专利名称：一种产丁二酸的菌株及其筛选方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明属于生物工程技术领域，涉及一株产丁二酸的菌株，本发明还涉及该菌株的筛选方法和利用该菌株进行发酵生产丁二酸的方法。
背景技术：
琥珀酸(又称丁二酸)作为一种重要的化工原料在医药、食品以及表面活性剂等行业有着广泛的用途。然而，传统上的化学合成琥珀酸因成本和环境污染等原因使得琥珀酸作为基本化工原料的广泛应用受到限制。正因为如此，以微生物发酵法生产琥珀酸的研究与开发正在美国、日本等国家深入地进行着。
发酵法生产琥珀酸有诸多优点。首先，采用新的微生物发酵生产工艺和电渗析液液萃取的回收新工艺，比传统的化学生产法成本降低由此；其次，因为琥珀酸的环境友好特性，成本的降低非常有利于该产品的广泛应用，琥珀酸作为有机合成中间体取代许多苯类化合物和其他石化产品的市场前景广阔，具有很大的社会、环境效益；第三、由于发酵法生产琥珀酸是以可再生资源和二氧化碳作为主要原料，因此新工艺本身不仅摆脱了对石化原料的依赖，而且开辟了温室气体二氧化碳利用的新途径。
许多琥珀酸产生菌是从瘤胃中分离出来的，如Ruminocoddus flavefaciens和Fibrobacter succinogenes就是瘤胃中主要的消化纤维素厌氧菌以及主要的乙酸、琥珀酸产生菌，Anaerobiospirillum succiniciproducens(ATCC 53488)则是利用糖类物质代谢产生琥珀酸的瘤胃菌的代表。典型的肠胃菌E.coli、Pectinatus sp.、Bacteroides sp.；瘤胃菌如Mannheimia succiniciproducens MBEL55E，Prevotella ruminicola(ATCC 19188)，Succinimonas amylolytica(ATCC19716)，Ruminobacter amylophilus(DSM 1361)，都是可以积累丁二酸的菌株，但这些菌株有些属于严格厌氧菌，对设备和培养条件相对比较严格，不易进行培养，有些产酸水平过低，底物和产物浓度过高对菌株有一定的抑制作用，进行工业化生产均存在一些不足。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能生产较高浓度丁二酸的菌株。
本发明另一个目的是提供上述菌株的筛选方法。
本发明还有一个目的是利用该菌株进行生产丁二酸的方法。
本发明的目的是通过下列技术措施实现的一种产丁二酸的菌株，其分类命名为产琥珀酸放线杆菌(Actinobacillussuccinogenes)NJ113，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.1716，保藏日期是2006年05月18日。以此菌作为生产丁二酸的菌株。
上述菌株的筛选方法，包括下列步骤(1)菌源选择牛的瘤胃中混合菌株；(2)富集培养基为含有富马酸盐的能提供碳源、氮源及无机盐的常规培养基；(3)分离培养基为富集培养基组分另外添加维生素，平板培养时加入琼脂粉；(4)筛选方法称取从牛的瘤胃中取得的混合菌株1.0～5.0g，加入到50～200ml无菌水中制备成瘤胃菌悬液；富集培养时取0.1～1ml瘤胃菌悬液到100ml血清瓶中，血清瓶中富集培养基装液量为20～80ml，30～38℃进行培养18～36h后，培养样品稀释10-6，取0.05～0.2ml的液滴铺在含有分离培养基的平板上，在厌氧培养箱进行培养；厌氧培养箱中含有N2、CO2和H2的混合气体，温度为30～38℃，培养36～48h后的单菌落在含有分离培养基的血清瓶中培养36～48小时；培养结束后，测定(可采用HPLC)每个血清瓶中的丁二酸含量，筛选出高产丁二酸菌株。
所述的方法，其中富集培养基为添加了莫能菌素、富马酸二钠、丁二酸二钠和碳酸镁的能提供碳源、氮源及无机盐的常规培养基。
