诊断幽门螺杆菌感染的试剂盒的制作方法

专利名称：诊断幽门螺杆菌感染的试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及医用化学试剂，更具体地说，涉及使用14C-UBT (UreaBreath Test,尿素呼气试验)来诊断幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)感染的试剂背景技术用于检测幽门螺杆菌(Hp)感染的14C-UBT试验以其无痛苦、无创伤、 准确、快速、安全的特点，广泛应用于临床。"C-UBT试验的敏感性和特异性 达90%以上，但是还存在约10%的错判率，主要发生在上消化道出血、近期 使用制酸剂、抗Hp药物病人。如何提高这部份病人"C-UBT试验的准确性率 是进一步提高总体准确性的关键。14C-UBT试验的错判分为假阳性和假阴性。"C-UBT试验造成假阳性的最 主要原因是在胃内其它分泌尿素酶的细菌过生长。 一般情况下，由于胃内的高 酸环境，只有Hp能生存。若胃酸缺乏和胃肠瘀血，严重的萎縮性胃炎、长期 使用制酸剂而停药时间不够长、肝硬化等，可以发生其它分泌尿素酶的细菌过 生长。"C-UBT试验造成假阴性的最主要原因是急性上消化道出血、检査前使用 过Hp敏感药物，如质子泵抑制剂、铋剂、抗生素。有文献报道，上消化道出 血急性期可引起"C-UBT试验结果26.6%假阴性，而无并发症的消化不良假阴 性仅为3.3%;近期使用过质子泵抑制剂可使"C-UBT试验假阴性率高达40%。 为此，现在推荐在出血停止一周、停药1 2周才能进行"C-UBT试验。然而,这种办法在临床上并不适用。因为酸相关性疾病患者停用PPIs后症状会复发。 通过胃内酸化再作"C-UBT可提高近期使用制酸剂病人的敏感性，酸化 试验是指在服用尿素["C]胶囊前30分钟和服用胶襄时，饮下一定剂量的柠檬 酸水溶液，使胃内的pH达到2左右。在该酸性环境下，Hp尿素酶会被强烈 激活，而其它细菌产生的尿素酶则失去活性，因为前者的最适pH为酸性，而 后者的最适pH为中性。这样，胃内经酸化后， 一方面使被抑制的Hp尿素酶 活化，减少了 "C-UBT试验的假阴性率；另一方面使其它细菌过生长产生的 尿素酶失去活性，减少了 "C-UBT试验假阳性率，从而使"C-UBT试验的准 确性进一步提高。发明内容本发明的目的是提高"C-UBT试验的准确性，降低"C-UBT试验的假阳 性和假阴性。本发明是这样实现发明目的的提供一种诊断幽门螺杆菌感染的试剂盒， 包括尿素["C]胶囊、C02集气剂、闪烁液、吹气用的导管，其特征在于，还包 括增敏剂。在本发明诊断幽门螺杆菌感染的试剂盒中，每剂所述增敏剂含拧檬酸l 5克。在本发明诊断幽门螺杆菌感染的试剂盒中，每剂所述增敏剂含苹果酸l 5克。在本发明诊断幽门螺杆菌感染的试剂盒中，每剂增敏剂等量分装为两份。 在本发明诊断幽门螺杆菌感染的试剂盒中，所述增敏剂还包括甜味剂。 在本发明诊断幽门螺杆菌感染的试剂盒中，所述甜味剂是安赛蜜，每剂所 述增敏剂含安赛蜜0. 05 0. 5克。在本发明诊断幽门螺杆菌感染的试剂盒中，所述甜味剂是阿斯巴甜，每剂所述增敏剂含阿斯巴甜0. 05 0. 5克。本发明诊断幽门螺杆菌感染的试剂盒中包括增敏剂，能提高通过14C-UBT诊断幽门螺杆菌感染的准确性，尤其提高消化道出血、近期使用制酸剂、抗Hp药物病人进行常规的"C-UBT诊断幽门螺杆菌感染的准确性。此外，所述的增敏剂中包括甜味剂，改善了增敏剂的口感，方便病人服用。
具体实施方式
