompson M-F(eds)Recent advances in marinebiotechnology，vol.3.Science Publishers，Inc.，NH，pp.245-257)。
含有三丁基锡，含铜合金，含汞化合物等的有毒抗污损生物涂料被广泛用于控制生物污损。这些抗污损涂料通过向水环境中释放毒素以抑制生物污损(RittschofD.1997 In Fingerman M，NagabhushanamR，Thompson M-F(eds)Recent advances in marine biotechnology，vol.3.Science Publishers，Inc.，NH，pp.245-257)。最广泛应用的抗污损化合物是三丁基锡(TBT)。然而这种通过化学合成的化学物质具有强烈毒性，对海洋生态环造成了严重的破坏(Bryan et al.1986，Stewart& De Mora 1990，Gibbs et al.1990)，对于渔业有着极大的危害。在沉积物中，尤其是港口和商业航运路线的沉积物中发现了高浓度的TBT(Hashimoto等，1998 Mar Environ Res 45169-177)。一段时间以来，人们已经认识到了TBT及其衍生物对海洋环境的不利影响，特别是对雄性激素作用(Fisher等1999 Mar Environ Res 47185-201；Mathiessen P.，Gibbs P.E.1998 Environ Toxicol Chem 1737-43)。因此国际海事组织(IMO)海上环境保护委员会(MEPC)提出了自2003年1月1日起禁止使用三丁基锡涂料，并在2008年1月1日后在船体上不再漆TBT涂料(http//www.imo.org/conventions)。目前，在未有发现无毒或低毒的抗生物附着的物质之前，以重金属和生物杀虫剂为主要抗生物污损成分的油漆作为TBT的替代品尚被广泛使用。
目前人们逐渐采用含铜涂料代替TBT涂料来保护船体。然而，这些“替代品”对海洋环境也有负面影响。例如，牡蛎体内积累了相当量的铜，另外含铜物质对海洋藻类也具有毒性(Claisse & Alzieu1993 Mar Pollut Bull 26395-397)。而且，由于重金属和生物杀虫剂对生物环境的破坏作用的问题日益突出，越来越多的国家禁止使用以有机金属为主要抗污损成分的油漆，到2010年，这些油漆将在全球被禁用。因此，开发无毒的，无重金属的和对海洋环境是无害的抗污损生物涂料具有其特殊的重要性和迫切性。
因此，本发明的一个目的是提供一种生产抗污损剂及其衍生物的方法。
发明内容
本发明提供了一种通过在适于其生长的水环境中培养解藻酸弧菌(Vibrio alginolyticus)或解蛋白弧菌(Vibrio proteolyticus)生产抗污损剂的方法。抗污损剂由这两种弧菌产生和分泌，并被用作生产其它抗污损剂的组分。根据用途不同，解藻酸弧菌或解蛋白弧菌合成的抗污损剂可直接使用，或进行进一步纯化。
在一个优化的实施方案中，由以上弧菌产生和分泌到发酵培养基中的抗污损剂，可通过从培养基中除去细菌细胞，然后将无细胞培养基脱盐而进一步纯化。另一个优化的实施方案中，抗污损剂可通过一些传统技术浓缩，并直接使用或掺入到适当的物质中，如涂料，混凝土，涂层等，以产生抗污损效果。
本发明还提供了一种生产抗污损剂的方法。所述方法包括在适合的培养基中培养解藻酸弧菌或解蛋白弧菌以便可以分泌抗污损剂至培养基中。这种粗制方法足以产生足够数量和浓度的抗污损剂以供使用。一个优选的方法中，细胞被进一步从培养基中分离出去，和/或抗污损剂可使用传统手段被进一步纯化和浓缩。