利用所述的菌株发酵生产丁二酸的方法，包括下列步骤(1)种子培养基为pH 6.0～8.0的含有糖类的能提供碳源、氮源及无机盐的常规液体培养基，斜面培养时加琼脂；发酵培养基为pH 6.0～8.0的含有糖类的能提供碳源、氮源及无机盐的常规液体培养基，并加入维生素；(2)斜面与种子培养条件为斜面培养将保藏编号为CGMCC No.1716的菌株在斜面培养基中进行平板划线后，在厌氧培养箱中培养，培养箱含有N2、CO2和H2的混合气体，温度为30～40℃，培养24～48h，用于种子培养基接种和菌株保存；种子培养100ml血清瓶中种子培养基为20～80mL，通入含有N2和CO2混合气，115～121℃灭菌15～30min，冷却后接入斜面培养的保藏编号为CGMCC No.1716的菌株，培养温度为30～40℃，摇床转速100～200r/min，培养时间为10～16h，用于发酵培养基接种；(3)血清瓶发酵培养100ml血清瓶中发酵培养基为20～80mL，通入含有N2和CO2的混合气，115～121℃灭菌15～30min，冷却后接入经种子培养的保藏编号为CGMCC No.1716的菌株，培养温度为30～40℃，转速100～200r/min，发酵时间为30～48h，分离提取丁二酸；或者，(4)5L发酵罐发酵培养5L发酵罐中发酵培养基体积为2～4L，接种量为3～7％(v/v)，温度为35～40℃，发酵罐通入含有N2和CO2混合气，以保持发酵体系的厌氧环境，搅拌转速在100～300rpm，发酵过程采用碳酸盐、氨水、NaOH、尿素、有机或无机酸控制pH在6.0～7.4，发酵时间为30～48h，分离提取丁二酸。
上述方法中含有N2、CO2和H2的混合气体中各成分比例为N2∶CO2∶H2＝8∶1∶1；含有N2和CO2的混合气体中各成分比例为N2∶CO2＝4∶1。
上述方法所用的培养基中碳源为糖类，其中糖类为葡萄糖、蔗糖、木糖、甘露糖、果糖中的一种或多种；氮源为有机或无机含氮化合物，其中无机含氮化合物为乙酸铵、氯化铵中的一种或多种，有机含氮化合物为蛋白胨、酵母膏、玉米浆、牛肉膏中的一种或多种；无机盐为钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、磷酸盐、锰盐、铁盐中的一种或多种；维生素为叶酸、生物素、维生素B12、硫辛酸、烟酸、泛酸、硫胺素或维生素B6中的一种或多种。
上述方法中无机盐为氯化钠、磷酸二氢钾、氯化镁、氯化钙、氯化铁、氯化锰中的一种或多种。
上述菌株的筛选方法中富集培养基组分配比优选为NaCl 0.5～3.0g/L，K2HPO41.0～6.0g/L，MgCl2·6H2O 0.02～0.2g/L，CaCl2·H2O 0.02～0.2g/L，(NH4)2SO40.2～2.0g/L，酵母膏2.0～15.0g/L，蛋白胨2.0～15.0g/L，葡萄糖10.0～50.0g/L，另外添加莫能菌素0.05～0.5mg/L，富马酸二钠10.0～50.0g/L，丁二酸二钠40.0～100.0g/L，碳酸镁10～50g/L；分离培养基为富集培养基组分另外添加叶酸5～20mg/L，生物素5～20mg/L，维生素B125～20mg/L，硫辛酸5～20mg/L，烟酸5～20mg/L，泛酸5～20mg/L，硫胺素5～20mg/L，维生素B65～20mg/L，平板培养时加入20g/L琼脂粉。
上述的方法中种子培养基配方优选为酵母膏2.0～10.0g/L，蛋白胨2.0～10.0g/L，NaCl 0.5～5.0g/L，NaHCO35.0～20.0g/L，Na2HPO49.0～15.0g/L，KH2PO44～12g/L，斜面培养时加琼脂20.0g/L，pH 6.0～8.0；发酵培养基配方为葡萄糖10～100g/L，酵母膏10～50g/L，蛋白胨10～50g/L，MnCl20.05～0.5g/L，FeCl20.05～0.5g/L，CaCl20.05～0.5g/L，K2HPO41.0～10.0g/L，维生素添加叶酸5～20mg/L，生物素5～20mg/L，维生素B125～20mg/L，硫辛酸5～20mg/L，烟酸5～20mg/L，泛酸5～20mg/L，硫胺素5～20mg/L，维生素B65～20mg/L，pH 6.0～8.0。