实施例1 一、材料和方法1、 实验对象十二指肠溃疡(DU)并出血的住院病人28例。男23例， 女5例，年龄19 75岁，平均33岁。全部病例均为急诊胃镜诊断。F列病例 不纳入研究年龄小于18岁，怀孕期及哺乳期妇女，残胃，生命体征不稳定。2、 实验方法病人住院后，接受常规H2受体阻滞剂或质子泵抑制剂治疗。 对急诊胃镜发现DU者进行常规胃粘膜活检，胃窦及胃体各取2块，作Gemsa 染色镜检Hp，以此结果判断14C-UBT的诊断价值。在胃镜检査当天或次曰进 行两次"C-UBT。第次"C-UBT按常规步骤(在该实施例中简称为UBT-1)，具体步骤如下(1) 、受试者用约20ml凉饮用水送服剂量为0.75uCi的尿素["C]胶囊一 粒后，静坐25分钟。(2) 、开启C02集气剂一瓶(内含C02吸收剂和指示剂)，插入一洁净的 有防倒流装置的气体导管，导管下端应浸入集气剂液内，受试者通过导管吹气， 力度适中以免液体溅出，严禁倒吸！当C02集气剂由紫红色变为无色时吹气(约1 3分钟)，若超过3分钟褪色不全，亦停止吹气，此时C02集气剂 饱和，但因唾液等进入干扰非水滴定系统而影响变色，并不影响测试结果。(3) 、气体样品收集完毕，在瓶盖上作好标记编号(不可在瓶壁标记)， 用洁净吸管(甲醇冲洗)向样品瓶内加入稀释闪烁液4.5ml，加盖密封，用洁 净卫生纸擦净瓶壁和瓶底。若加入闪烁液后出现分层不溶现象，再加数滴甲醇 即可溶解。(4) 、溶解摇匀后于液闪仪上作样品碳"C放射性(dpm)测定2分钟。(5) 、阴性与阳性判断14C - UBT》lOOdpm/mmol C02时，判定受试 者为Hp阳性；14C-UBT<100dpm/mmolCOJ、t，判断受试者为Hp阴性。UBT-1结束后，病人禁食6小时。然后进行改良的14C-UBT (在该实施例 中简称为UBT-2)，在进行UBT-2前，将一剂增敏剂配成100ml的溶液。每剂 所述增敏剂含柠檬酸5克，含安赛蜜0. 5克。在服用尿素["C]胶囊前30分钟， 饮下50ml所述溶液；在服用尿素["C]胶囊时，用剩下的50ml所述溶液吞服尿 素["C]胶囊。UBT-2的其他步骤与UBT-1的对应步骤相同，此不赘述。二、结果28例DU并出血病人经组织学检査证实Hp阳性23例(82.1%)。 23例 Hp阳性病人的UBT-l "C02的呼出率为(147土29)dpm，在UBT-2中升高至 (361 ±40)dpm(t = -5.582，p=0.000)。UBT-l中有11例阳性，阳性率为47.8% (11/23)，假阴性率为52.2% (12/23)。 UBT-2中有11例转为阳性，阳性率升 高至95.7% (22/23)，仅1例仍为阴性，假阴性率降至4.3% (1/23)。假阴性 率在酸化前后比较差异有显著性(x、5.14，P〈0.05)。5例Hp阴性病人UBT-1 的"C02呼出率为(144 ±52) dpm，在UBT-2中降至(49 ± 15) dpm，但差 异无显著性(t = 2.095， P = 0.104)。 2例UBT-1假阳性病人的UBT-2结果为阴性。三、结论在该实验中，使用本发明的试剂盒作的改良的14C-UBT (UBT-2)， C02 呼出率显著上升，原12例假阴性者有11例转为阳性，UBT敏感性升高至95.70/0 (22/23)，假阴性率降至4.3% (1/23)。这是因为本发明的试剂盒包括增敏剂， 该增敏剂能够明显激活Hp尿素酶的活性，大大降低"C-UBT检测的假阴性率， 尤其降低胃出血病人的"C-UBT检测的假阴性率，增加检査的敏感性。实施例2一、材料与方法1、 实验对象消化科门诊溃疡型功能性消化不良病人58例，年龄23 45，平均年龄27岁，其中男性21例，女性37例。全部病例复合功能性胃肠 病罗马II标准，并且全部病例作胃镜检査，胃粘膜组织病理检査Hp阴性，常 规"C-UBT (在该实施例中简称为UBT-1)阴性。妊娠、哺乳期妇女不纳入研究。2、 实验方法病人清晨空腹口服剂量为27.75 kBq的尿素["C]胶囊1粒， 于25min后收集呼气标本，液体闪烁计数仪测量呼气"C放射性活性。14(:02 > lOOdpm/mmol C02时，判定受试者为Hp阳性；"C02 < 100 dpm/mmol C02时， 判断受试者为Hp阴性。UBT-1阴性的入选病人每日早晚各服用PPI-雷贝拉唑 10mg，疗程7天。于服药的第6天进行第二次常规14C-UBT (在该实施例中 简称为UBT-2)。于第7天进行第三次改良l4C-UBT (在该实施例中简称为 UBT-3)，改良的内容是在UBT-3前30min，将增敏剂配置成100ml的溶液， 该溶液中柠檬酸的含量是0.1mol/L。