本发明中所述生产抗污损剂的方法可以通过培养不同的弧菌菌种而进行，并首先针对污损生物使用传统的生物活性分析方法测试它们以鉴别可以产生一或多种抗污损剂的菌种或菌株。然后，使用上述相同的方法进一步培养所述的弧菌菌种或菌株來生产防污剂。鉴定有用菌株的方法在后面详细描述。按照这个方法鉴别的弧菌菌种或菌株可以从生物保藏机构获得或从环境中分离得到。
另一方面，本发明提供了在海上构筑物表面(marine surface)减少污损的方法，其包括应用解藻酸弧菌或解蛋白弧菌产生的抗污损剂方法。例如，所述抗污损剂可以采用永久涂层或至少一种喷雾或冲洗液体的形式。
本发明发明的抗污损剂具有以下突出的优点，解藻酸弧菌或解蛋白弧菌产生的抗污损剂不含对局部生态造成不利影响的重金属或有机合成的有毒物质。用成熟的培养细菌的方法和可商业化的发酵设备可以容易地生产所述抗污损剂。更重要的是，这种防污剂以无毒方式抑制了海洋大型污损生物(macrofouler)的幼虫附着。
另一方面，本发明提供了保藏号为DSM15590的解藻酸弧菌新分离株，其特征将在以下部分里加以详细描述。
图1示出了新分离株DSM15590的16S rRNA的DNA序列编码(SEQ ID NO1)。
图2示出了不同解藻酸弧菌和解蛋白弧菌的抗污损活性的比较研究结果。
图3示出了通过使用Sephacryl-400色谱分离本发明的抗污损剂的部分纯化结果。
图4示出了本发明的抗污损剂在电泳分离后的染色图案。
具体实施方案本发明基于如下发现，即一株细菌菌株解藻酸弧菌分泌对苔藓虫，藤壶和多毛纲的幼虫附着和变态具有抑制活性的高分子量化合物。这个新分离的解藻酸弧菌菌株由本发明人纯化和鉴定。它是分离自海洋大型藻类石荀(Ulva reticulata)(Forsskal)(绿藻门，石荀科)的附生细菌。这是一种广泛分布在香港东部沿海的绿色大型藻类。解藻酸弧菌菌株于2003年4月30日保藏在德国微生物和细胞培养保藏中心(“Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und ZellkulturenGmbH”(Braunschweig，Germany))，保藏号DSM 15590。这个新分离株也可以称为UST株。
本发明所涉及的一种纯化的抗污损剂是由DSM 15590株产生的。
通过富集技术纯化所述细菌，并通过16S rRNA基因序列和特异底物利用的比较分析鉴定为解藻酸弧菌。在悬浮培养过程中，这个细菌分泌出可以通过超滤收集的高分子量化合物。这个高分子量物质显示了明显的抑制许多海洋无脊椎动物幼虫附着和变态的活性，所述海洋无脊椎动物即多毛纲华美盘管虫(polychaete Hydroides elegans)，藤壶纹藤壶(barnacle Balanus amphitrite)和苔藓虫总合草苔虫(bryozoan Bugula neritina)，这些无脊椎动物是广泛认可的污损生物。与目前使用的大多数杀虫剂相反，本发明的抗污损剂的抗污损作用不但是无毒的，而且还是可逆的，即暴露于所述抗污损剂后，本能的幼虫附着过程在未受影响的海上构筑物表面继续进行。
细菌分泌出的生物活性成分，在活性跟踪下，采用凝胶色谱进行分离纯化，并且该成分和变性聚丙烯酰胺凝胶上的一个条带相对应。特异的染色反应结果表明抗污损剂是大约200kD的多糖类物质。通过糖基组成分析方法鉴别了所述多糖的单体组成。一旦释放入海洋环境中，多糖易于被微生物降解因而不会发生生物积累。因此，一旦这个化合物以工业规模加入抗污损涂料中，其对海洋环境的可能有害影响是微小的。