在富马酸富集的培养瓶中产生高的丁二酸浓度，分离这些富集的菌株，得到一株丁二酸的高产菌NJ113。NJ113是一株可以高产丁二酸的菌株，保藏编号为CGMCCNo.1716，该菌株具有以下特性1、NJ113为革兰氏阴性细菌，兼性厌氧，呈短杆状，不形成孢子。生长温度为25～42℃，生长pH范围为5.0～8.0。
2.底物NJ113可以在含有葡萄糖的培养基中生长并产酸，可以利用葡萄糖、乳糖、果糖、木糖、山梨醇、蔗糖等作为底物。
3.CO2的影响NJ113需要CO2来快速生长和产酸，较高浓度的供给CO2可以导致菌株的快速生长和高产丁二酸。
4.代谢产物该菌株以丁二酸、甲酸、乙酸和乳酸为主要代谢产物，同时还产生少量的丙酮酸、苹果酸、富马酸。
分析方法HPLC系统高效液相色谱仪WatersHPLC2010工作站；色谱柱Prevail organic acidcolumn 250mm×4.6mm；紫外检测波长215nm；流速1mL/min，进量20μL，流动相25mmol/L KH2PO4，pH2.5；柱温室温。重蒸水配制不同浓度的有机酸(丁二酸(Fluka)、乙酸(Sigma)、甲酸(Fluka)、乳酸(Fluka))标准溶液，根据峰面积与有机酸标准溶液的浓度关系制作标准曲线。发酵样品经离心稀释后根据峰面积计算各有机酸含量。
本发明的有益效果本发明通过对动物瘤胃中的菌株在含富马酸二钠的培养基中富集培养然后进行分类，得到高产丁二酸的放线杆菌。利用该菌株进行发酵可生产较高浓度的丁二酸，适合工业化生产丁二酸。
具体实施例方式
下面的实施例对本发明作详细说明，但对本发明没有限制。
实施例1
称取牛的瘤胃中取得的含菌株的混合物1.0g，加入到50ml无菌水中制备成瘤胃菌悬液。取1ml瘤胃菌悬液到100ml血清瓶中，血清瓶中的富集培养基装液量为50ml，富集培养基成分为NaCl 1.0g/L，K2HPO44.0g/L，MgCl2·6H2O 0.05g/L，CaCl2·H2O0.05g/L，(NH4)2SO40.2g/L，酵母膏10g/L，蛋白胨5.0g/L，葡萄糖50.0g/L，另外添加莫能菌素0.2mg/L，富马酸二钠20.0g/L，丁二酸二钠60.0g/L，碳酸镁50g/L；37℃进行富集培养18h后，培养样品稀释10-6，取0.1ml的液滴铺在含有分离培养基的平板上，在厌氧培养箱进行培养，分离培养基平板为上述富集培养基另外添加叶酸20mg/L，生物素20mg/L，维生素B1220mg/L，硫辛酸20mg/L，烟酸20mg/L，泛酸20mg/L，硫胺素20mg/L，维生素B620mg/L，琼脂20g/L；厌氧培养箱中混合气体N2∶CO2∶H2＝8∶1∶1，温度为37℃，培养48h后的单菌落在含有分离培养基中进行血清瓶培养48h，分离培养基为富集培养基中另外添加叶酸20mg/L，生物素20mg/L，维生素B1220mg/L，硫辛酸20mg/L，烟酸20mg/L，泛酸20mg/L，硫胺素20mg/L，维生素B620mg/L；培养结束后，通过HPLC测定每个血清瓶中的丁二酸含量，筛选出高产丁二酸菌株，得到几株产丁二酸菌株，结果表1表1 产丁二酸菌株的代谢产物分析
NJ113是一株高产丁二酸的菌株，根据本实验室鉴定，NJ113属于产琥珀酸放线杆菌(Actinobacillus succinogenes)，送CGMCC保藏，保藏编号为CGMCC No.1716，该菌株具有以下特性1、NJ113为革兰氏阴性细菌，兼性厌氧，呈短杆状，不形成孢子。生长温度为25～42℃，生长pH范围为5.0～8.0。
2.NJ113可以在高葡萄糖浓度的发酵培养基中生长并产酸，可以利用葡萄糖、乳糖、果糖、木糖、山梨醇、蔗糖等作为底物；NJ113可以在含有高浓度的丁二酸二钠的发酵培养基中生长并产酸。葡萄糖浓度或丁二酸二钠的浓度可以高达100～150g/L。