在UBT-3的前30min以及UBT-3时，各饮50ml上述溶液。二、 结果"C-UBT阴性病人在服用雷贝拉唑1周后重复试验结果表明，C02呼出率 显著性增加，从UBT-1的(24.0±10.8) dpm/mmolC02增加到UBT-2的(63.6 ± 16.8) dpm/mmol C02 (t=2.310， P<0.05)，并出现9例假阳性诊断结果 (UBT〉100dpm/mmolCO2)，占16% (9/58).通过使用本发明的试剂盒进行改 良的UBT-3之后，"C02呼出率为(21.0± 7.8) dpm/mmol C02，与UBT-1相 比，差异并无显著性(t-1.251， p<0.05)。 9例假阳性者又恢复真阴性。三、 结论包括雷贝拉唑在内的各种PPI能强烈地、持久地抑制胃酸分泌，会造成胃 内细菌过生长。导致本研究58例Hp阴性、"C-UBT也阴性的功能性消化不 良病人在服用雷贝拉唑1周后作"C-UBT，出现9例假阳性结果诊断(16%)。 在使用本发明的试剂盒进行改良的"C-UBT (UBT-3)时，这9例假阳性者又 恢复了真阴性。这是因为本发明的试剂盒包括增敏剂，该增敏剂能够进行胃内 酸化，在胃内产生利于Hp生长的高酸环境，降低常规"C-UBT检测的假阳性 率，增加检査的敏感性。实施例3 、材料与方法1、 实验对象消化科门诊功能性消化不良患者23例，年龄19 35岁， "C均为阳性，其中男性8例，女性15例。所有研究对象均签署知情同意书。2、 实验方法病人清晨空腹口服剂量为27.75 kBq尿素["C]胶囊1粒， 于25min后收集呼气标本，液体闪烁计数仪测量呼气"C放射性活性。14032呼出量》1.67Bq/mmol时，判定受试者为Hp阳性；14C02呼出量<1.67 Bq/mmol 时，判断受试者为Hp阴性。第一次常规"C-UBT(在该实施例中简称为UBT-l) 阳性功能性消化不良患者在签署知情同意书后继续进行以下试验晨起早餐前 15 30 min 口服奥美拉唑40mg/d，疗程14d。于服药后第13天进行第二次常 规14C-UBT (在该实施例中简称为UBT-2)。在服药第14天进行第三次改良的 14C-UBT (在该实施例中简称为UBT-3)，改良的内容是在UBT-3前30min， 将一剂增敏剂配置成100ml的溶液，该溶液中柠檬酸的含量是0.1mol/L。在 UBT-3的前30min以及UBT-3时，各饮50ml上述溶液。二、 实验结果23例患者在这3次"C-UBTC02呼出量分为(5.57 ±3.90)、 ( 1.98 ± 1.42) 和(4.93 ±3.77) Bq/mmol。患者服用奥美拉唑2周后14C02呼出量明显减少， 差异有显著性(t = 5.867， P = 0.000)，假阴性10例，占43.5%。 UBT-3的C02 呼出量与UBT-1的相比，差异无显著性(1=0.952， P=0.351 )，但明显高于UBT-2 的(1 = -4.538， P = 0.000);假阴性2例，占8.7%，明显低于UBT-2 (x2= 6.66， P<0.01)。三、 实验结论使用PPI后，胃内PH值身高，抑制了HP尿素酶活性，导致以检测尿素 酶活性为基础的Hp检验假阴性。而本发明的试剂盒中包含了增敏剂，采用增 敏剂的改良"C-UBT能有效地消除这种假阴性。实施例4一、材料与方法1、实验对象在广东深圳市南山医院适合作"C-UBT的职工志愿者挑选试验对象。首先在志愿者早上未进食时(即空腹时)进行常规的14C-UBT (在 该实施例中简称为UBT-1 )，具体步骤与实施例1所述的常规14C-UBT步骤相 同。选取UBT-阳性志愿者30名，阴性者30名。2、实验方法在进行了UBT-1后，让这60名志愿者每天早晚各口服洛 赛克20mg，连服14天。在服药第13天进行第2次常规14C-UBT (在该实施 例中简称为UBT-2)。 UBT-2的具体步骤与UBT-1的步骤相同，此不赘述。第14天进行改良的第3次14C-UBT (在该实施例中简称为UBT-3)。