与其它从大型海洋生物中获得的具有抗污损特性的天然产物(例如，US专利4788302,5607741,5695552,5989323)相反，此处所述的细菌产物可以采用商业化的发酵技术大规模产生，而利用大型海洋生物来大规模生产天然抗污损剂则需要水产养殖这些大型生物。这个优点使该细菌产生的抗污损剂具有商业化的潜力。使用所述鉴别的细菌，生产抗污损剂不依赖于和局限于沿海制造业、劳动强度高并受气候条件限制的水产养殖技术。而且，商业生产所述细菌衍生的抗污损剂没有地域限制，因为其可以容易地在陆地上的发酵器中进行。
本发明还测试了公开可获得的其它解藻酸弧菌菌株，并发现每一个菌株都可以产生至少一种具有类似活性的化合物，其细节描述如下。在测试它们的过程中，被鉴别为解藻酸弧菌株的一株公众可获得的菌株ATCC 19108在培养时不显示解藻酸弧菌的特点，而进一步测序其16S RNA基因揭示，其应该更准确地被归类为解蛋白弧菌。从以下提供的信息，及从此处提供的测试方法，其它弧菌菌种，如解蛋白弧菌，鲨鱼弧菌(V.carchariae)，哈氏弧菌(V.harveyi)，坎氏弧菌(V.campbellii)，和副溶血弧菌(V. parahaemolyticus)也可以进行相应的测试，并从中生产抗污损剂。
以下是生产，鉴定和使用通过本发明获得的抗污损剂的详细说<p>表2
UV柔软触觉制剂和面板(panel)的制备在250ml烧杯中，用Dispermat CV分散混合器在1000rpm的搅拌下使70份的每种分散体与0.77份Byk-346和0.62份Tego Foamex 805混合。向该混合容器中加入(在1500rpm的搅拌下)25份无光浆糊(Acematt TS-100/Disperbyk190/水(1/.4/10))。将上述溶液混合10分钟。在100ml烧杯中，使9.85份去离子水与6.50份丁基卡必醇混合。在1500rpm的搅拌下将上述溶液缓慢加入到250ml混合容器中。然后在500rpm的搅拌下将Irgacure 819-DW(1.5份)加入到混合容器中并将该溶液混合5分钟以确保均匀性。将该制剂过滤到塑料广口瓶中并放置过夜以消除泡沫。
使用用VM&P石胺油/异丙醇溶液(1∶1)润湿的纸巾将要涂层的面板擦拭干净。然后使用常规喷涂技术即Binks 2001ss喷枪在45psi.下在面板上喷涂约4密耳(湿的膜厚度)的UV-可固化涂层。每种组合物分别涂覆5个面板。
喷涂后，将面板在室温下放置10分钟，然后在50℃烘焙10分钟以去除全部水分。使用用VPS-3电源驱动的HP-6-高功率的六英寸紫外灯(Fushion UVSystems，Inc)固化该涂层。传送带的速度设定为每分钟10英尺，同时汞蒸汽灯设定为100％功率。这样得到的总剂量约为2700mJ/cm2。
然后对面板进行柔软触觉和耐化学性的试验。根据手感来测试涂层的柔软<p>1.2在TCBS(硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆汁-蔗糖)琼脂上的生长形式小的，黄色的菌落1.3通过使用Biolog Microlog 2-系统(Biolog，Inc；USA)如使用手册所述确定的碳底物的利用表2总结了使用Biolog Microlog 2系统所确定的DSM 15590和ATCC 17749(ATCC 17749是解藻酸弧菌模式株)的碳利用特性。
表2
+，阳性；-，阴性；W，弱阳性1.4DSM 15590的脂肪酸分布使用MIDI Sherlock微生物鉴别系统(MIDI，Inc.；USA)如使用手册所述分析了生长在营养琼脂(在0.22μm过滤的海水中含0.5％(w/v)蛋白胨，0.3％(w/v)酵母提取物，1.5％琼脂)上的细菌菌落DSM 15590和ATCC 17749中的脂肪酸分布。结果示于表3。
表3