3.NJ113是兼性厌氧菌，不需要特殊手段除去培养基中的氧气。在TSB(胰胨豆胨肉汤)培养基中需氧培养时仍然能够生长良好。NJ113需要CO2来快速生长和产酸，较高浓度的供给CO2可以导致菌株的快速生长和高产丁二酸。
实施例2种子培养基酵母膏5g/L，蛋白胨5g/L，NaCl 1g/L，NaHCO310g/L，Na2HPO49～15g/L，KH2PO44～12g/L，斜面培养时加琼脂20g/L，通入N2∶CO2＝4∶1的混合气2min，121℃灭菌20min，冷却。
发酵培养基葡萄糖100g/L，MnCl20.05g/L，FeCl20.05g/L，CaCl20.05g/L，K2HPO42g/L，MgCO3100g/L，维生素添加叶酸20mg/L，生物素20mg/L，维生素B1220mg/L，硫辛酸20mg/L，烟酸20mg/L，泛酸20mg/L，硫胺素20mg/L，维生素B620mg/L，酵母膏、蛋白胨分别采用下述用量(1)10g/L酵母膏，5g/L蛋白胨；(2)15g/L酵母膏，5g/L蛋白胨；(3)10g/L酵母膏，15g/L蛋白胨；100ml血清瓶装液量为50ml，通入N2∶CO2＝4∶1的混合气2min，121℃灭菌20min，冷却。
将保藏编号为CGMCC No.1716的菌株在种子斜面培养基中进行平板划线后，在厌氧培养箱中培养，控制培养箱中混合气比例为N2∶CO2∶H2＝8∶1∶1，培养36h后的菌株用接种环接一环到含有50ml种子液体培养基的100ml血清瓶中，摇床转速180r/min，37℃培养12小时后用于上述发酵培养基接种(血清瓶)，接种量为5％(v/v)，37℃，摇床转速180r/min，培养48h，HPLC分析发酵液中有机酸含量，结果见表2表2 血清瓶发酵培养结果
保持高的有机氮源浓度有利于菌株的快速生长，并且可以提高丁二酸产量。
实施例3种子培养基酵母膏5g/L，蛋白胨5g/L，NaCl 1g/L，NaHCO310g/L，Na2HPO49～15g/L，KH2PO44～12g/L，(斜面培养时加琼脂20g/L)，通入N2∶CO2＝4∶1的混合气2min 121℃灭菌20min，冷却。
发酵培养基葡萄糖100g/L，酵母膏10～50g/L，蛋白胨10～50g/L，MnCl20.05g/L，FeCl20.05g/L，CaCl20.05g/L，K2HPO42.0g/L，MgCO3100g/L，维生素添加叶酸5mg/L，生物素5mg/L，维生素B125mg/L，硫辛酸5mg/L，烟酸5mg/L，泛酸5mg/L，硫胺素5mg/L，维生素B65mg/L，pH 7.0。
5L发酵罐培养时培养基装液量为3L，以100g/L MgCO3作为pH缓冲，发酵罐混合气(N2∶CO2＝4∶1)通气量为0.6L/min，以保持发酵体系的厌氧环境。将保藏编号为CGMCC No.1716的菌株在种子斜面培养基中进行平板划线后，在厌氧培养箱中培养，控制培养箱中混合气比例为N2∶CO2∶H2＝8∶1∶1，培养36h后的菌株用接种环接一环到含有50ml种子液体培养基的100ml血清瓶中，转速150r/min，37℃培养12小时后用于上述发酵培养基接种(5L发酵罐)，接种量为5％(v/v)，搅拌转速在300rpm，37℃发酵45小时后丁二酸产量可以达到45g/L，结果见表3。
表3 以MgCO3作为pH缓冲剂进行发酵培养
实施例4种子培养基酵母膏5g/L，蛋白胨5g/L，NaCl 1g/L，NaHCO310g/L，Na2HPO49～15g/L，KH2PO44～12g/L，(斜面培养时加琼脂20g/L)，通入N2∶CO2＝4∶1的混合气2min 121℃灭菌20min，冷却。