在进 行UBT-3之前，将增敏剂配成100ml的溶液，这100ml溶液中，含柠檬酸1 克，含安赛蜜0.05克。在服用尿素["C]胶囊前30分钟，饮下50ml所述溶液； 在服用尿素["C]胶囊时，用剩下的50ml所述溶液吞服尿素["C]胶囊。改良的 "C-UBT试验的其他步骤与常规"C-UBT试验的步骤相同，此不赘述。二、结果与讨论第1次常规"C-UBT阳性者，第2次常规14C-UBT结果下降，第3次改 良"C-UBT结果回升。原理是洛赛克制酸后，Hp受抑制，影响了第2次常规 14C-UBT的准确度；在进行改良的第3次"C-UBT时，吞服了增敏剂进行酸化， 激活了 Hp尿素酶，因为Hp尿素酵最适PH为酸性。第1次常规"C-UBT阴性者，第2次常规"C-UBT结果上升，第3次改 良"C-UBT结果问降。原理是洛赛克制酸后，无Hp者胃酸缺乏，其它尿素酶 细菌过生长，影响T第2次常规"C-UBT的准确度；在进行改良的第3次 "C-UBT时，吞服了增敏剂进行酸化，抑制了非Hp尿素酶，因为非Hp尿素 酶最适pH在中性。从以上实施例可以得到这个结论本发明诊断幽门螺杆菌的试剂盒能够提 高"C-UBT试验的准确性，降低"C-UBT试验的假阳性和假阴性。在该实施例中，增敏剂中包含的是柠檬酸，但本发明不局限于此。例如， 本发明的增敏剂可以包括苹果酸，或者柠檬酸与苹果酸的组合。为了方便存储 与运输，本发明诊断幽门螺杆菌的试剂盒中的增敏剂为粉状，每剂增敏剂含拧檬酸或苹果酸1 5克。为了方便使用，还可以将每剂增敏剂等量分装成两份。 为了改善受试人员的口感，还可以在增敏剂中添加甜味剂。例如，每剂增敏剂可包含0.05 0.5克的安赛蜜，但本发明不局限于使用安赛蜜，例如，每 剂增敏剂可以包含0. 05 0. 5克的阿斯巴甜。
权利要求
1. 一种诊断幽门螺杆菌感染的试剂盒，包括尿素[14C]胶囊、CO2集气剂、闪烁液、吹气用的导管，其特征在于，还包括增敏剂。
2、 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，每剂所述增敏剂含柠檬 酸1 5克。
3、 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，每剂所述增敏剂含苹果 酸1 5克。
4、 根据权利要求1至3中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，每剂增 敏剂等量分装为两份。
5、 根据权利要求1至3中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述增 敏剂还包括甜味剂。
6、 根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述甜味剂是安赛蜜， 每剂所述增敏剂含安赛蜜0. 05 0. 5克。
7、 根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述甜味剂是阿斯巴甜， 每剂所述增敏剂含阿斯巴甜0. 05 0. 5克。
全文摘要
本发明涉及医用化学试剂，更具体地说，涉及一种使用¹⁴C-UBT(UreaBreath Test，尿素呼气试验)来诊断幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)感染的试剂盒，包括尿素[¹⁴C]胶囊、CO₂集气剂、闪烁液、吹气用的导管以及还包括增敏剂。本发明诊断幽门螺杆菌感染的试剂盒中包括增敏剂，能提高通过¹⁴C-UBT诊断幽门螺杆菌感染的准确性，尤其提高消化道出血、近期使用制酸剂、抗Hp药物病人进行常规的¹⁴C-UBT诊断幽门螺杆菌感染的准确性。此外，所述的增敏剂中包括甜味剂，改善了增敏剂的口感，方便病人服用。
文档编号C12Q1/04GK101230381SQ20071007301
公开日2008年7月30日 申请日期2007年1月23日 优先权日2007年1月23日
发明者张厚德, 金桂花, 黄晋杰 申请人:张厚德