1.5 DSM 15590生产的抗污损剂的部分纯化1.5.1悬浮，发酵为获得经DSM 15590发酵生产的具有抗污损活性的粗制样品，稳定期的该细菌菌株以5000×g离心或通过0.22μm过滤。细菌沉淀物或过滤残渣用海水冲洗，随后再悬浮于海水中。细菌悬浮液在25-30℃培养24小时，其后细胞再沉淀或过滤。无细胞的上清液含有抗污损剂。生物活性的粗制样品用截留值为100kD的滤膜通过超滤脱盐。可以使用相同的程序浓缩抗污损剂。每升海水中含0.25g(湿重)细菌产生0.035g(冷冻干燥重量)部分纯化的抗污损产物。
1.5.2在生物膜反应器中的生长除了以上的方法，生物膜反应器可以用来产生具有生物活性的粗制样品。为此目的，将细菌菌株覆盖过的板浸于海水中3小时，其后产生的海水含有抗污损化合物。使用上述同样的作业程序脱盐和浓缩。
1.6通过色谱进一步纯化所述部分纯化的抗污损产物将部分纯化的抗污损产物加在Sephacryl-400凝胶柱，用0.1M磷酸缓冲液(pH7)为洗脱液，以0.4ml/min的流速洗脱，并在220和254nm处双波长检测。粗提物通过分子排阻色谱法(SEC)得到分离，同时还进行生物活性跟踪测定，结果示于图3，其中标示了每个组分的220nm和234nm的吸收值。
图3中垂直虚线表示用于进行抑制华美盘管虫幼虫附着活性分析的8个组分。在含有20个华美盘管虫幼虫、待测样品和FSW中的加入20个用10-4M3-异丁基-1-甲基黄嘌呤理的华美盘管虫幼虫(幼虫附着诱导剂)的无菌聚苯乙烯培养皿中进行了静水实验室生物活性分析，5个平行样。1小时后，倒空培养皿并在显微镜下计数附着的幼虫。这个分析的结果见表4。
FSW＝过滤海水的空白对照表4
数据是5次重复的平均数±SD。星号是显著性统计学差异(Dunnett’s multiple pairwisecomparison test)1.7通过细菌发酵获得的部分纯化的产物的抗污损活性表5总结了解藻酸弧菌DSM 15590的部分纯化的抗污损产物对3种类型常见污损生物的抗抗污损活性，所述常见污损生物是华美盘管虫(管虫)，总合草苔虫(苔鲜虫)，和纹藤壶(藤壶)。样品是通过发酵(在400ml FSW中的3.37g湿重细菌沉淀物)24小时得到的。
如上述进行管虫生物分析。按照Bryan等(1997 Mar Ecol Prog Ser14681-90)用总合草苔虫进行幼虫附着生物分析并按照Maki等(1988 Mar Biol 97199-206)用纹藤壶进行生物分析。上述参考文献全文引入本文作参考。
表5
1.8用生物膜反应器制备的部分纯化的抗污损产物的抗污着活性表6总结了所述产物对3种类型的常见污损生物，即华美盘管虫(管虫)，总合草苔虫(苔鲜虫)，和纹藤壶(藤壶)的抗污损活性。样品是通过将上述的生物膜反应器(在5ml海水中的5000个细胞mm-2的20cm2细菌膜)暴露3小时而得到。FSW＝过滤海水对照，FSW*＝含10-4M的3-异丁基甲基黄嘌呤(IBMX，一种华美盘管虫幼虫附着诱导剂)的过滤海水对照。用总合草苔虫和纹藤壶的生物分析不加IBMX。
表6
1.9凝胶电泳特性和分析结果解藻酸弧菌DSM15590的部分纯化抗污损产物和高生物活性组分2&3在1mm厚度的7.5％聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳，如图4所示。电泳结束后(200V，45min)凝胶用银(胶A)，考马氏蓝R-250(胶B)和甲苯胺蓝(胶C)染色。泳道1蛋白质标记(ca.0.5mg/ml)；泳道2浓缩的部分纯化的抗污损产物(ca.2mg/ml糖类)；泳道3SEC组分2；泳道4SEC组分3。主要标记条带被星号标记d＝200kDa，c＝97.2kDa，b＝66.4kDa，a＝26.6kDa。图4中的抗污损产物的电泳特性是(1)用银染时，在分子量大于200kD处有条带；(2)用考马氏蓝染色时，没有条带；(3)用甲苯胺蓝染色时，在分子量大于200kD处有条带。三种染色剂的结果证实抗污损化合物是一种多糖。