发酵培养基葡萄糖100g/L，酵母膏10g/L，蛋白胨15g/L，MnCl20.05g/L，FeCl20.05g/L，CaCl20.05g/L，K2HPO42.0g/L，维生素添加叶酸5mg/L，生物素5mg/L，维生素B125mg/L，硫辛酸5mg/L，烟酸5mg/L，泛酸5mg/L，硫胺素5mg/L，维生素B65mg/L，pH 7.0。
5L发酵罐培养时培养基装液量为3L，分别采用10N氢氧化钠、25％(W/V)碳酸钠和12.5％(W/V)氨水调节pH为6.80，通入N2和CO2混合气(体积比4∶1)，以保持发酵体系的厌氧环境，通气量为0.6L/min。将保藏编号为CGMCC No.1716的菌株在种子斜面培养基中进行平板划线后，在厌氧培养箱中培养，控制培养箱中混合气比例为N2∶CO2∶H2＝8∶1∶1，培养36h后的菌株用接种环接一环到含有50ml种子液体培养基的100ml血清瓶中，摇床转速180r/min，37℃培养12小时后用于上述发酵培养基接种(5L发酵罐)，接种量为5％(v/v)，转速200r/min，37℃发酵培养48小时后，HPLC分析发酵液中有机酸含量，结果如表4表4 不同pH控制方式对产酸影响
由表4可知，采用碳酸钠调节pH，丁二酸产量最高，氢氧化钠次之，氨水最低。
注以上发酵生产丁二酸的实施例中采用的种子培养基和发酵培养基pH未明示的为pH 7.0。
权利要求
1.一种产丁二酸的菌株，其分类命名为产琥珀酸放线杆菌(Actinobacillussuccinogenes)NJ113，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.1716。
2.权利要求1所述的菌株的筛选方法，其特征在于包括下列步骤(1)菌源选择牛的瘤胃中混合菌株；(2)富集培养基为含有富马酸盐的能提供碳源、氮源及无机盐的常规培养基；(3)分离培养基为富集培养基组分另外添加维生素，平板培养时加入琼脂粉；(4)筛选方法称取从牛的瘤胃中取得的混合菌株1.0～5.0g，加入到50～200ml无菌水中制备成瘤胃菌悬液；富集培养时取0.1～1ml瘤胃菌悬液到100ml血清瓶中，血清瓶中富集培养基装液量为20～80ml，30～38℃进行培养18～36h后，培养样品稀释10-6，取0.05～0.2ml的液滴铺在含有分离培养基的平板上，在厌氧培养箱进行培养；厌氧培养箱中含有N2、CO2和H2的混合气体，温度为30～38℃，培养36～48h后的单菌落在含有分离培养基的血清瓶中培养36～48小时；培养结束后，测定每个血清瓶中的丁二酸含量，筛选出高产丁二酸菌株。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于富集培养基为添加了莫能菌素、富马酸二钠、丁二酸二钠和碳酸镁的能提供碳源、氮源及无机盐的常规培养基。
4.利用权利要求1所述的菌株发酵生产丁二酸的方法，其特征是包括下列步骤(1)种子培养基为pH6.0～8.0的含有糖类的能提供碳源、氮源及无机盐的常规液体培养基，斜面培养时加琼脂；发酵培养基为pH6.0～8.0的含有糖类的能提供碳源、氮源及无机盐的常规液体培养基，并加入维生素；(2)斜面与种子培养条件为斜面培养权利要求1所述的菌株在斜面培养基中进行平板划线后，在厌氧培养箱中培养，培养箱含有N2、CO2和H2的混合气体，温度为30～40℃，培养24～48h，用于种子培养基接种和菌株保存；种子培养100ml血清瓶中种子培养基为20～80mL，通入含有N2和CO2混合气，115～121℃灭菌15～30min，冷却后接入斜面培养的权利要求1所述的菌株，培养温度为30～40℃，摇床转速100～200r/min，培养时间为10～16h，用于发酵培养基接种；(3)血清瓶发酵培养100ml血清瓶中发酵培养基为20～80mL，通入含有N2和CO2的混合气，115～121℃灭菌15～30min，冷却后接入经种子培养的权利要求1所述的菌株，培养温度为30～40℃，转速100～200r/min，发酵时间为30～48h，分离提取丁二酸；或者，(4)5L发酵罐发酵培养5L发酵罐中发酵培养基体积为2～4L，接种量为3～7％(v/v)，温度为35～40℃，发酵罐通入含有N2和CO2混合气，以保持发酵体系的厌氧环境，搅拌转速在100～300rpm，发酵过程采用碳酸盐、氨水、NaOH、尿素、有机或无机酸控制pH在6.0～7.4，发酵时间为30～48h，分离提取丁二酸。