多糖的单糖组成组成分析的结果见表7。通过将多糖水解成的单糖乙酰化，然后利用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)进行糖残基组成分析。将样品溶入2M三氟乙酸(TFA)中，然后加入管中密封，在121℃水解2小时，然后用硼氢化钠还原及用乙酐/TFA乙酰化。分析糖组成的GC/MS仪器为Hewlett Packard 5890型气相色谱，30mSupelco 2330熔融石英毛细管柱，检测器为5970质谱仪。
表7
1.10 DSM 15590分泌的抗污损剂的生态毒性用总合草苔虫的幼虫对DSM 15590的纯化的抗污损产物进行生态毒性分析。将10个幼虫加入含有50μl待测样品溶液的聚苯乙烯带盖培养皿中。每个生物分析重复5次，并用FSW和CuCl2溶液作为相应的空白对照和阳性对照。24小时后，在显微镜下统计幼虫的死亡率。
这样将轮辋型钢的腰宽尺寸加大，从而使由之加工出的轮辋标定宽度的尺寸加大，装上轮胎时，内胎充气后，膨胀均匀，减少轮胎中部的膨胀，使外胎的侧面平缓，增加了外胎的着地面积，使整车附着力大，方向性、制动性好；对于载重货车而言，每侧轮轴上装有两个轮胎，这将使两个轮胎之间的间距变宽，增强了轮胎的散热效果，延长了轮胎的使用寿命。
本实用新型对传统轮辋型钢的腰宽尺寸提出质疑，尽管由这种型钢制成的轮辋已经导致上述的许多不足之处，却从未有任何人去考虑对其进行改进的可能性。显然，这种技术偏见已经直接阻碍了对该技术的研究和开发。本实用新型无疑是一种克服技术偏见的技术，使轮胎与轮辋的配合更加合适。
本实用新型虽然只是对轮辋型钢的腰宽尺寸进行的改进，但这种改进显然改变了轮辋型钢的形状，并且，这样的改进不但改变了轮辋的形状，而且带来出乎意料的效果。
现将本实用新型各种规格的轮辋型钢的腰宽尺寸增大范围、最佳尺寸与现行行业标准的对应尺寸制成下表
表10
表10中所示的可商业获得的不同解藻酸弧菌菌株在无菌肉汤培养基(0.22μm过滤的海水中的0.5％(w/v)蛋白胨，0.3％(w/v)酵母提取物)中在30℃下培养24小时至稳定期。通过离心收获悬浮的细菌，并用灭菌的过滤海水中清洗，然后稀释到在610nm波长时光密度为0.1。向带盖聚苯乙烯培养皿中加入4ml细菌悬浮液，并在22℃培养3小时使细菌附着，其后培养皿用灭过菌的过滤海水中浸洗以除去未附着的细菌。除了5个培养皿用于幼虫附着分析，3个培养皿用所列的细菌在培养皿表面做相应的处理。这个实验中实验膜上的细菌数在8000-10000细胞/mm2之间。覆盖了细菌膜的培养皿中加入4ml过滤的海水，并在22℃培养1小时以获得水中细菌产物(以下称为条件水)。条件水经过100kDa膜的超过滤，其过滤残渣被转移到新的培养皿中。含有不同解藻酸弧菌的条件水样品的培养皿使用前述相同的方法用总合草苔虫进行幼虫附着分析。1小时后统计幼虫附着和变态数量，并与过滤海水对照(空白对照)比较。
如图2所示，所有研究的菌株都明显抑制总合草苔虫幼虫的附着和变态。
尽管描述本发明时使用了上述图及DSM 15590和多种可获得的解藻酸弧菌的特别实施例，应理解这些只是实施例并不应限制本发明。还应理解尽管术语“抗污损剂”以单数形式使用，很明显每个解藻酸弧菌菌株可能产生略有不同的制剂。然而，如果使用者选择了纯的单一的菌株来大规模生产所述抗污损剂，则可能是单一的制剂，因此以单数形式适当描述它。而且，从此处提供的菌株获得的抗污损剂表示了本发明的一些实施方案，而且使用此处提供的指导，可以将本发明的相同原理应用于在相同菌种的其它菌株中生产抗污损剂。
序列表<110> 香港科技大学<120> 抗污损化合物及其生产方法<130> 12069-3<140> Not assigned<141> 2003-06-19<160> 1<170> PatentIn version 3.1<210> 1<211> 1490<212> DNA<213> 解蛋白弧菌或解藻酸弧菌<400> 1aagtcgagcg gaaacgagtt atctgaacct tcggggaacg ataacggcgt cgagcggcgg 60acgggtgagt aatgcctagg aaattgccct gatgtggggg ataaccattg gaaacgatgg120ctaataccgc atgatgccta cgggccaaag agggggacct tcgggcctct cgcgtcagga180tatgcctagg tgggattagc tagttggtga ggtaagggct caccaaggcg acgatcccta240gctggtctga gaggatgatc agccacactg gaactgagac acggtccaga ctcctacggg300aggcagcagt ggggaatatt gcacaatggg cgcaagcctg atgcagccat gccgcgtgta360tgaagaaggc cttcgggttg taaagcactt tcagtcgtga ggaaggtagt gtagttaata420gctgcattat ttgacgttag ctacagaaga agcaccggct aactccgtgc cagcagccgc480ggtaatacgg agggtgcgag cgttaatcgg aattactggg cgtaaagcgc atgcaggtgg540tttgttaagt cagatgtgaa agcccggggc tcaacctcgg aatagcattt gaaactggca600gactagagta ctgtagaggg gggtagaatt tcaggtgtag cggtgaaatg cgtagagatc660tgaaggaata ccggtggcga aggcggcccc ctggacagat actgacactc agatgcgaaa720gcgtggggag caaacaggat tagataccct ggtagtccac gccgtaaacg atgtctactt780ggaggttgtg gccttgagcc gtggctttcg gagctaacgc gttaagtaga ccgcctgggg840agtacggtcg caagattaaa actcaaatga attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagc900atgtggttta attcgatgca acgcgaagaa ccttacctac tcttgacatc cagagaactt960tccagagatg gattggtgcc ttcgggaact ctgagacagg tgctgcatgg ctgtcgtcag 1020ctcgtgttgt gaaatgttgg gttaagtccc gcaacgagcg caacccttat ccttgtttgc 1080cagcgagtaa tgtcgggaac tccagggaga ctgccggtga taaaccggag gaaggtgggg 1140acgacgtcaa gtcatcatgg cccttacgag tagggctaca cacgtgctac aatggcgcat 1200acagagggcg gccaacttgc gaaagtgagc gaatcccaaa aagtgcgtcg tagtccggat 1260