5.根据权利要求2或4所述的方法，其特征在于含有N2、CO2和H2的混合气体中各成分比例为N2∶CO2∶H2＝8∶1∶1；含有N2和CO2的混合气体中各成分比例为N2∶CO2＝4∶1。
6.根据权利要求2、3或4所述的方法，其特征在于培养基中碳源为糖类，其中糖类为葡萄糖、蔗糖、木糖、甘露糖、果糖中的一种或多种；氮源为有机或无机含氮化合物，其中无机含氮化合物为乙酸铵、氯化铵中的一种或多种，有机含氮化合物为蛋白胨、酵母膏、玉米浆、牛肉膏中的一种或多种；无机盐为钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、磷酸盐、锰盐、铁盐中的一种或多种；维生素为叶酸、生物素、维生素B12、硫辛酸、烟酸、泛酸、硫胺素或维生素B6中的一种或多种。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于无机盐为氯化钠、磷酸二氢钾、氯化镁、氯化钙、氯化铁、氯化锰中的一种或多种。
8.根据权利要求2所述的菌株的筛选方法，其特征在于富集培养基组分配比为NaCl 0.5～3.0g/L，K2HPO41.0～6.0g/L，MgCl2·6H2O 0.02～0.2g/L，CaCl2·H2O 0.02～0.2g/L，(NH4)2SO40.2～2.0g/L，酵母膏2.0～15.0g/L，蛋白胨2.0～15.0g/L，葡萄糖10.0～50.0g/L，另外添加莫能菌素0.05～0.5mg/L，富马酸二钠10.0～50.0g/L，丁二酸二钠40.0～100.0g/L，碳酸镁10～50g/L；分离培养基为富集培养基组分另外添加叶酸5～20mg/L，生物素5～20mg/L，维生素B125～20mg/L，硫辛酸5～20mg/L，烟酸5～20mg/L，泛酸5～20mg/L，硫胺素5～20mg/L，维生素B65～20mg/L，平板培养时加入20g/L琼脂粉。
9.根据权利要求3所述的方法，其特征在于种子培养基配方为酵母膏2.0～10.0g/L，蛋白胨2.0～10.0g/L，NaCl 0.5～5.0g/L，NaHCO35.0～20.0g/L，Na2HPO49.0～15.0g/L，KH2PO44～12g/L，斜面培养时加琼脂20.0g/L，pH6.0～8.0；发酵培养基配方为葡萄糖10～100g/L，酵母膏10～50g/L，蛋白胨10～50g/L，MnCl20.05～0.5g/L，FeCl20.05～0.5g/L，CaCl20.05～0.5g/L，K2HPO41.0～10.0g/L，维生素添加叶酸5～20mg/L，生物素5～20mg/L，维生素B125～20mg/L，硫辛酸5～20mg/L，烟酸5～20mg/L，泛酸5～20mg/L，硫胺素5～20mg/L，维生素B65～20mg/L，pH6.0～8.0。
全文摘要
本发明公开了一种产丁二酸的菌株及其筛选方法和应用。该菌株分类命名为产琥珀酸放线杆菌(Actinobacillus succinogenes)NJ113，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保存编号为CGMCC No.1716。本发明通过对动物瘤胃中的菌株在含富马酸二钠的培养基中富集培养然后进行分类，得到高产丁二酸的放线杆菌。利用该菌株进行发酵可生产较高浓度的丁二酸，适合工业化生产丁二酸。
文档编号C12P7/40GK1884484SQ20061008541
公开日2006年12月27日 申请日期2006年6月14日 优先权日2006年6月14日
发明者姜岷, 韦萍, 陈可泉, 苏溧, 蔡婷, 王倩楠, 欧阳平凯 申请人:南京工业大学