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权利要求
1.一种生产抗污损剂的方法，包含在适于弧菌生长的水溶液中培养一种弧菌。
2.权利要求1的方法，其中所述弧菌选自于解藻酸弧菌(Vibrioalginolyticus)，解蛋白弧菌(Vibrio proteolyticus)，和其混合物。
3.权利要求2的方法，进一步包含从所述水溶液中分离所述弧菌以形成含有所述抗污损剂的无细胞溶液。
4.权利要求3的方法，其中所述水溶液是海水，而且所述方法进一步包含对所述无细胞溶液脱盐。
5.权利要求4的方法，其中所述脱盐是通过使用截留值100kDa的大小分离进行的。
6.权利要求1的方法，其中所述弧菌选自以下菌株簇DSM15590，ATCC 14582，ATCC 17749，ATCC 19108，CIP 71.3，NCIMB1318，NCIMB 2047，和NCIMB 11038。
7.权利要求2的方法，其中所述弧菌选自以下菌株簇DSM15590，ATCC 14582，ATCC 17749，ATCC 19108，CIP 71.3，NCIMB1318，NCIMB 2047，和NCIMB 11038。
8.权利要求3的方法，其中所述弧菌选自以下菌株簇DSM15590，ATCC 14582，ATCC 17749，ATCC 19108，CIP 71.3，NCIMB1318，NCIMB 2047，和NCIMB 11038。
9.一种抗污损剂是由在水溶液中培养由解藻酸弧菌，解蛋白弧菌簇中的弧菌而形成的培养物中获得，所述水溶液适于弧菌的生长。
10.权利要求9的抗污损剂，其中所述解藻酸弧菌菌株名称为DSM 15590。
11.权利要求9的抗污损剂，其中含有所述抗污着剂的粗提物的分离步骤，该分离步骤包括从含有抗污损剂的所述溶液中将所述弧菌分离出去。
12.权利要求10的抗污损剂，其中含有所述试剂的培养物被进一步通过一分离步骤，该分离步骤包括从含有抗污损剂的所述溶液中将所述弧菌分离出去。
13.权利要求9的抗污损剂，其具有至少100kDa的大小。
14.权利要求10的抗污损剂，其具有至少100kDa的大小。
15.权利要求9的抗污损剂，其包含以下一组的单糖组成组分，所述组由半乳糖，葡萄糖，庚糖，N-乙酰葡糖胺，N-乙酰半乳糖胺及其混合物组成。
16.权利要求10的抗污损剂，其包含以下单糖组分，所述组由半乳糖，葡萄糖，庚糖，N-乙酰葡糖胺，N-乙酰半乳糖胺及其混合物组成。
17.一种抗污着组合物，其包含权利要求9的抗污损剂和适于在海上构筑物上应用的载体。
18.一种抗污着组合物，其包含权利要求10的抗污损剂和适于在海上构筑物上应用的载体。
19.权利要求17的抗污损化合物，其中所述载体选自如下一组船舶涂料，船舶涂层及其混合物。
20.一种减少海上物体表面污着的方法，包含应用上述抗污损剂于构筑物表面，所述抗污损剂是由选自于由解藻酸弧菌，解蛋白弧菌及其混合物组成的组中的弧菌所分泌的。
21.权利要求20的方法，其中所述解藻酸弧菌是名称为DSM15590的菌株。
22.一种名称为DSM 15590的细菌纯培养物。
全文摘要
本发明描述了通过在适于解藻酸弧菌生长的水溶液中培养解藻酸弧菌而产生的抗污损剂。所述抗污损剂是解藻酸弧菌生产和分泌的，可以用作生产其它抗污损化合物的成分。根据用途，解藻酸弧菌产生的抗污损剂可以直接使用，或者进行进一步纯化后使用。本发明还包括了一种新分离的解藻酸弧菌菌株(DSM 15590)。
文档编号C12N1/21GK1572867SQ200410049569
公开日2005年2月2日 申请日期2004年6月18日 优先权日2003年6月19日
发明者钱培元, 塞尔盖·多布列佐夫, 蒂尔曼·哈德, 刘振钧 申请人:香港科技大学